伍志坚
- 作品数：8 被引量：18H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家攀登计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用于重组腺伴随病毒生产的全功能辅助病毒的产生及其用途
- 本发明包括了一种装载了2型腺伴随病毒(AAV－2)rep－cap基因的重组单纯疱疹病毒(HSV1－rc)的产生方法及其在重组腺伴随病毒(rAAV)生产中的用途。这种重组单纯疱疹病毒能提供rAAV质粒在细胞内复制和包装成r...
- 伍志坚吴小兵侯云德
- 文献传递
- 携带人血管抑制因子K1-5基因的腺相关病毒载体的构建及其对血管内皮细胞的抑制作用被引量：1
- 2005年
- 目的构建含人血管抑制因子K15基因的重组腺相关病毒载体rAAVK5,研究其在体外表达及对血管内皮细胞的抑制作用。方法将K15基因插入通用型AAV载体质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAVK5。用pSNAVK5转染BHK21细胞,经G418选择培养基培养载体细胞株BHKK5。用辅助病毒感染BHKK5细胞包装出重组病毒rAAVK5。研究rAAVK5感染BHK细胞获得的培养上清对血管内皮细胞的抑制作用。结果已获得了重组病毒rAAVK5,滴度达0.5×1012v.g.ml。免疫斑点印迹实验表明,rAAVK5可介导人血管抑制因子K15的体外表达,表达产物对血管内皮细胞增殖具有抑制作用。结论重组病毒rAAVK5在体外对血管内皮细胞的增殖具有抑制作用。为进一步用rAAV病毒载体进行抗血管生成基因治疗的动物实验及临床应用打下了基础。
- 高雪军伍志坚封多佳吴小兵侯云德
- 关键词：血管内皮细胞腺相关病毒载体BHK-21细胞选择培养基BHK细胞基因插入
- 以粘粒为基础构建重组单纯疱疹病毒及其用途
- 本发明叙述了一种以含有HSV1全基因组的5个粘粒(cos6,cos28,cos14,cos56,cos48)为基础的简便而高效地产生重组单纯疱疹病毒的方法。将含有外源基因的粘粒与其余4个粘粒等摩尔混合,经PacI酶切后共...
- 吴小兵伍志坚董小岩侯云德
- 文献传递
- 质粒型单纯疱疹病毒系列载体的构建和用途
- 本发明涉及3种质粒型单纯疱疹病毒载体的构建和用途。这些载体分别含有以下共同元件:HSV－1复制起点oriS序列及IE68启动子、lacZ基因、SV40polyA、HSV－1包装信号“a”序列和大肠杆菌质粒骨架。首先构建了...
- 吴小兵董小岩蒋立新伍志坚侯云德
- 文献传递
- 单纯疱疹病毒I型扩增子系列载体的构建被引量：6
- 1999年
- 我们先前已报道了构建成一种能在ＨＳＶｔｓＫ株辅助下进行复制和包装，并表达β－半乳糖苷酶基因ｌａｃＺ的ＨＳＶ－１扩增子质粒ｐＨＳＬ，以及它的应用〔１〕。该质粒中依次含有ＨＳＶ－１复制起点ｏｒｉＳ序列及ＩＥ６８启动子、ｌａｃＺ基因、ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ、ＨＳＶ－１包装信号‘ａ’序列和大肠杆菌质粒骨架。然而，该质粒中的报告基因ｌａｃＺ无法用简单的酶切方法卸载下来，继而装入目的基因。本研究在此基础上，新构建了一系列质粒型单纯疱疹病毒载体。首先构建了ＨＳＶ－１扩增子载体质粒ｐＨＳＶＩＥ６８，在ＩＥ６８启动子的下游带有可供外源基因插入的ＨｉｎｄⅢ、ＳａｌＩ、ＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ等克隆位点，其后没有ｐｏｌｙＡ加尾信号。为检验ｐＨＳＶＩＥ６８载体的有效性，将报告基因ｌａｃＺ－ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ片段通过ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨＩ位点插入该载体中，构建成重组扩增子质粒ｐＨＳＶ－ｌａｃＺ１。将该质粒转入ＢＨＫ细胞，并辅以ＨＳＶ－１ｔｓＫ株病毒感染，３１℃培养４８～７２小时后收获的细胞上清感染新鲜的ＢＨＫ细胞，用Ｘ－ｇａｌ液染色可见有大量细胞蓝染，提示所构建的ｐＨＳＶＩＥ６８质粒能有效地工作。在此基础上，我们又构建了含有ＳＶ４０ｐｌｏｙ?
- 吴小兵董小岩蒋立新舒跃龙伍志坚颜子颖侯云德
- 关键词：LACZ基因单纯疱疹病毒HSV-1
- 系列通用型腺病毒伴随病毒载体的构建及用途
- 本发明涉及一系列通用型腺病毒伴随病毒(adeno－associated virus,AAV)载体的构建,这些载体包括pWAV－1、pWAV－2、pSNAV－1和pSNAV－2。其共同特征是每种载体均提供2型AAV两端的I...
- 伍志坚吴小兵曹晖侯云德
- 文献传递
- 腺相关病毒载体介导的人内皮抑素的体外表达及对内皮细胞抑制作用的研究被引量：12
- 2002年
- 抗血管生成基因治疗是一有希望的抑制肿瘤生长及转移的方法。在实验中构建了含有人内皮抑素 (endo statin)基因的重组腺相关病毒载体rAAV -hE。所包装纯化的重组病毒滴度达 0 5× 10 12 v g /ml。rAAV -hE能有效感染培养细胞 ,EIA法检测培养液上清中内皮抑素浓度达 36 4 2ng/ml。rAAV介导所表达的内皮抑素对人脐静脉内皮细胞 (ECV - 30 4 )和牛毛细血管内皮细胞 (BCE)具有抗增殖抑制作用 ,抑制率分别为 6 8 1%和 4 1 6 %。此结果为进一步的动物实验奠定了基础 。
- 高雪军伍志坚吴小兵封多佳侯云德
- 关键词：腺相关病毒载体介导人内皮抑素体外表达抗血管生成
- 可用于大规模生产的重组腺病毒伴随病毒生产方法及用途
- 本发明提出一种“一株载体细胞/一株辅助病毒”生产重组AAV病毒的方法。其中载体细胞株是将含有外源基因表达单位的重组AAV载体质粒导入哺乳动物细胞,经抗性筛选获得的整合了可拯救的重组AAV DNA的稳定传代的细胞株。辅助病...
- 吴小兵伍志坚侯云德
- 文献传递
