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转人乳铁蛋白基因山羊乳腺上皮细胞的研究被引量：8: 2006年; 利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因的重组质粒,并导入到山羊乳腺上皮细胞,经G418及PCR筛选获得阳性细胞;转染细胞增殖后经激素诱导,培养液上清通过Western blot检测证明,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白,其分子质量为58 ku。; 郑月茂刘凤军何小宁张涌; 关键词：绿色荧光蛋白

同源重组技术在转基因动物抗病育种中的应用被引量：1: 2011年; 1抗病育种的概述转基因就是将目的基因导入受体细胞的过程。由于这一技术能够实现基因的种间转移,用于动物育种将大大提高育种的目的性而加快育种进程。; 宋永利华松何小宁兰杰刘永刚张涌; 关键词：转基因动物抗病育种转基因技术同源重组

猪乳腺干细胞的分离培养及EGFP基因转化被引量：1: 2010年; 利用乳腺干细胞培养技术体系,从成年猪乳腺组织中分离培养乳腺干细胞,通过脂质体介导转染技术,将EGFP基因导入乳腺干细胞,诱导转基因乳腺干细胞向乳腺上皮细胞分化,观察其分化特点。结果成功分离培养出乳腺干细胞,获得转EGFP基因乳腺干细胞,它们在表达EGFP的同时仍具有分化潜能,能分化成梭形和扁平状细胞。结果表明,从成年猪乳腺组织中分离乳腺干细胞具有可行性和有效性,转EGFP基因乳腺干细胞具有自我更新、增殖和分化潜能,可以用EGFP基因对乳腺干细胞进行标记、追踪,为EGFP基因作为示踪标记对乳腺干细胞用于体内移植研究奠定了基础。; 郑月茂贺小英党永辉何小宁李艳艳刘军; 关键词：乳腺干细胞 EGFP基因

一种基于Ipr1基因构建的巨噬细胞异性打靶载体和重组细胞: 本发明公开了一种基于Ipr1基因构建的巨噬细胞异性打靶载体和重组细胞，通过在Ipr1基因5′端连接MSR1启动子使Ipr1基因在牛的巨噬细胞中特异的高效表达；并进一步构建重组基因LA-MSR1-Ipr1-SA，使目的基因...; 何小宁张涌权富生王勇胜

牛胎儿皮肤成纤维细胞的分离培养及转染Ipr1基因被引量：2: 2011年; 为了为核移植提供供体细胞,本研究构建了真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1,并研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的体外分离培养,进行了Ipr1基因转染。克隆Ipr1基因和SR-A启动子,并构建了巨噬细胞特异性真核表达载体。用组织块贴壁法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞,在体外经传代、纯化后,用电穿孔法将真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1转染至经体外纯化的第4～10代牛胎儿成纤维细胞,24h后观察荧光表达,48h后加入600μg.mL-1 G418,筛选1周,300μg.mL-1持续筛选,然后挑选单克隆,继续扩大培养。对稳定转染的牛胎儿成纤维细胞进行PCR检测和核型分析。结果,转染24h后有绿色荧光蛋白表达,并经G418筛选获得稳定转染PEG-FP-SRA-Ipr1的牛胎儿成纤维细胞株,经PCR检测在大约1 500bp处有目的片段,经流式细胞仪分析转染细胞染色体倍型未发生变化,仍是二倍体。说明目的基因已经成功整合,同时保持了遗传稳定性。可以作为核移植进行转基因克隆牛研究。; 宋永利何小宁华松兰杰郑月茂贺小英李吉霞权富生张涌; 关键词：供体细胞真核表达载体牛胎儿成纤维细胞电穿孔绿色荧光蛋白

巨噬细胞RAW264.7的培养及电转染条件的优化被引量：8: 2010年; 为了建立最优的巨噬细胞RAW264.7培养方法和电转染条件,在细胞培养时采用两种方法了解细胞的培养特性并进行电转染条件的优化,建立并验证RAW264.7细胞快速、无血清培养体系的电转染方法。以绿色荧光蛋白（GFP）为报告基因,进一步优化巨噬细胞电穿孔的条件。通过控制电压（250~420 V）、脉冲时间、电击次数、温度、电击缓冲液等转染条件,采用不同的条件组合,用电穿孔法将质粒pEGFP-C1转染于培养的RAW 264.7细胞。通过荧光显微镜分析转染效率,可见：用胰酶和细胞刮刀消化RAW264.7细胞,细胞损伤小,形态好。利用优化的电转染条件得出最佳转染条件是：电压350 V、脉冲时间30 ms、电击1次、电击缓冲液成分为cell盐和options且V（cell盐）∶V（options）=3∶1、最佳温度4℃。; 宋永利陆昕邱爽祁英培华松兰杰何小宁贺小英张涌郑月茂; 关键词：巨噬细胞体外培养基因转染

人溶菌酶基因乳腺特异性表达载体的构建及其在小鼠乳腺癌细胞中的表达: 人溶菌酶(humanlysozyme，hLYZ)参与机体的防御机制，有抗感染、抗肿瘤和免疫调节的作用，因此在医学、食品工业等领域得到十分广泛的应用。天然hLYZ一般是从人乳、中性粒细胞或尿液中少量提取，但由于来源极其困难...; 何小宁; 关键词：人溶菌酶基因阳性细胞定向克隆报告基因转基因动物; 文献传递

优化山羊体细胞核移植方案的研究被引量：6: 2006年; 以乳腺细胞、胎儿成纤维细胞和颗粒细胞为供体细胞进行核移植,比较了供体细胞类型、细胞冷冻及核移植的重建方法(胞质内注射、电融合)对重构胚早期发育的影响。结果:(1)乳腺细胞支持重组胚的发育能力(囊胚率7.14%)显著低于成纤维细胞(16.19%)和颗粒细胞(19.01%)(P<0.05),卵裂率无显著差异(P>0.05);(2)乳腺上皮细胞构建重组胚时电融合法的效率(69.52%)极显著高于胞质注射法(59.20%)(P<0.01);成纤维细胞的重组成功率、卵裂率和囊胚率在两种方法间均无显著差异(P>0.05);在颗粒细胞,胞质注射法重组成功率(82.17%)显著高于电融合法(50.99%)(P<0.05),其囊胚率也稍高于电融合法,但无显著差异(P>0.05);(3)上述3种供体细胞在冻融后支持重组胚发育力方面无显著差异(P>0.05)。结论:在山羊体细胞核移植中,上述3种细胞支持重组胚的发育力以成纤维细胞和颗粒细胞较好;细胞冷冻对其无显著影响;在构建重组胚方法上,乳腺细胞以电融合法为宜,颗粒细胞是胞质注射法优于电融合法,而成纤维细胞两种方法均可。; 刘凤军安志兴高立功张玉玲张晶晶何小宁郑月茂张涌; 关键词：核移植体细胞山羊电融合

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何小宁