何乐亚
- 作品数：9 被引量：16H指数：2
- 供职机构：华中科技大学医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 异时相Cyclin B1的表达与细胞凋亡的关系及其机制的探讨
- 本研究分为三部分：
第一部分：四环素可控表达Cyclin B1的载体构建和单克隆细胞株的筛选
目的：筛选四环素诱导细胞周期素B1(Cyclin B1)可控表达的293单克隆细胞株(Tetracycline-R...
- 何乐亚
- 关键词：细胞凋亡多聚酶链反应流式细胞仪质谱鉴定
- 文献传递
- PPH术致吻合口近端肠管穿孔的临床分析(附4例报告)被引量：2
- 2017年
- 近10余年来,因PPH手术术后恢复较快、术后疼痛感较轻,常应用于Ⅲ~Ⅳ期痔或并出血患者。但PPH术所致致的吻合口近端直肠穿孔,可引起直肠周围间隙感染、后腹膜严重感染、腹腔感染,危及患者生命甚至导致死亡。迄今,关于此并发症的报道相对较少,本文总结4例PPH术后吻合口完整的直肠穿孔病例资料,现报告如下。
- 黄丹魏欣罗学来何乐亚吴剑宏杨传永曹志新
- 关键词：吻合口近端PPH术穿孔病
- 胃癌中CDK1和CDK2的表达及预后意义被引量：7
- 2010年
- 目的探讨胃癌中CDK1和CDK2的表达情况及预后意义。方法应用免疫组化S-P法对48例各期胃癌和癌旁正常组织中CDK1和CDK2的表达情况进行检测。结果早期胃癌中CDK1和CDK2中表达较低(P<0.05),进展期胃癌中表达更高(P<0.05)。结论CDK1和CDK2可望成为胃癌早期预后指标和分子治疗的靶标。
- 颜伟张永红何乐亚魏欣陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：CDK1CDK2预后因子胃癌
- 四环素诱导可控表达细胞周期素B1单克隆的筛选被引量：2
- 2009年
- 目的筛选四环素诱导细胞周期素B1（CyclinB1）可控表达的293单克隆细胞株（tetracycline-regulated expression 293 cells，T-REx^TM-293）。方法从人胎肝cDNA文库中PCR带有酶切位点的CyclinB1基因全长，将其酶切后插入到pcDNA4／TO／myc-HisB载体中。然后用测序正确的质粒转染T-RExTM-293细胞，加杀稻瘟菌素（Blasticidin）和腐草霉素（Zeocirt）双药物筛选两周后，传96孔板，等单个细胞扩增出单克隆。然后用Western印迹和流式细胞仪检测CyclinB1的诱导表达情况。结果构建好的pcDNA4／TO／myc-HisB—CyclinB1载体，经鉴定序列正确。筛选出的单克隆细胞株，在未加四环素时没有外源性的CyclinB1表达，在加入四环素后，3h就有表达，随时间的增加，CyclinB1表达量也增加，48h最多。结论筛选出的T-REx^TM-293单克隆细胞株能可控表达CyclinB1。
- 何乐亚魏欣左学良田铭张永红于冬冬董硕陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：细胞周期素B1四环素单克隆
- G_0/G_1期异时相Cyclin B1的表达对细胞凋亡的影响被引量：4
- 2013年
- 目的研究G0/G1期异时相细胞周期素B1(Cyclin B1)的大量表达对细胞凋亡的影响。方法首先构建了四环素可诱导表达Cyclin B1的单克隆细胞株,其次,筛选出能最大程度阻滞细胞于G0/G1期的胸腺嘧啶核苷(Thymidine)浓度,最后,在阻滞的时间内加入四环素诱导Cyclin B1表达,并用免疫印迹和流式细胞仪检测证实后,用膜联蛋白/碘化丙啶(AnnexinⅤ/PI)双染法和API法检测细胞凋亡。结果终浓度为5mmol/L的胸腺嘧啶核苷能阻滞单克隆细胞株在G0/G1期,并至少维持48h;在细胞同步化期间加四环素诱导后,Cyclin B1表达增加,并且G0/G1期特异性细胞凋亡增加。结论 G0/G1期异时相Cyclin B1的表达能诱导细胞凋亡。
- 何乐亚魏欣徐丰李川闵江刘鹭陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：细胞周期素B1细胞周期细胞凋亡
- 异时相Cyclin B1/CDK1表达有助于正常在体细胞进入细胞分裂周期
- 2009年
- 目的研究通常表达于G2/M期的Cyclin B1在G1期异时相表达的作用机制及意义。方法用丝裂原刺激因子(PHA)刺激人外周血淋巴细胞使之进入细胞周期,分别在刺激后0、36、48、60 h收集细胞,并分成两部分,一部分用流式Cyclins/DNA多参数技术分析,一部分用Post-sorting Western blot分析。结果处于G0期的淋巴细胞经PHA刺激进入细胞周期后,可以观察到Cyclin B1在G1期有异时相表达,相应的CDK1亦有异时相表达。结论异时相Cyc-lin B1/CDK1可能有助于正常在体细胞进入细胞分裂周期。
- 张永红于冬冬何乐亚魏欣冷彦陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：外周血淋巴细胞
- 生长激素对MOLT-4细胞增殖的影响
- 2011年
- 生长激素（GH）是由脑垂体前叶嗜酸性细胞所分泌的生长刺激因子。我们通过研究rhGH是否对人T淋巴细胞型白血病细胞株（Moh-4）具有增殖作用以及观察生长激素受体（GHR）在Moh-4细胞中的表达，以期为rhGH的临床研究提供实验依据。
- 田铭龚万军李川于冬冬何乐亚肖薇陶德定龚建平
- 关键词：MOLT-4细胞增殖生长刺激因子RHGH嗜酸性细胞脑垂体前叶
- 利用可控表达Cyclin B1的单克隆细胞株寻找与Cyclin B1结合的蛋白
- 2012年
- 目的利用已经构建好的四环素诱导细胞周期素B1(Cyclin B1)表达的单克隆细胞株,探索可能与Cyclin B1相互作用的蛋白。方法加入四环素的单克隆细胞株能表达带有Myc和His标签的Cyclin B1。将未诱导和用四环素诱导48h的细胞裂解后,分别加入10μg Myc的单克隆抗体,用免疫沉淀法(immune precipitation,IP)沉淀可能和Cyclin B1相作用的蛋白,将蛋白混合物行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用考马斯亮蓝染色法和银染法明确差异蛋白,再用质谱(massspectrometry,MASS)行蛋白鉴定。结果用质谱鉴定出的蛋白有细胞周期素依赖蛋白激酶1(Cyclin-dependent kinase1,CDK1),细胞周期素依赖蛋白激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK2),有丝分裂阻滞缺失样蛋白1(Mitotic arrest deficient-like protein 1,MAD1-like 1,MAD1L1)和热休克蛋白8(heat shock 70kD protein 8isoform 1)。结论除CyclinB1和CDK1直接相互作用外,Cyclin B1与CDK2、MAD1L1和热休克蛋白8都可能有直接或间接的相互作用。
- 何乐亚魏欣徐丰闵江刘鹭李国东傅寅佳陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：细胞周期素B1四环素免疫沉淀质谱
- 结肠癌原发灶及肝转移灶中PTEN蛋白的表达研究被引量：1
- 2010年
- 目的检测结肠癌原发灶及淋巴结、肝转移灶中PTEN蛋白的表达情况及其作用。方法应用免疫组化方法和WesternBlot方法对38例结肠癌原发灶和淋巴结、肝转移灶中PTEN蛋白的表达情况进行检测。结果PTEN蛋白质原发灶中高表达,在淋巴结转移灶中表达降低,肝转移灶中不表达或表达极低。结论PTEN蛋白表达降低有助于结肠癌的转移,PTEN可望成为结肠癌预后指标和分子治疗的靶标。
- 张永红于冬冬何乐亚魏欣陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：PTEN蛋白原发灶肝转移
