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乙肝病毒X 基因真核表达载体的构建及其表达被引量：7: 1999年; 目的　为探讨ＨＢＶＸ基因在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的致瘤机理提供实验模型。方法　用限制性内切酶从ｐＥｃｏｂ６上切下Ｘ基因读码框，克隆到ｐＢＫＳ＋上，再将Ｘ片段插入ｐＣＥＰ４的Ｈｉｎｄ Ⅲ和ＮｏｔⅠ位点间。将重组载体（ｐＣＥＰ４ Ｘ）和空载体（ｐＣＥＰ４）导入肝癌细胞株ＨｅｐＧ２中，潮霉素选择培养，ＲＴ ＰＣＲ鉴定其稳定表达。结果　构建的ｐＣＥＰ４ Ｘ质粒在ＨｅｐＧ２细胞中有稳定表达。结论　本实验为进一步探讨ＨＢＶＸ基因在ＨＣＣ中的致瘤机理提供了理想的实验细胞株。; 陶小红任红沈鼎明古柏燕张大志叶珈; 关键词：乙型肝炎病毒 X蛋白肝细胞癌真核表达

乙肝病毒x基因致肝细胞癌机理探讨被引量：3: 2000年; 构建ＨＢｘ基因真核表达载体，导入ＨｅｐＧ２细胞中，无血清培养同步化后，Ｗｗｓｔｅｒｎ杂交检测ＨｅｐＧ２－Ｘ细胞ＩＧＦ－ＩＲ，ＰＣＮＡ和ＶＥＧＦ表达增强，但无ｐ２１＾ＣＩＰ１／ＷＡＦ１表达，流式细胞检测细胞周期，ＨｅｐＧ－Ｘ０细胞７０％进入Ｇ０～Ｇ１期，而ＨｅｐＧ２－Ｘ细胞仅５０％进入Ｇ０～Ｇ１期，与血清增减亲本ＨｅｐＧ２细胞几乎相同，ＨＢｘ基因增加ＩＧＦ－ＩＲ表达，通过信号通路到细胞核。; 陶小红沈鼎明张晓实任红张大志古柏燕叶珈; 关键词：乙肝病毒X基因肝细胞癌核增殖抗原

乙型肝炎病毒x蛋白对细胞周期的影响被引量：4: 1999年; 目的　研究乙型肝炎病毒ｘ（ＨＢｘ）蛋白对细胞周期影响，探讨ＨＢｘ蛋白致细胞周期紊乱的分子机理。方法　构建ＨＢｘ基因真核表达载体ｐＣＥＰ４ Ｘ，电转染入ＨｅｐＧ２细胞（Ｘ细胞），以ｐＣＥＰ４空载体为对照（Ｘ０细胞），潮霉素选择培养，克隆扩增转染细胞，经无血清培养同步化后，流式细胞仪检测细胞周期变化；细胞组化和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和ｐ２１ＣＩＰ１／ＷＡＦ１表达变化。结果　流式细胞仪检测示对照Ｘ０细胞７０％进入Ｇ０ Ｇ１期，而转Ｘ细胞仅５６％进入Ｇ０ Ｇ１期，与含血清培养的亲本细胞ＨｅｐＧ２几乎相同。ｐ２１ＣＩＰ１／ＷＡＦ１Ｄ表达在Ｘ０细胞阳性率为（８６ ±８）％，Ｘ细胞为（１６ ±６）％。ＰＣＮＡ表达在Ｘ０细胞阳性率为（９ ±５）％，Ｘ细胞为（８６ ±３）％。结论　ＨＢｘ有推进细胞周期作用，并使细胞生长对血清依赖减少。ＨＢｘ可抑制细胞周期抑制蛋白ｐ２１ＣＩＰ１／ＷＡＦ１表达，同时增强细胞ＤＮＡ合成。; 陶小红任红沈鼎明张小实张大志叶珈古柏燕; 关键词：乙型肝炎病毒细胞周期 X蛋白; 全文增补中

重组乙型肝炎表面抗原插入突变体的真核表达及其抗原性的分析被引量：9: 1999年; 目的研究与乙型肝炎病毒感染的临床进程相关的两种乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）插入变异体的免疫学性状，以阐明在ＨＢｓＡｇ阴性的慢性乙型肝炎病毒感染中所起的作用。方法利用体外ＰＣＲ诱变方法，构建重组ＨＢｓＡｇ的插入突变体；借助ＥＢ病毒载体ｐＣＥＰ４和逆转录病毒载体ＰＸＴ１将重组插入变异Ｓ基因转染哺乳动物细胞；利用ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法，探讨变异抗原与抗ＨＢｓ的结合力。结果（１）构建了ＨＢｓＡｇ的插入突变体（分别在ＨＢｓＡｇ的第１２２位与１２３位氨基酸间插入Ａｒｇ，Ａｌａ和第１２３位与１２４位氨基酸间插入Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｌａ）的真核表达载体；（２）将其转染哺乳动物细胞，最终建立了能表达野生型和变异型ＨＢｓＡｇ的ＨｅｐＧ２细胞系；（３）这些细胞系能在体外稳定地连续传代培养；（４）野生型ＨＢｓＡｇ可与抗ＨＢｓ结合，变异型ＨＢｓＡｇ不能与抗ＨＢｓ结合。结论研究表明这两种插入变异体影响了ＨＢｓＡｇ的空间结构，从而使其失去与乙型肝炎病毒表面抗体的结合力，因而可能逃避机体的免疫清除而持续存在于体内形成慢性感染。; 古柏燕任红张定凤; 关键词：HBV 乙型肝炎表面抗原突变体

乙型肝炎病毒X蛋白对肝细胞癌生长因子激活作用的研究被引量：20: 2000年; 目的研究乙型肝炎病毒Ｘ（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂｖｉｒｕｓ，ＨＢｘ）蛋白对生长因子激活作用，探讨ＨＢｘ蛋白对肝细胞癌生长的影响。方法构建Ｘ基因真核表达载体，转染入ＨｅｐＧ_２细胞后，细胞组织化学和免疫印迹法检测胰岛素样生长因子－Ⅰ受体（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　Ⅰ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＩＧＦ－ＩＲ）和血管内皮生长因于（ａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔ－ｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）表达。结果转染ＨＢｘ基ＨｅｐＧ_２细胞（Ｘ细胞）ＩＧＦ－ＩＲ表达阳性率为８４％±３％，转染空载体对照细胞（Ｘ_ｏ细胞）为２６％±４％；免疫印迹法检测Ｘ细胞有明显条带。ＶＥＧＦ表达Ｘ细胞阳性率为８３％±５％，Ｘ_０细胞为２８％±６％、差异有非常显著意义；Ｘ细胞ＩＧＦ－ＩＲ表达增高近１．５倍。结论ＨＢｘ蛋白可同时激活ＩＧＦ－ＩＲ和ＶＥＧＦ，在肿瘤恶性生长、转移中起有重要作用。; 陶小红沈鼎明任红张晓实张大志叶珈古柏燕; 关键词：肝细胞癌乙型肝炎 HBX蛋白

转基因小鼠技术及其在肿瘤研究中的应用被引量：3: 2002年; 本文综述了近年来出现的一些转基因新方法 ,诸如精子载体法、核移植法及逆转录病毒法等。; 蓝轲古柏燕; 关键词：肿瘤研究

HBsAg在不同真核表达载体中的表达被引量：18: 1999年; 目的建立ＨＢｓＡｇ及其变异体的高效真核表达系统。方法从已构建的ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ＋－ＨＢｓ系列突变重组体获取ＨＢＶ－Ｓ基因片段，将其亚克隆到真核表达载体ｐＭＥＰ４，ｐＣＥＰ４，ｐＬＸＳＮ，ＰＸＴ１及ｐｃＤＮＡ３，从而构建了含ＨＢＶ－Ｓ基因及其突变型的一系列表达载体，并将其转染（或感染）人肝癌细胞系ＨｅｐＧｅ２。结果获得稳定分泌ＨＢｓＡｇＲ其突变体的抗性细胞系。结论各组真核表达载体皆能表达ＨＢｓＡｇ及其突变体，但在转染率、表达量及稳定性上存在差异。选择其中的高效、准确表达系统，将为ＨＢｓＡｇ变异株生物学性状的深入研究及进一步基因治疗、基因免疫的研究提供有用的工具。; 古柏燕任红; 关键词：乙肝表面抗原真核表达

教师模拟标准化患者的示教效果评价: 2004年; 张大志古柏燕赵有蓉; 关键词：教学方法

乙型肝炎病毒X基因对肝细胞系细胞凋亡及端粒酶活性的影响被引量：21: 2000年; 目的探讨乙型肝炎病毒Ｘ基因对肝细胞恶性变的作用机制。方法将带Ｃ基因、Ｓ基因的载体电转染导入ＨｅＰＧ_２细胞，筛选表达细胞克隆，复苏带Ｘ基因的ＨｅＰＧ_２细胞。ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测各株细胞的端粒酶活性。用反义寡核苷酸诱导细胞凋亡，流式细胞仪观测转染了Ｘ基因、Ｃ基因、Ｓ基因细胞的凋亡情况。结果表达细胞克隆经同步化处理，３９．５０％转染Ｘ基因的细胞进入细胞Ｓ周期，其端粒酶活性指数３．９５ ± ０．０７明显高于其它各组细胞。反义寡核苷酸诱导后，转染Ｘ基因细胞凋亡峰明显减小，凋亡率仅１．７５％；其细胞活性与反义寡核苷酸浓度成反比。结论乙型肝炎病毒Ｘ基因上调肝源细胞端粒酶活性，抑制细胞凋亡，这可能是诱导肝细胞恶性变的又一机制。; 周卫平沈钦海古柏燕任红张定凤; 关键词：乙型肝炎病毒X基因端粒酶乙型肝炎细胞凋亡

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古柏燕

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