于游
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-34a靶向调控NOTCH1基因对SW480细胞增殖的影响被引量：6
- 2012年
- 目的探讨miR-34a靶向调控NOTCH1基因表达而对结肠癌SW480细胞增殖的影响。方法通过生物信息学预测,NOTCH1为miR-34a特异性靶基因。构建含miR-34a结合位点的NOTCH1基因3'-UTR域荧光素酶报告载体。通过荧光素酶报告载体系统检测miR-34a与NOTCH1的3'-UTR相互作用对荧光素酶活性的影响;免疫印迹技术检测miR-34a对NOTCH1蛋白表达的影响。采用MTT法及流式细胞检测转染miR-34a对SW480细胞增殖的影响。结果经过酶切及基因测序鉴定,NOTCH1基因3'-UTR序列的双荧光素酶报告重组质粒构建成功;荧光素酶结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的SW480组53.4%(P=0.003 8);而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的HEK293组145%(P=0.002 1),说明miR-34a有与NOTCH1的3'-UTR位点相结合。免疫印迹结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物,NOTCH1蛋白的表达水平是未处理SW480组下降53.6%(P<0.05);而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物,NOTCH1蛋白的表达水平较未处理HEK293组升高78.9%(P=0.03),说明miR-34a负性调控NOTCH1蛋白的表达。miR-34a过表达的SW480细胞较未处理的SW480的生长速度明显减慢(P<0.05),且阻滞在G0～G1期,说明miR-34a过表达后能抑制SW480细胞增殖。结论 miR-34a负性靶向调控NOTCH1基因的表达而抑制SW480细胞的增殖。
- 邵新宏于游张才全
- 关键词：微小RNANOTCH1基因细胞增殖结直肠癌
- 分化抑制因子1对结肠癌HT-29细胞增殖的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨检测分化抑制因子1(Id1)对结肠癌HT-29细胞增殖中的影响。方法 HT-29转染Id1表达质粒及合成Id1干扰序列转染HT-29细胞后,RT-PCR和Western blot法检测VEGF mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况。结果 Id1过表达能显著上调VEGF mRNA和蛋白表达(P<0.05),促进细胞的生长,Id1抑制后能显著下调VEGF mRNA和蛋白表达(P<0.05),减缓细胞的生长。结论在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1可通过调控VEGF途径来影响结肠癌细胞增殖,在肿瘤血管生成中发挥重要作用。Id1有望成为结肠癌治疗的一个新靶点。
- 于游张才全
- 关键词：结肠肿瘤分化抑制因子1细胞增殖
- Id1对结肠癌HT-29细胞VEGF表达及增殖的影响
- 2012年
- 目的探讨分化抑制因子1(inhibitor of differentiation-1,Id1)对结肠癌HT-29细胞VEGF表达的影响及Id1在结肠癌细胞增殖中的作用。方法 HT-29转染Id1表达质粒及Id-1干扰序列后,采用RT-PCR方法和Western blot法检测VEGF mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况。结果 Id1过表达能显著上调VEGF mRNA和蛋白表达(P<0.01),促进细胞的生长(P<0.01);Id1抑制后能显著下调VEGF mRNA和蛋白表达(P<0.01),减缓细胞的生长(P<0.01)。结论在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1可通过正性调控VEGF影响结肠癌细胞增殖。
- 于游张才全
- 关键词：分化抑制因子1结肠癌HT-29细胞增殖
- NOTCH1基因3＇-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的:构建含NOTCH1基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体,并验证其活性。方法:使用PCR方法扩增含NOTCH1基因3'-UTR区序列,插入到双酶切的双荧光素酶报告载体中;使用生物信息学方法预测可能与NOTCH1基因3'-UTR相互作用的miRNA;使用lipofectamine 2000转染试剂将重组质粒或空质粒和miR-34a inhibitor或control真核表达载体共转染HEK293T细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果:得到含NOTCH1基因3'-UTR(1 648 bp)序列的双荧光素酶报告重组质粒,并用凝胶电泳和基因测序的方法验证。NOTCH1基因3'-UTR上可能有miR-34a的调控作用靶点;用重组质粒和miR-34a inhibitor共转染的HEK293T组的荧光素酶活性比空质粒组高45%。结论:含NOTCH1基因3'-UTR双荧光素酶报告载体构建成功,miR-34a对NOTCH1基因有调控作用。
- 邵新宏韩渊于游张才全
- 关键词：NOTCH1基因调控
- 分化抑制因子1对结肠癌HT-29细胞增殖的影响被引量：6
- 2013年
- 目的检测分化抑制因子1(Id1)对结肠癌HT-29细胞VEGF表达的影响,探讨其在结肠癌增殖中的作用。方法 HT-29转染Id1表达质粒,RT-PCR方法和Western印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况;合成Id-1干扰序列转染HT-29细胞后,RT-PCR及Western印迹检测HT-29细胞VEGF mRNA和蛋白的表达情况,采用MTT法检测各组细胞增殖情况。结果 Id1表达质粒空白组、对照组(空载体组)、过表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.002 99±0.000 687、0.003 49±0.001 34、0.031 3±0.006 05(P<0.01);VEGF/GAPDH蛋白分别为:0.132±0.035 1、0.131±0.053 0、0.245±0.032 6(P<0.01),MTT实验显示相对对照组,过表达组增殖明显快(P<0.01)。Id-1干扰空白组、对照组(空载体组)、抑表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.006 16±0.000 829、0.006 26±0.000 447、0.002 3±0.000 308(P<0.01);VEGF/GAPDH蛋白分别为:0.450±0.039 3、0.464±0.023 1、0.231±0.027 3(P<0.01)。MTT实验显示相对对照组,抑表达组增殖明显减慢(P<0.01)。Id1过表达能显著上调VEGF mRNA和蛋白表达,提高细胞的生长,Id1抑制后能显著下调VEGF mRNA和蛋白表达,减缓细胞的生长。结论在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1通过Id1↑→VEGF↑途径来影响结肠癌细胞增殖,在肿瘤血管生成中发挥重要作用。Id1有望成为结肠癌治疗的一个新靶点。
- 于游张才全
- 关键词：分化抑制因子1结肠癌HT-29细胞增殖血管内皮生长因子
- 淋巴结微转移检测对大肠癌病理分期的影响被引量：4
- 2011年
- 目的研究淋巴结微转移对结肠癌患者病理分期的影响。方法对1 120枚结直肠癌患者淋巴结进行常规HE染色和CK20、CEA免疫组化微转移的检测,并对结果进行统计学分析。结果 CK20检测出有微转移淋巴结103枚,占9.2%(103/1 120),CEA检测出有微转移淋巴结88枚,占7.9%(88/1 120)。CK20联合CEA检测出130枚淋巴结检出有微转移,占11.6%(130/1 120)。肿瘤浸润愈深,微转移愈易发生(P<0.05),分化程度低者,微转移阳性率高(P<0.05)。130枚淋巴结检出有微转移,13例TNM分期提高,其中I期→Ⅲ期2例,Ⅱ期→Ⅲ期11例,HE染色重新分期率为18.6%(13/70)。结论结直肠癌淋巴结免疫组化检测有助于更准确地进行结直肠癌的临床病理分期。
- 于游张才全
- 关键词：结直肠肿瘤微转移肿瘤分期
