刘春
- 作品数：109 被引量：297H指数：10
- 供职机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程医药卫生更多>>
- 一种乌斑鳢肾细胞系及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种乌斑鳢肾细胞系，其分类命名为乌斑鳢肾细胞系CAMK，于2019年5月8日保存在中国典型培养物保藏中心，保藏登记编号为CCTCC NO:C201994，上述乌斑鳢肾细胞系的构建方法为：取乌斑鳢消毒后取肾，于...
- 王英英王庆曾伟伟李莹莹尹纪元刘春常藕琴石存斌
- 文献传递
- 锦鲤疱疹病毒(KHV)保存方法的筛选与比较
- 探讨合适的锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus KHV)保存方法，促进KHV流行病学调查与防控以及疫苗开发等相关工作的开展.方法 比较了5 种不同保存条件对锦鲤疱疹病毒的影响，包括1)：-80℃超低温保存； 2)...
- 李莹莹郑树城曾伟伟王英英潘厚军刘春石存斌吴淑勤王庆
- 云斑尖塘鳢肿大细胞病毒属虹彩病毒的分离与鉴定被引量：14
- 2010年
- 2009年10月,广东顺德地区一云斑尖塘鳢养殖场暴发不明病因疾病,发病尖塘鳢体长15—18 cm不等,死亡率约85%,濒死尖塘鳢从池塘底层游至水面,呈现游动失衡状态直至死亡。死亡尖塘鳢腹部膨大,剖检可见肝脏、脾脏、肾脏肿大,有出血斑点,从内脏器官肝脏、脾脏和肾脏未分离到致病菌。病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾尖塘鳢,7d后开始出现死亡,10d后全部死亡,对照组无死亡。自然发病鱼和人工感染鱼的病理切片显示肝脏、脾脏和肾脏出现大量肿大细胞,超薄切片经电子显微镜观察,肝脏、脾脏和肾脏观察到大量病毒颗粒。电镜下病毒呈六边形,直径约135 nm,形态与虹彩病毒相似。针对虹彩病毒主衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)序列设计引物,提取自然发病鱼和人工感染鱼的DNA作为模板,均能扩增出预期大小的特异性产物。利用NCBI的Blast搜索,结果显示扩增序列与肿大细胞病毒属的传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)、闪电丽鱼虹彩病毒(DGIV)和条石鲷虹彩病毒(RBIV)MCP核苷酸序列同源性分别为98.8%、98.1%和94.7%。利用MCP序列构建的系统发育树显示,导致云斑尖塘鳢发病死亡的病毒为肿大细胞病毒属虹彩病毒,暂命名云斑尖塘鳢虹彩病毒(MSGIV)。
- 王庆曾伟伟刘春李凯彬常藕琴潘加雄石存斌吴淑勤
- 关键词：云斑尖塘鳢虹彩病毒MCP
- 剑尾鱼趋化因子CCL4和CCL19基因的克隆及嗜水气单胞菌感染对其组织表达的影响被引量：1
- 2018年
- 趋化因子是一类能够吸引白细胞移行到感染部位的低分子量(8~10 ku)蛋白质,在炎症反应、非特异性免疫反应中具有重要作用。实验克隆了剑尾鱼2个趋化因子基因(CCL4、CCL19)c DNA序列,运用荧光定量PCR技术检测其在健康组织和嗜水气单胞菌感染后肝、脾中的表达情况。结果显示,剑尾鱼CCL4和CCL19开放阅读框长度分别为294和333 bp,分别编码97和110个氨基酸,推导氨基酸序列均含有趋化因子CC家族标志性的4个半胱氨酸残基,与其他物种尼罗罗非鱼、鼠、狗、人、鸡的氨基酸序列相似性比较,CCL4相似度分别为71.1%、33%、33%、31%、23.5%;CCL19相似度分别为62%、26.9%、24.5%、26.6%、27.8%。在检测的健康剑尾鱼8个组织中,CCL4和CCL19均有表达,其中CCL4和CCL19均在脾脏中表达量最高;CCL4在肌肉和肠中表达量较低,而CCL19则在心脏中表达量较低。经嗜水气单胞菌感染后,CCL4在剑尾鱼头肾中12 h表达量达到最高,在肝脏中24 h表达量最高;CCL19在头肾和肝脏中均在24 h时表达量最高。研究表明,趋化因子CCL4和CCL19可能参与剑尾鱼机体免疫调节反应,在抗嗜水气单胞菌感染过程中发挥了重要作用。
- 朱成科王建陈灵涵周朝伟雷骆邓星星刘春郑宗林
- 关键词：剑尾鱼CCL4CCL19嗜水气单胞菌
- 剑尾鱼2种卵黄蛋白原全长cDNA的克隆及序列分析被引量：5
- 2010年
- 卵黄蛋白原是环境雌激素效应研究的重要生物标志物,广泛应用于水环境内分泌干扰物污染的评价。本研究利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆获得了剑尾鱼(Xiphophorus helleri)的2种卵黄蛋白原基因—VgA和VgB,并对其基因结构和系统进化进行分析。VgA基因cDNA序列全长5159bp,开放阅读框(ORF)5058bp,编码1685个氨基酸。VgB基因cDNA序列全长5349bp,开放阅读框(ORF)5067bp,编码1688个氨基酸。2种cDNA序列均具有与已发现的卵黄蛋白原分子相似的主要特征和功能域,包括Vitellogenin结构域、VWFD结构域和多聚丝氨酸区域,且与已知其他鱼类卵黄蛋白原基因有较高的同源性。
- 刘春李凯彬耿冬雨聂湘平王芳吴淑勤
- 关键词：剑尾鱼卵黄蛋白原克隆
- 四带无须鲃透明品系的海分枝杆菌感染模型被引量：1
- 2017年
- 【目的】了解海分枝杆菌Mycobacterium marinum对四带无须鲃Puntius tetrazona透明品系的感染特性,构建感染模型。【方法】分别采用腹腔注射、肌肉注射及与感染鱼共居的感染方式,研究海分枝杆菌对四带无须鲃透明品系的感染特性;组织切片和压片观察细菌在四带无须鲃体内不同组织的分布及其引起的特征病理变化。【结果】2种注射方式均在感染部位周围观察到病变,并导致鱼体死亡;共居感染鱼病程发展较为缓慢,并出现消瘦、体色苍白等症状。感染鱼均可分离到病原菌,主要器官观察到典型肉芽肿结构,且抗酸染色能将其中细菌特异染色;各器官有黑色素巨噬细胞中心形成,并伴有不同程度的病理变化。【结论】四带无须鲃透明品系对海分枝杆菌敏感,症状便于观测,病理变化典型,可作为感染模型系统发展。
- 王芳刘春姜兰冯永永李凯彬
- 剑尾鱼补体基因C3全长cDNA克隆与生物信息学分析
- 鱼类补体系统在先天性免疫调解中起重要作用,其中C3是补体系统的关键成分,在病原体的吞噬和细胞溶解中发挥重要作用。本研究利用RT PCR和RACE方法获得剑尾鱼(Xiphophorus helleri)C3基因全长cDNA...
- 王芳李凯彬刘坡刘春吴淑勤
- 关键词：剑尾鱼补体C3克隆
- 文献传递
- 鳢流行性溃疡综合征病原分离鉴定与病理形态学观察被引量：4
- 2019年
- 为寻找冬春季鳢(Channa maculata)烂身病的病原,应用组织压片、组织切片、扫描电镜技术、HE 常规染色法和 Grocott 六胺银染色法、霉菌分离纯化及 ITS 的序列分析等对冬春季患疑似溃疡综合征的烂身病鳢进行了病原学与病理学研究。病变组织压片观察到大量直径 10~20 μm,分枝较少、纤细菌丝。扫描电镜观察到肌肉组织中延伸出大量的纤细的丝状真菌。患病鳢皮肤和肌肉表现为变性、坏死与炎性细胞浸润,溃疡灶肌肉内可见大量的慢性肉芽肿结节和炎性细胞浸润。结节基本结构由类上皮细胞和多核巨细胞、炎性细胞、霉菌菌丝(横断面呈圆形,斜断或纵断呈丝状)组成,霉菌位于结节中央。Grocott 六胺银染色观察到结节中有大量棕色菌体。无菌分离培养可观察到典型丝状霉菌;霉菌在灭菌池塘水 20℃过夜, 12 h 后可观察原代孢子群形成,真菌 ITS 序列分析表明其与侵袭丝囊菌(Aphanomyces invadans)同源性为 100%。侵袭丝囊霉菌(A. invadans)是杂交鳢溃疡综合症病的主要病原,为鱼类流行病学调查和疾病防治的深入研究奠定基础。
- 常藕琴石存斌王亚军刘春陈绮梨霍礼侠
- 关键词：病理形态学
- 剑尾鱼CYP1A1基因mRNA定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2011年
- 利用SYBR GreenⅡ荧光定量PCR技术,建立了剑尾鱼CYP1A1基因mRNA水平的定量分析方法。从苯并芘浸泡诱导后的剑尾鱼肝脏中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得标准品质粒10倍梯度稀释后构建标准曲线并进行熔解曲线分析。用苯并芘(20μg/L)对剑尾鱼进行诱导,在第1、3、5、7、9、11天分别取肝脏,RT-PCR检测剑尾CYP1A1基因的相对表达量。建立了剑尾鱼CYP1A1基因表达的检测方法和定量标准曲线,构建的剑尾鱼CYP1A1和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为10～26、12～26,扩增效率分别为100.53%、98.40%;建立的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数r2均在0.99以上;熔解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,表明扩增产物特异性非常好,组内变异系数为0.15%～0.83%,组间变异系数为0.86%～1.66%。利用本方法对剑尾CYP1A1基因的相对表达量进行检测,结果表明苯并芘可显著诱导剑尾鱼CYP1A1基因的表达。诱导组剑尾鱼肝脏中CYP1A1相对表达量随着时间呈现先上升后下降的趋势,呈倒"U"形;对照组的CYP1A1相对表达量很低,随时间无明显变化。
- 王英英李凯彬刘春石存斌吴淑勤
- 关键词：剑尾鱼CYP1A1基因实时荧光定量PCRSYBR
- 四带无须鲃的成体透明突变及匹里虫感染模型的构建
- 鱼类大多体外发育,胚体透明,便于观察,是脊椎动物组织发育等相关研究的优良材料。鱼体会因生长而变得不透明,成鱼在体内试验中的应用优势不再明显。我们在四带无须鲃中发现了一种成体透明突变,主要表现为通体透明,心、肝、肾、肠、鳔...
- 李凯彬常藕琴王芳刘春马必勇吴淑勤
- 文献传递
