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湖北地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与耐药性分析被引量：53: 2007年; 本研究旨在分离鉴定湖北地区致奶牛乳房炎的病原菌,鉴定细菌的耐药特征,为奶牛乳房炎防治提供理论依据。从湖北两个主要奶牛小区的9个不同规模的奶牛场采集牛奶样本200份,经检测,其中3份为临床乳房炎样本,49份为隐性乳房炎。两地区隐性乳房炎的检出率分别为36.4%(20/55)与20%(29/145)。两地区乳房炎牛奶的细菌种类分布也各不同。其中武汉东西湖地区停乳链球菌的分离率最高,占33.3%(8/24),而宜昌夷陵区以金黄色葡萄球菌分离率最高,占29%(9/31),其次为无乳链球菌,占25.8%(8/31)。从乳房炎牛奶中共分离到7种细菌共55株,其中金黄色葡萄球菌11株,表皮葡萄球菌10株,无乳链球菌10株,停乳链球菌14株,乳房链球菌2株,大肠埃希氏菌4株,克雷伯氏菌4株。分别对所有分离株进行12种药物的敏感性试验,结果表明所有菌株对先锋V、氧氟沙星均高度敏感,对临床常用的青霉素、链霉素具有较高的耐药性。; 刘朝王京仁张成栋吴波韩永佩赵波余亚军王建华刘友斌程贵宝冯哲田地陈焕春郭爱珍; 关键词：奶牛乳房炎抗药性

恩施州莼菜生产机械化发展对策研究: 水生蔬菜因其独有的风味、品质等特性，且带有非常鲜明的区域特点，被称为“中国特菜”，在保障我国“菜篮子”工程、农民致富增收等层面作用明显，也是我国建设美丽乡村和实施产业振兴的主要载体。水生蔬菜主要有莲藕、莲籽、菱角、荸荠、...; 吴波; 关键词：农民增加收入生产机械化; 文献传递

牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用被引量：28: 2007年; 为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条。结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性。比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条。在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较。本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%。快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景。; 张书环杨俊兴晁彦杰颜邦芬吴波曹莎陈颖钰谭亚娣陈焕春郭爱珍; 关键词：免疫层析牛分支杆菌牛结核抗体检测

牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和初步运用被引量：2: 2007年; 目的:建立一种快速检测牛结核抗体的新方法,用以诊断牛结核病。方法:利用胶体金免疫层析技术原理,用大肠杆菌表达的牛分枝杆菌重组抗原MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条。结果:粒径为40nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高;胶体金最佳标记pH值为6.0;MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5μg;MPB70抗原的最适包被浓度为3.0mg/mL;抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5mg/mL;交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性。比较实验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条。在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较。本试纸条与牛分枝杆茵分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%。结论:快速检测牛结核抗体的胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核根除计划中具有良好的应用前景。; 张书环杨俊兴晁彦杰颜邦芬吴波曹莎陈颖钰谭亚娣陈焕春郭爱珍; 关键词：免疫层析牛分枝杆菌结核抗体检测

四种牛分枝杆菌特异性蛋白融合表达及在牛结核病诊断中的临床应用被引量：8: 2007年; 以原核表达的MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6融合蛋白作为诊断抗原,建立牛结核病抗体检测间接ELISA(iELISA)。该iELISA与导致常见牛病的非相关抗原无交叉反应。用iELISA检测90份健康牛血清,确定样本阴阳性临界值(S/P)为0.17。与商品化胶体金试剂条(ICG)平行检测150份临床奶牛血清样本,结果与ICG的符合率为93.33%(140/150)。以结核菌素皮内试验(TST)为参考方法,检测了华中地区四个奶牛场的560头中国荷斯坦奶牛和90份进口奶牛结核阴性血清,结果iELISA与TST的总符合率为87.32%(489/560)。对其中22头奶牛进行鼻拭子分菌检验,4头分菌阳性奶牛的血清抗体检测也为阳性,iELISA与细菌培养的总符合率为77.27%(17/22)。以TST为参考方法,iELISA的敏感性和特异性分别为72.37%和89.67%。; 吴波张书环邓铨涛项杰陈军刘朝陈鑫宋念华陶淑珍黄继根韩永佩赵波林祥梅陈焕春郭爱珍; 关键词：IELISA 牛结核病 MPB70 CFP10 ESAT-6

Desulfovibrio vulgaris Hildenborough的销酸盐适应机制及抗压全局转录因子功能研究: 普通脱硫弧菌（Desulfovibrio vulgaris）是一种异化硫酸盐还原菌,广泛存在于多种厌氧环境,如输油管,地下储油罐等石油生产设施,废水处理沉积物中。普通脱硫弧菌硫化还原过程中产生的酸性硫化物对含铁设施造成腐...; 吴波; 关键词：传代培养全基因组测序; 文献传递

人和动物结核病新型特异诊断试剂: 陈焕春詹枝华项杰曾庆志周金海张书环涂玲玲刘颖郭爱珍凌洁玉邓铨涛晁彦杰匡有吉廖娟红吴波于清龙刘冬光陈颖钰熊家军陈军胡长敏杨利国; 该研究成功研制了适于牛结核与梅花鹿结核的牛结核快速检测胶体金试纸条，适合于牛和梅花鹿的高通量检测ELISA试剂盒，和人、牛、梅花鹿结核高准确度检测IFN-γ试剂盒。通过临床评价证实其具有较高的灵敏度与特异性，且分别适合于...; 关键词：; 关键词：结核病

人和动物结核病新型特异诊断试剂研究: 郭爱珍陈焕春詹枝华项杰杨利国胡长敏陈军曾庆志熊家军周金海陈颖钰张书环刘冬光涂玲玲于清龙刘颖吴波廖娟红匡有吉晁彦杰邓铨涛凌洁玉; 结核病是主要由结核分枝杆菌与牛分枝杆菌引起的、人兽共患传染病。传统结核检测方法检出率低，生物安全风险大，或受环境分枝杆菌干扰，费时费力，不适合于野生动物。为此，向武汉市科技局申请项目并获得资助（20066002056）。...; 关键词：; 关键词：结核病

牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析被引量：5: 2007年; 目的牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析。方法应用PCR方法从牛分枝杆菌临床分离株基因组中扩增获得mpb70、mpb83、cfp-10和esat-6四个目的基因片段。采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因cfp10-esat6和mpb83-cfp10-esat6,将mpb70和mpb83-cfp10-esat6串连于载体pUC19-Linker上,再将mpb70-mpb83-cfp10-esat6连于表达载体pET28a(+)中得到重组质粒pET70-83-C10-E6。转化BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导获得以可溶形式表达的融合蛋白。用Ni2+亲合层析法纯化该融合蛋白。结果经ELISA验证该融合蛋白能分别与抗原蛋白MPB70、MPB83和CE(cfp10-esat6)的多抗反应,说明该融合蛋白具有四个抗原蛋白的免疫学活性。Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛其它疾病的阳性血清不反应。热稳定性试验证明该融合蛋白属于热稳定性蛋白。结论融合表达了牛分枝杆菌的四种特异性抗原蛋白,该蛋白具有单个蛋白的免疫原性和稳定性,作为一种新型的诊断抗原具有良好的应用前景。; 张书环吴波颜邦芬曹莎陈颖钰晁彦杰凌洁玉谭亚娣陈焕春郭爱珍; 关键词：牛分枝杆菌结核

间接ELISA检测牛分枝杆菌抗体方法的建立及初步应用被引量：9: 2007年; 针对现行牛结核病检疫方法结核菌素皮内变态反应(TST)的不足,本研究选用牛分枝杆菌特异性抗原MPB83、MPB70及CFP10与ESAT-6融合蛋白(CFP10-ESAT-6)分别建立了检测牛分枝杆菌特异抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。上述3种抗原中一种以上抗原的特异性抗体为阳性时,即可判断为结核检测阳性。以TST为标准,判断ELISA方法的敏感性与特异性。结果证明,ELISA方法具有较好的敏感性(71.4%)。对ELISA检测为强阳性的奶牛进行细菌分离,并对5头结核菌分离阳性奶牛进行TST检测,结果有3头为TST阳性,2头可疑,显示出ELISA方法对严重感染牛的检测较TST具有更高的敏感性。由于TST与ELISA分别以细胞免疫与体液免疫为基础,两种检测方法结合应用可进一步提高牛结核病的检出率。; 张桂荣万学济陈颖钰吴波晁彦杰吕文钦博郭爱珍陈焕春谭亚娣; 关键词：牛分枝杆菌 ELISA MPB70 检疫

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吴波

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