夏静
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划四川省应用基础研究计划项目四川省重点科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 含鸡源启动子的真核表达载体的构建及IBV S1蛋白抗原表位的表达
- 2015年
- 利用PCR方法扩增出鸡β-肌动蛋白(β-actin)启动子基因序列,克隆至pcDNA3.1和pCIneo载体中以替代CMV启动子,获得含鸡源启动子的真核表达载体pcDNA-act和pCIneo-act。将IBV ZY3S1蛋白抗原表位基因亚克隆到启动子替换前后的质粒中,然后将重组质粒转染至鸡胚成纤维细胞(CEF)中,采用间接免疫荧光试验检测转染细胞对S1蛋白抗原表位的表达。将重组质粒以150μg/只的剂量肌注免疫SPF雏鸡,同时设立IBV灭活疫苗组及PBS空白对照组,经间接ELISA检测免疫前后血清中IBV特异性抗体,最后使用ZY3强毒株给各组实验动物攻毒,观察鸡群的发病死亡情况,计算攻毒保护率。结果显示,替换启动子后的表达载体在CEF中对S1蛋白抗原表位的表达量以及实验动物的抗IBV抗体水平均高于未更换启动子的相应载体,攻毒后鸡群的发病率和死亡率均比替换前降低,说明外源基因的表达和启动子的来源有密切的关系。
- 牛婷余松城邹年莉吴瑞婷杨晓林夏静黄勇
- 关键词：Β-ACTINS1蛋白抗原表位
- 肠致病性大肠杆菌紧密黏附素的作用机制及基因分型研究进展被引量：2
- 2022年
- 肠致病性大肠杆菌(Enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)引起的腹泻性疾病是世界范围内重要的公共卫生问题。在EPEC黏附肠道细胞的过程中,紧密黏附素与易位受体Tir相互作用触发了肌动蛋白的组装,在细菌与宿主细胞连接部位形成了紧密附着的基座。紧密黏附素不仅是EPEC产生特征性黏附/消除病变的关键因子,还对宿主具有不同的组织向性。编码紧密黏附素的eae基因是鉴定EPEC菌株的靶点,其序列存在相当大的异质性,是EPEC分型的重要遗传学基础。同时,携带不同eae亚型的LEE致病岛可能在不同血清型、不同类型的致泻性大肠杆菌菌株之间发生水平转移。因此,在预测EPEC腹泻性流行病的严重程度时,可对EPEC菌株的eae基因变异做鉴定和分型,为监测方向提供参考。
- 杨蕾李俊霖申玉玺罗钰雯夏静黄勇黄勇邹立扣颜其贵
- 关键词：肠致病性大肠杆菌基因分型
- 1株鸽源鸡杆菌复合群3的分离和鉴定被引量：6
- 2014年
- 报道我国鸽场中鸡杆菌的感染情况.四川某种鸽场的种鸽出现以消瘦、呼吸困难、气管和肺出血、腹膜炎、输卵管炎等为主要特征的疾病.选取代表性病例,进行细菌分离和病毒检测,并对分离菌进行形态学观察、生化鉴定、动物试验、药敏试验和16S rRNA 基因序列分析.结果显示,部分病鸽只检测到新城疫病毒；从肝、肺中分离到1株革兰阴性短杆菌,命名为 SC01,该菌株为致病菌,小鼠半数致死量（LD50）为1.26＆#215;109 CFU/mL,能发酵多数糖和醇类,对头孢类药物较敏感.将 SC01与 GenBank 中同源性较近的15株细菌的16S rRNA 基因序列进行同源性分析,发现 SC01株与4株鸡杆菌复合群3（Gallibacterium genomo sp.3）的同源性为98.5%~99.5%,其中与EU423996的同源性最高,为99.5%,证实该菌株为鸡杆菌复合群3.试验结果为鸡杆菌复合群3感染的流行病学调查、诊断与治疗提供了新的参考.
- 杨晓林陈英余松城邹年莉吴瑞婷夏静牛婷王富妍黄勇
- 关键词：RRNA动物试验
- H9N2亚型AIV NA基因多聚腺苷酸化信号位点对病毒复制的影响
- 2022年
- H9N2亚型禽流感病毒NA基因vRNA 5′端的多聚腺苷酸化信号位点具有多样性,突变发生时,该位点失去与聚合酶的结合能力或结合能力减弱,阻碍多聚腺苷酸化过程,影响病毒mRNA的转录过程。为探究H9N2亚型禽流感病毒NA基因5′端多聚腺苷酸化信号位点处5个或6个连续的尿嘧啶(U_(5)或U_(6))碱基对病毒生物学特性的影响,以一株四川分离株A/Chicken/China/Sichuan/CQY/2014(H9N2)为骨架的反向遗传系统构建突变株。结果显示,含U_(5)的H9N2突变株(rCQYU_(5)-H9N2)的血凝效价、TCID_(50)和EID_(50)滴度均高于含U_(5)的H9N2突变株(rCQYU6-H9N2),但生长曲线无显著差异,表明H9N2 NA基因5′端多聚腺苷酸化信号位点U_(5)或U_(6)结构均不影响病毒的拯救,但U_(5)有助于提高病毒在鸡胚与细胞中的复制滴度。本实验研究结果可为H9N2亚型禽流感病毒的复制机理等研究提供参考。
- 罗钰雯夏静李念灵李永新申玉玺李淑芸陈雯樊顺怡崔敏黄勇
- 关键词：禽流感病毒
- 髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒四川株SCGS-1的分离鉴定及前病毒cDNA重组质粒的构建被引量：4
- 2013年
- 为分析髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒（ALV-J）地方分离毒株的分子特征及开展该病毒的反向遗传操作研究，本试验从四川某肉种鸡场髓细胞瘤病变病鸡的组织中分离到1株髓细胞瘤型ALV-J，命名为SCGS-1。序列测定表明其前病毒cDNA全序列长7499bp，与其他ALV—J代表毒株序列相似性均为95％～99％。在所有基因中，其env基因和LTR序列与其他毒株相应序列同源性相对较低，env基因同源性为93．0％～99．5％，LTR基因同源性为92％～95％，p01基因同源性为97％～990．4，gag基因同源性为94％～97％。根据该毒株序列和质粒pUC19的序列，将SCGS-1株前病毒eDNA全序列分3段克隆入pUC19中，构建含SCGS-1前病毒cDNA的重组载体并命名为pUC-SCGS。试验结果为研究ALV—J的进化规律和开展反向遗传操作打下基础。
- 林艳赵扬夏静邹年丽文心田曹三杰黄勇
- 西南部分地区Ⅰ群禽腺病毒的分子流行病学调查及致病性研究被引量：12
- 2017年
- 2015—2016年,西南地区多个养鸡场发生疑似禽腺病毒感染病例。实验从发病鸡场采集肝组织,利用鸡胚肾细胞(CEK)进行病毒分离,共分离出16株Ⅰ群禽腺病毒(FAd V)。通过对hexon基因L1环临近的保守序列进行PCR扩增和序列测定,发现16株FAd V分属4个血清型,其中13株为FAd V-4型,FAd V-8a,FAd V-8b和FAd V-2型各占1株。选取不同血清型的4个代表毒株CH/SCDY/1604(FAd V-4)、CH/GZXF/1512(FAd V-2)、CH/CQBS/1504(FAd V-8a)、CH/CQBS/1512(FAd V-8b)进行鸡的致病性实验,结果显示,感染CH/SCDY/1604(FAd V-4)的死亡率达80%,CH/CQBS/1504(FAd V-8a)感染组死亡率为20%,而CH/GZXF/1512(FAd V-2)和CH/CQBS/1512(FAd V-8b)组的鸡只有发病没有死亡。FAd V-4是西南地区流行的主要血清型且其致病性极高,其致病性主要表现为心包积液综合征(HPS)。试验结果可为西南地区Ⅰ群禽腺病毒感染的防治提供参考。
- 姚克昌刘月月游国进李淑芸夏静何肖李雯雯杜莉静韩新锋黄勇
- 关键词：心包积水综合征流行病学调查
- 2011年～2012年四川地区J亚型禽白血病分子流行病学调查被引量：4
- 2014年
- 为了解2011年～2012年四川地区J亚型禽白血病病毒（ALV-J）流行情况及流行病毒株的分子特征,本研究采集四川地区疑似禽白血病的病料样品784份（血液样品700份,组织样品84份）进行PCR检测,并对部分样品的gp85基因进行序列测定和分析.血液样品和组织样品ALV-J检出率分别为3.1％ （22/700）和14.3％（12/84）.核苷酸序列比对结果表明,18个阳性样品的gp85基因核苷酸同源性为87.7％～99.8％,与ALV-J株HPRS-103的核苷酸同源性为87.3％～98.2％,与以前分离的J亚群四川株SCGS-1的核苷酸序列同源性为87.9％～94.4％.遗传进化分析表明,18个样品分别属于不同的分支,其中来自石棉的样品SM与其他样品的遗传距离最远.该调查结果显示四川地区鸡场的ALV-J感染比较普遍,其gp85基因存在明显的遗传多样性,引种是导致这种遗传多样性的重要原因.
- 余松城任雅牛婷夏静吴瑞婷杨晓林易林邹年莉黄勇
- 关键词：GP85基因分子流行病学
- 一株火鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及16SrRNA基因序列分析被引量：2
- 2016年
- 四川某火鸡养殖场的20~40日龄的雏火鸡发生一起以呼吸困难,斜颈、头部肿大、鼻炎、眼炎、气囊炎、鼻窦和眶下窦有干酪样渗出物为主要临床表现的传染性疾病。采集发病火鸡眼分泌物进行细菌分离,然后通过细菌的纯化、培养特性、形态学特性、16sRNA序列测定和分析对分离菌进行鉴定,确定分离到1株奇异变形细菌并命名为SH株。SH株为革兰氏染色阴性、在LB平皿上画线呈扩散状生长、血平皿上有溶血性现象。SH株16SrRNA与奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）的同源性为99.1~99.8%,与普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的同源性为98.5%,与豪氏变形杆菌（Proteus hauseri）的同源性为98.1%,与产黏变形杆菌（Proteus myrofaciens）和潘氏变形杆菌（Proteus penneri）的同源性为98%。药敏实验结果表明对丁胺卡拉和环丙沙星敏感。实验结果对生产上该类疾病的预防和控制提供了参考。
- 姚克昌杨大洪李淑芸夏静何肖黄勇
- 关键词：奇异变形杆菌药敏实验火鸡
- 1株髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒感染性克隆的构建与病毒拯救被引量：5
- 2013年
- 为构建髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-J)SCGS-1株前病毒cDNA分子标记感染性克隆,根据SCGS-1全基因测序结果,分3段进行全序列PCR扩增,顺次连接至pUC19,构建SCGS-1株前病毒cDNA感染性克隆pUC-SCGS;通过重叠PCR方法对SCGS-1基因组进行沉默突变,在4 684位点引入SalⅠ位点,构建SCGS-1株分子标记感染性克隆pUC-△SCGS;以pUC-SCGS和pUC-△SCGS重组质粒转染CEF进行病毒拯救,并通过PCR、间接免疫荧光与双抗体夹心ELISA进行拯救病毒检测。结果显示,成功构建pUC-SCGS与pUC-△SCGS重组质粒,转染后盲传第3代、第4代细胞与上清中均检测到拯救病毒;间接免疫荧光与抗原ELISA方法分别在CEF细胞和上清中检测到ALV-J抗原。成功拯救获得分子标记ALV-J。
- 林艳夏静邹年莉郭明萍王富妍赵扬文心田曹三杰黄勇
- 关键词：J亚群禽白血病病毒感染性克隆分子标记病毒拯救
- 禽传染性支气管炎病毒Nsp2蛋白与宿主蛋白eIF2α的互作鉴定
- 2022年
- Nsp2蛋白是冠状病毒的非结构蛋白,在病毒早期感染中具有重要作用。【目的】为初步筛选可能与禽传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV)Nsp2蛋白互作的宿主蛋白,鉴定Nsp2蛋白与真核翻译起始因子2α亚基(eIF2α)的相互作用。【方法】以pCAGGs-Flag-Nsp2和pCAGGs-Flag载体转染后的鸡胚肾(CEK)细胞为研究对象,利用免疫共沉淀(Co-IP)和液相色谱-串联质谱(LC⁃MS/MS)技术筛选出可能与IBV Nsp2蛋白发生互作的宿主蛋白eIF2α,通过免疫共沉淀和间接免疫荧光试验进一步验证二者相互作用。【结果】经免疫共沉淀与质谱分析后筛选到97个可能与Nsp2蛋白互作的宿主蛋白,其中宿主抗病毒反应的关键蛋白eIF2α与Nsp2蛋白的相互作用通过免疫共沉淀和间接免疫荧光试验,表明二者存在直接互作关系,并共定位于细胞质中;此外,Nsp2蛋白表达和IBV感染都能显著提高宿主内源性eIF2α的转录水平。【结论】利用免疫共沉淀联合质谱技术筛选到CEK细胞中存在的97种可能与IBV Nsp2互作的候选蛋白,利用免疫共沉淀与间接免疫荧光证明候选蛋白eIF2α与Nsp2蛋白在细胞质中存在直接互作,同时发现Nsp2蛋白过表达和IBV感染会导致CEK细胞内eIF2α的转录水平显著增强。本研究为进一步探索冠状病毒非结构蛋白Nsp2的生物学功能奠定了基础,并提供了IBV入侵宿主时Nsp2蛋白的作用机制研究的新线索。
- 李念灵李永新樊顺怡申玉玺李淑芸夏静王安东崔敏韩新锋黄勇余松城
- 关键词：禽传染性支气管炎病毒质谱免疫共沉淀EIF2Α
