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腺病毒-阴离子脂质体复合物的制备和体外表征: 2012年; 为了制备腺病毒-阴离子脂质体复合物(AL-Ad5),首先利用HEK 293细胞大量扩增了带有绿色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒,并以氯化铯两步密度梯度离心法进行纯化,再通过细胞病变效应(CPE)法、壳蛋白免疫法和定量聚合酶链反应(Q-PCR)法分别测定腺病毒滴度。以中心组合设计法优化处方和制备条件,通过钙离子融合法制备目标复合物AL-Ad5,以透射电镜和动态光散射法分别对其外观形态、粒径和zeta电位进行考察;并制备双色荧光标记的复合物,通过激光共聚焦技术观察该复合物被MDCK细胞摄取后的胞内定位,以考察阴离子脂质体对腺病毒的包合情况。结果表明,目标复合物分布均匀,粒径和zeta电位分别为(211±10)nm和(-41.2±2.2)mV。激光共聚焦实验结果表明,红色荧光标记的腺病毒和绿色荧光标记的脂质体在MDCK细胞内的定位一致。由此说明,阴离子脂质体能够较好地包裹腺病毒以形成腺病毒-阴离子脂质体复合物。; 钟志容万瑜石三军张志荣孙逊; 关键词：腺病毒激光共聚焦定量聚合酶链反应

PEG修饰的腺病毒-阴离子脂质体复合物的制备及分离纯化: 2013年; 目的制备并分离纯化PEG修饰的腺病毒-阴离子脂质体复合物。方法采用薄膜分散法制备空白阴离子脂质体,利用钙离子融合法制备阴离子脂质体与腺病毒的复合物,最后用后插入法制备PEG修饰的腺病毒-阴离子脂质体复合物。通过蔗糖密度梯度离心法分离制备的复合物,分别测定分离得到的各组分中脂质体、PEG-脂质材料及腺病毒的含量。结果成功制备了PEG修饰的腺病毒-阴离子脂质体复合物,连接到脂质体上的PEG-脂质占加入总量的28.9%,被脂质体包裹的腺病毒占加入量的35.9%。结论通过蔗糖密度梯度离心可得到纯化的PEG修饰的腺病毒-阴离子脂质体复合物。; 万瑜樊戈睿郑洁孙逊; 关键词：PEG 腺病毒

一种酶促式断裂PEG化脂质材料: 本发明提供了一种酶促式断裂PEG修饰的胆固醇脂质材料，并提供了该材料的合成方法。使用该材料制备的脂质体可躲避免疫系统的吞噬，同时在肿瘤细胞分泌的基质金属蛋白酶的作用下，PEG可以脱落下来。既达到肿瘤靶向性的目的，又不会阻...; 孙逊万瑜张志荣龚涛

PEG修饰的紫杉醇固体脂质纳米粒的制备及其性质研究被引量：3: 2014年; 目的制备PEG修饰的固体脂质纳米粒,并研究其性质。方法采用薄膜超声法制备包载紫杉醇的固体脂质纳米粒,再利用EDC/NHS脱水缩合法在纳米粒表面进行PEG修饰,得到PEG修饰的固体脂质纳米粒。用苦味酸-分光光度法测定PEG的含量;用透射电镜考察纳米粒的形态特点;采用凝胶柱洗脱联合HPLC测定包封率;筛选纳米粒的最佳冻干条件。结果成功制备了PEG修饰的紫杉醇固体脂质纳米粒,通过脱水缩合法连接到纳米粒上的PEG化多肽占加入总量的26.5%;紫杉醇固体脂质纳米包封率为75%,载药量为7%。结论制备的PEG修饰的紫杉醇固体脂质纳米粒具有较整齐的外观形态、较高载药量和较好的稳定性。; 郑洁万瑜樊戈睿孙逊; 关键词：PEG修饰紫杉醇固体脂质纳米粒

小分子聚乙烯亚胺与腺病毒结合增强基因转染效率的研究: 2012年; 目的提高重组腺病毒在细胞中,特别是缺乏柯萨奇腺病毒受体的细胞中的转染效率。方法将阳离子材料聚乙烯亚胺PEI与重组腺病毒通过电荷作用形成复合物,用激光粒度仪及电位分析仪测定其粒径和电位;以表达β半乳糖苷酶的重组腺病毒作为模型病毒,研究其在富含(A549)或者缺乏(MDCK、LLC)柯萨奇腺病毒受体细胞中的转染效率和毒性,并用荧光标记复合物,观察其进入细胞的能力。结果与聚乙烯亚胺结合形成复合物可明显促进腺病毒进入细胞的能力,从而提高腺病毒在各种细胞中的转染效率,同时发现小分子的PEI-2 kD由于其较好的生物相容性,对腺病毒进入细胞后的传递影响较小,所以最终的基因传递效率要显著优于PEI-25 kD;PEI-2 kD在本复合物中表现出的细胞毒性要小于PEI-25 kD。结论PEI-2 kD可以用于病毒载体和非病毒载体结合的基因传递研究。; 陈思穆韩剑锋曾琴万瑜孙逊; 关键词：聚乙烯亚胺腺病毒基因传递

一种酶促式断裂PEG化脂质材料: 本发明提供了一种酶促式断裂PEG修饰的胆固醇脂质材料，并提供了该材料的合成方法。使用该材料制备的脂质体可躲避免疫系统的吞噬，同时在肿瘤细胞分泌的基质金属蛋白酶的作用下，PEG可以脱落下来。既达到肿瘤靶向性的目的，又不会阻...; 孙逊万瑜张志荣龚涛; 文献传递

阴离子脂质体介导的腺病毒/卡莫司汀共转运系统载药量测定: 2012年; 目的建立一套有效可靠的检测方法,以测定阴离子脂质体介导的腺病毒和化疗药卡莫司汀共转运载体系统中腺病毒和卡莫司汀的含量。方法以钙离子融合法制备共转运载体复合物;根据腺病毒(Ad5)的hexon基因序列设计用于Taqman探针荧光定量聚合酶链式反应(PCR)的引物和探针序列,优化反应体系,从而准确测定腺病毒含量;优化色谱条件,建立针对共转运载体复合物检测卡莫司汀含量的高效液相色谱法。结果以荧光定量聚合酶链式反应法测得共转运载体复合物中腺病毒载药量为(23.2±1.8)%;高效液相色谱法测得卡莫司汀在共转运载体复合物中的载药量为(55±2.8)%。结论本实验成功建立了分别用于测定共转运载体系统中腺病毒和卡莫司汀含量的荧光定量聚合酶链式反应和高效液相色谱法;这两种检测方法操作简便、准确可靠,具有一定的普遍适用性。; 钟志容刘中兵高岑万瑜石三军张志荣孙逊冯朝林曹立辉; 关键词：腺病毒荧光定量PCR法高效液相色谱法

一种新型肿瘤靶向基因传递系统——酶促式释放腺病毒载体的构建: 目的制备酶促式断裂PEG修饰的腺病毒-阴离子脂质体复合物（PPC-AL-Ad5）并考察其理化性质、转染效率、免疫反应和诱导产生抗体的能力。方法首先合成酶促式断裂PEG脂质材料,接着制备PPC-AL-Ad5复合物。然后考察...; 万瑜张志荣孙逊; 关键词：PEG 腺病毒基质金属蛋白酶; 文献传递

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万瑜