何忠效
- 作品数：38 被引量：193H指数：9
- 供职机构：北京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 5-氮胞苷(5-aza-CR)及其类似物对HL-60细胞分化及DNA甲基化的影响被引量：7
- 1991年
- 本文报道了5-aza-CR和5-aza-CdR对HL-60细胞分化及DNA甲基化作用的影响。用NBT染色法测定了加药处理前后HL-60细胞分化程度的变化;用[~3H-SAM]为甲基供体,以同位素参入法测定了加药前后HL-60细胞中甲基化酶活力的变化;并用HPLC法测定了加药前后HL-60细胞DNA的甲基化水平。结果表明:在5-aza-CR或5-aza-CdR的使用浓度下处理HL-60细胞沿粒细胞系分化程度增加,DNA甲基化酶活力下降,DNA甲基化水平也下降。并且这些变化均与5-aza-CR的浓度相关;5-aza-CR的影响较5-aza-CdR小,因此后者是更为有效的诱导物。本项研究中还以不同甲基化水平的HL-60细胞DNA为模板,在体外测定了E.Coli RNA聚合酶的活力。发现:随着HL-60细胞DNA甲基化水平的降低,RNA聚合酶的体外转录活力升高。
- 饶泓辛梅何忠效
- 关键词：5-氮胞苷细胞分化甲基化
- 蛋白质——核酸在基因转录过程中的相互作用
- 1990年
- 基因表达调腔是当今分子生物学研究的中心内容之一。在整个基因表达调控过程中,充满着蛋白质-核酸及蛋白质-蛋白质相互作用的问题,涉及生命现象的最本质内容。因此,生物大分子的研究,特别是蛋白质-核酸相互作用体系的研究,正从根本上全面地推动着生命科学的发展。就连极具应用前景的生物工程研究,其核心和本质问题也是生物大分子的研究。
- 何忠效姚知行
- 关键词：蛋白核酸基因转录
- BamHI DNA甲基化酶的纯化及对BamHI限制性核酸内切酶限制作用的保护作用被引量：1
- 1989年
- 用硫酸铵盐析、磷酸纤维素柱层析和肝素-Sepharose 4B亲和层析从解淀粉芽孢杆菌(Rocllus amyloliquefaciens)纯化了BamHl DNA甲基化酶。并以λDNA为底物,研究了λDNA被BamHl DNA甲基化酶作用后,对BamHl限制性核酸内切酶的切割产生了明显的阻抗作用。
- 何忠效蒋晞薛继艳郑文尧
- 关键词：DNA甲基化酶核酸内切酶
- Bam HI DNA甲基化酶酶学性质的研究被引量：1
- 1991年
- 以Lineweave-Burk plot双倒数作图法测得该酶对底物S-腺苷酰甲硫氨酸(SAM)的K_m=7.69×10^(-6)mol/L,在1mmol/LS-腺苷酰高半胱氨酸(SAH)存在下,Ki=7.33×10^(-4)mol/L,两条直线相交于纵轴,证明SAH是该酶的竞争性抑制剂。该酶最适pH为7.8,对热不稳定。同时还测定了该酶对不同DNA底物的专一性及盐浓度、代谢相关物’两价阳离子、某些酸根等对该酶调节性质的影响。以碘代乙酰胺修饰该酶的SH基’及用二硫苏糖醇(DTT)和巯基乙醇(MSH)保护该酶SH基所作的实验表明SH基是该酶活性中心所必需的,用高效液相色谱(HPLC)法证明该酶所甲基化的碱基为刘氏小球菌(M·L、DNA)分子中的胞嘧啶,且求得甲基化30min后所得甲基化水平为2.39％。同时也证明当用该酶将λDNA甲基化后,可使BamHI限制性核酸内切酶对甲基化后的λDNA丧失切割作用。
- 薛继艳何忠效
- 关键词：米氏常数
- 浅谈单克隆抗体被引量：8
- 2004年
- 简要介绍了抗体及单克隆抗体的概念,并阐述了单克隆抗体的制备原理,制备方法及主要应用领域。
- 何忠效
- 关键词：杂交瘤技术单克隆抗体淋巴细胞抗体
- 糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性及基因组DNA对DNase敏感性的分析被引量：3
- 2002年
- 用 3H标记的 S-腺苷酰 - L -甲硫氨酸 (3H- SAM)作为甲基供体 ,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药“糖微康”治疗的糖尿病肾病大鼠、西药“开博通”治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的 DNA甲基化酶活性 ,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组 DNA分别进行 DNase 敏感性分析 .结果显示 :糖尿病肾病大鼠肝 DNA甲基化酶活性明显低于正常鼠肝 ,其基因组 DNA对 DNase 敏感性比正常大鼠肝增强 ;中药“糖微康”治疗及西药“开博通”治疗的大鼠的肝 DNA甲基化酶活性均有所回升 ,且中药组更接近正常大鼠对 DNase 的敏感性 .
- 汪琛颖马晴何忠效
- 关键词：酶活性基因组DNA敏感性糖尿病肾病糖微康
- HL-60细胞内DNA甲基化作用与RNA聚合酶活力的关系被引量：6
- 2000年
- 以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 ( SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下可诱导 HL- 60细胞分化达 1 6%左右 .HPLC测定结果证明 ,诱导物处理后 HL- 60细胞 DNA甲基化水平升高 .通过 3 H-UTP同位素参入法 ,测定了不同处理时间和不同浓度 SAM对 HL- 60细胞 DNA模板体外转录活性的影响 ,发现体外活力下降 .比较了不同浓度α-鹅膏蕈碱存在下 RNA聚合酶活力的变化 ,结果表明 SAM处理后细胞中不同
- 白坚石何忠效
- 关键词：SAMDNA甲基化RNA聚合酶基因表达细胞分化
- S-腺苷酰L-甲硫氨酸 (SAM)对 HL-60细胞 DNA甲基化酶活力和甲基化水平的影响(英文)被引量：11
- 2001年
- 以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 (SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下造成 1 6%的 HL- 60细胞分化 .HPLC检测结果表明 ,细胞基因组 DNA甲基化水平升高 .通过3H甲基同位素参入法研究细胞 DNA甲基化酶活力 ,则发现在细胞分化过程中酶活力未见升高 .说明细胞基因组甲基化水平升高并不是胞内 DNA甲基化酶催化能力改变的结果 ,而是由于 SAM进入细胞提供过量甲基造成的 .
- 白坚石马晴王萍何忠效
- 关键词：HL-60细胞DNA甲基化酶甲基化水平
- 5－氮－2＇－脱氧胞苷（5－aza－CdR）对HL－60细胞分化和DNA甲基化酶的影响被引量：9
- 1995年
- 以５－氮－２＇－脱氧胞苷（５－ａｚａ－ＣｄＲ）为诱导物，在０．５μｍｏｌ／Ｌ的最佳浓度下，可诱导ＨＬ－６０细胞分化达１５％左右。同时，用［￣３Ｈ］－ｍｅｔｈｙｌ－ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ（￣３Ｈ－ＳＡＭ）为底物，通过同位素参入法，测定了不同浓度诱导物对ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ甲基化酶活力的影响，发现在最佳诱导物浓度下，可使ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ甲基化酶活力明显下降，此外，也比较了不同分化水平的ＨＬ－６０细胞中具有不同甲基化水平的ＤＮＡ在体外接受甲基的能力，从而证明５－ａｚａ－ＣｄＲ诱导ＨＬ－６０细胞分化与其ＤＮＡ甲基化状态密切相关。
- 何忠效顾郁饶泓白坚石马晴
- 关键词：HL60细胞分化DNA甲基化酶5-AZA-CDR
- 盐效应对DNA大分子构象的影响被引量：3
- 1989年
- 用CD光谱监测了Micrococcus luteus DNA在不同MgCl_2浓度下[θ]值的变化,发现随着MgCl_2浓度的增加,在275nm处其[θ]值减少;而在220—250nm处,其负[θ]值加大.这个结果表明DNA大分子在空间上趋于缩拢.在同样条件下也用紫外光谱进行了监测,发现随着MgCl_2浓度的增加,在260nm处有明显的减色效应出现,这便又进一步印证了上述结果.而又用Batch-2107微量热计进行了热力学上的研究,结果表明在上述条件下,随着DNA大分子在空间上缩拢程度的加大,则伴有较高的释热值.这便从热力学的角度进一步佐证了这样的结果:随着MgCl_2浓度的增加,使溶液中的DNA大分子在空间上产生明显的缩拢现象.同时,所有上述测定结果都一致表明:这种DNA大分子构象变化过程是时间依赖的,约持续10分钟.
- 何忠效姚知行饶泓
- 关键词：构象盐效应
