吴东明
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- PRAS40与14-3-3蛋白各亚型相互作用的酵母双杂交系统检测
- 2007年
- PRAS40是近几年新发现的Akt作用底物,14-3-3结合蛋白。为确定PRAS40与14-3-3蛋白7种亚基间相互作用关系,利用gateway方法构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒pEG-PRAS40及转录激活质粒pJG-PRAS40,将PRAS40和14-3-3各亚型质粒分别作为诱饵蛋白质粒及转录激活质粒共转化酵母细胞EGY48,通过氨基酸营养缺陷生长实验及β-半乳糖苷酶显色反应分析两种蛋白相互作用程度。酶切鉴定证实成功地构建了pEG-PRAS40和pJG-PRAS40质粒,酵母双杂交实验结果显示PRAS40可以和14-3-3亚型tau,beta,zeta及epsilon相结合,epsilon较强,beta和zeta次之,tau较弱。此结果将为深入研究PRAS40与14-3-3蛋白生物学功能及发现药物靶标奠定基础。
- 刘康武黄蓓谭阳吴东明
- 关键词：GATEWAY技术酵母双杂交
- 14-3-3zeta蛋白多克隆抗体的制备与鉴定
- 14-3-3zeta蛋白是14-3-3蛋白家族中的一个成员，通常以二聚体的形式存在。14-3-3蛋白是真核细胞中普遍存在的高度保守的蛋白家族，由7个亚型组成。14-3-3zeta蛋白能够同时结合两个配体，是信号传导通路中...
- 吴东明
- 关键词：免疫印迹法多克隆抗体生物信息学免疫原性
- 文献传递
- 14-3-3 zeta蛋白C-端多肽抗体的制备与鉴定
- 2007年
- 目的制备14-3-3 zeta蛋白C-端多肽多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法用生物信息学分析14-3-3 zeta蛋白的同源性、亲水性和抗原性,设计并合成zeta蛋白C-端特异性的氨基酸序列,将其与牛血清白蛋白铰链;分别转化14-3-3的7个亚型质粒于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,并分离纯化His-zeta融合蛋白;分别以zeta C-端多肽及zeta融合蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体;用Western blot分析zeta蛋白C-端多肽抗体亚型特异性,并用该特异性抗体检测zeta蛋白在COS-7细胞中的分布规律。结果在14-3-3的7个亚型蛋白存在的条件下,zeta蛋白C-端多肽抗体仅识别zeta亚型蛋白,而zeta融合蛋白抗体可以识别gamma、zeta、tau3种亚型;14-3-3zeta蛋白主要分布在COS-7细胞质一侧。结论已获得了亚型特异性的14-3-3zeta多克隆抗体,该抗体可用于14-3-3zeta免疫细胞化学等分析。
- 吴东明黄蓓谭阳谭振
- 关键词：多克隆抗体生物信息学特异性
