刘超
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
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- 发文基金：上海市自然科学基金卫生部科学研究基金江苏省“333工程”培养资金资助项目更多>>
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- IL-31与特发性肺纤维化信号转导机制研究
- 郑金旭史可云端礼荣刘超朱勤
- β-catenin siRNA慢病毒载体的构建及其对A549耐药细胞生长及自噬的影响被引量：3
- 2017年
- 目的:通过构建β-catenin siRNA慢病毒表达载体,研究Wnt信号通路与顺铂诱导非小细胞肺癌耐药的相关机制。方法:根据β-catenin基因mRNA序列,设计并合成3对shRNA序列,退火形成双链DNA,与慢病毒载体pLentiLox3.7连接、转化,挑取阳性克隆进行测序鉴定;转染293T细胞,包装产生慢病毒,检测滴度;感染A549细胞,筛选出有效抑制靶点;将慢病毒感染A549/DDP耐药细胞株24 h后,用不同浓度的顺铂干预48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;根据细胞预先有无慢病毒感染,分为A549组、A549/DDP组、A549/DDP+siRNA组、A549/DDP+siNC组,用8μg/m L顺铂处理各组细胞,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法测定各组细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ及Wnt信号通路关键因子β-catenin表达水平。结果:经DNA测序鉴定,成功构建β-catenin siRNA慢病毒载体,并筛选出有效抑制靶点;相同浓度下顺铂对A549细胞抑制作用明显大于A549/DDP细胞(P<0.05),对A549/DDP+siRNA组细胞的抑制作用也强于A549/DDP细胞;8μg/m L顺铂干预后,A549/DDP组β-catenin及LC3Ⅱ的表达明显高于A549组(P<0.05),而A549/DDP+siRNA组β-catenin和LC3Ⅱ表达较A549/DDP组减少。结论:Wnt信号通路参与非小细胞肺癌对顺铂产生的耐药,该过程与细胞产生自噬有关。
- 宋萍连小怡郑金旭葛莉萍刘超蒋婷朱黎容丁明
- 关键词：WNT信号通路耐药自噬
- IL-33/TLR4信号通路在A549细胞上皮-间质转化中的作用
- 刘超郑金旭许姣朱勤蒋婷
- 关键词：白细胞介素-33磷脂酰肌醇-3-激酶上皮-间充质转化
- IL-33/TLR4信号通路在A549细胞上皮-间质转化中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨IL-33/TLR4信号通路在上皮来源的A549细胞上皮-间质转化中的作用。方法:培养A549细胞,用5 ng/mL的转化生长因子β1(TGF-β1)刺激A549细胞;在不同时间点(0,12,24,48 h)MTT法检测TGF-β1对A549细胞增殖的影响;荧光定量PCR方法检测IL-33信号通路中关键因子IL-33,Toll样受体4(TLR4)基因的表达改变;蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cad)、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)的动态表达。结果:TGF-β1刺激A549细胞后,细胞增殖无明显变化(P>0.05),IL-33表达量先升高,后下降(P<0.05);E-钙黏蛋白表达量逐渐下降,α-SMA表达量逐渐升高,TLR4先升高后下降(P<0.05);p-AKT表达量逐渐升高(P<0.05)。结论:IL-33/TLR4信号通路在A549细胞的上皮-间质转化中发挥了重要作用。
- 刘超郑金旭许姣朱勤杜传冲
- 关键词：白细胞介素-33上皮-间充质转化
- ST2在博来霉素诱导的肺纤维化小鼠体内的动态表达被引量：5
- 2013年
- 目的:探讨ST2是否在博来霉素(Bleomycin,BLM)诱导的肺纤维化小鼠体内表达,进一步探索肺纤维化的发病机制。方法:BLM诱导急性肺纤维化模型,H&E、Masson染色检测肺部急性炎症及纤维化程度。Western blot检测蛋白ST2的动态表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织中的IL-4、IFN-γ水平,IFN-γ/IL-4代表Th1/Th2。结果:与对照组相比,BLM组中蛋白ST2、MyD88、TRAF6的表达呈现出一致的上升趋势,在第7、14、28天的差异有统计学意义(P<0.01);在肺纤维化过程中IFN-γ/IL-4比值逐渐减小,与对照组相比,在第14、28天时的差异有统计学意义(P<0.01);蛋白ST2、MyD88、TRAF6的表达与IL-4的相对表达趋势一致,而与IFN-γ的相对表达趋势相反。结论:在肺纤维化过程中,伴有蛋白ST2、MyD88、TRAF6的高表达;ST2介导的Th1/Th2细胞因子漂移参与了肺纤维化过程。
- 郑金旭许姣鲁蕾刘超吴立艳端礼荣
- 关键词：ST2肺纤维化TH1TH2
- IL-34/CSF-1R在TGF-β 1诱导A549-EMT的表达
- 郑金旭朱勤刘超宋萍
- 白细胞介素-34/集落刺激因子-1R在转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-间质转化中的表达被引量：4
- 2014年
- 目的探讨白细胞介素-34/集落刺激因子-1受体(IL-34/CSF-1R)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)中的表达。方法体外培养A549细胞;CCK 8法检测不同浓度TGF-β1在不同时间点对A549细胞增殖的影响;选用5μg/L TGF-β1刺激A549细胞(0、12、24、48h),提取细胞蛋白和RNA,Western blotting法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏连蛋白(E-Cad)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白的变化;Real-time PCR法检测IL-34、CSF-1R、MMP-2、MMP-9基因表达的变化。结果 TGF-β1对A549细胞的增殖无明显影响(P>0.05)。TGF-β1刺激A549细胞后,间质细胞标志性蛋白α-SMA表达升高,上皮细胞标志性蛋白E-Cad表达下降,纤维化相关的MMP-2蛋白表达升高,MMP-9蛋白表达先升高后下降,TIMP-1蛋白早期出现短暂性增高后,呈持续降低趋势(P<0.01)。IL-34mRNA表达逐渐升高,CSF-1R mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达先升高后下降(P<0.01)。结论 TGF-β1诱导A549细胞的EMT过程中,存在IL-34/CSF-1R的动态表达。
- 郑金旭朱勤刘超宋萍端礼荣
- 关键词：转化生长因子-Β1上皮-间质转化CCK实时定量聚合酶链反应A549细胞
- IL-33在肺纤维化小鼠的表达被引量：4
- 2013年
- 目的探讨IL-33在肺纤维化模型小鼠的表达。方法小鼠气管内一次性注入博来霉素制备急性肺纤维化模型(BLM组,20只),气管内注入等容积生理盐水作为对照(对照组,20只)。HE染色观察肺部炎症程度,Masson三色染色法检测纤维化程度。TUNEL细胞凋亡试剂盒检测肺上皮细胞凋亡,免疫组化法及Western blot检测IL-33、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮型钙粘蛋白(E-cad)的动态表达。结果与对照组比较,在肺纤维化过程中,BLM组E-cad的表达量在第14、28天均明显下降,IL-33的表达在第3、7、14天明显增加,α-SMA的表达在第3、7、14、28天明显升高(P<0.05)。TUNEL显示BLM组在第7天凋亡细胞最多。结论肺纤维化过程中存在上皮细胞过度凋亡及成纤维细胞增殖失控,同时伴有IL-33的动态表达。
- 许姣刘超郑金旭吴立艳朱勤
- 关键词：肺纤维化
