孔祥祯
- 作品数：7 被引量：4H指数：1
- 供职机构：天津大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 酪氨酸代谢物对肺癌细胞增殖、周期及化疗药物敏感性的影响被引量：3
- 2017年
- 目的探讨4种酪氨酸代谢物对肺癌细胞增殖、周期及化疗药物敏感性的影响。方法不同浓度的酪氨酸代谢物——酪氨酸、4-羟苯丙酮酸(HPPA)、尿黑酸(HGA)、延胡索酸(FA)分别处理A549细胞,通过高内涵实时监测肺癌细胞的增殖,流式细胞仪检测肺癌细胞周期的变化及对化疗药物的敏感性,Western印迹检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 4种酪氨酸代谢物对A549细胞的增殖及周期均无影响。HGA可降低吉非替尼(Gefitinib)诱导的A549细胞凋亡,抑制Bax表达,同时上调Bcl-2的表达水平;FA则可增加其诱导的A549细胞凋亡,促进Bax表达,同时下调Bcl-2的表达水平。酪氨酸和HPPA对Gefitinib诱导的细胞凋亡均无明显影响。结论HGA与FA可调节肺癌细胞化疗药物的敏感性,揭示了酪氨酸代谢通路对肺癌细胞的调控作用,为肿瘤代谢异常的研究奠定了基础。
- 李洁赵珂孔祥祯詹轶群杨晓明李长燕
- 关键词：细胞周期细胞增殖药物敏感性
- 酪氨酸代谢酶 HPD 在肺癌发生和发展中的作用及机制研宄
- 本论文的研究内容分为两部分,第一部分对酪氨酸代谢酶HPD(羟苯丙酮酸二加氧酶)在肺癌发生和发展中的作用及作用机制进行了系统研究,第二部分在前期研究基础上,深入探讨了转录因子THAP11在造血分化中的作用机制。HPD是酪氨...
- 孔祥祯
- 关键词：HPD肺癌造血分化
- 文献传递
- THAP11在造血细胞分化中的作用研究
- THAP11是THAP蛋白家族的最新成员，前期研究表明THAP11是调控细胞生长、胚胎形成和ES细胞多能性的一个转录因子，THAP11通过下调c-Myc抑制细胞增殖。c-Myc是调控红系巨核系分化的关键转录因子，并且表达...
- 孔祥祯
- 关键词：造血分化细胞增殖
- 酪氨酸代谢酶HPD在肺癌发生和发展中的作用及机制研究
- 本论文的研究内容分为两部分，第一部分对酪氨酸代谢酶HPD（羟苯丙酮酸二加氧酶）在肺癌发生和发展中的作用及作用机制进行了系统研究，第二部分在前期研究基础上，深入探讨了转录因子THAP11在造血分化中的作用机制。 HPD是...
- 孔祥祯
- 关键词：肺肿瘤病理机制转录因子
- 文献传递
- 细胞角蛋白8GFP/Puro双标干涉慢病毒系统的构建及对细胞凋亡的影响
- 2013年
- 目的构建细胞角蛋白8(CK8)的双标慢病毒干涉载体,获得高滴度慢病毒颗粒,感染HCT116细胞建立稳定株,检测CK8敲低对细胞凋亡的影响。方法将CK8的siRNA序列插入慢病毒表达载体GV248,并与包装质粒PMD、SPA共转染293T细胞,36、48 h分两次收集慢病毒上清,应用流式细胞术检测病毒滴度。获得的病毒感染HCT116细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞,Western blotting检测干涉效果。采用Annexin V/PI染色检测干涉CK8对化疗药物顺铂诱导的细胞凋亡的影响。结果与结论成功构建CK8干涉慢病毒载体并得到干涉稳定株,在HCT116细胞中干涉CK8使细胞对顺铂引起的凋亡更加敏感。
- 金延超尹荣华郑巍薇孔祥祯詹轶群杨晓明李长燕
- 关键词：GFPRNAI凋亡顺铂
- 人THAP11基因RNAi慢病毒表达系统的建立
- 2012年
- 目的构建人THAP11基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,制备高滴度病毒颗粒,敲低K562细胞和脐带血CD34+细胞中THAP11表达。方法采用第三代慢病毒包装系统,将含有特异性干涉THAP11的DNA序列克隆入穿梭质粒pSicoR中,构建siTHAP11-pSicoR质粒。在脂质体介导下,siTHAP11-pSicoR与包装质粒pLP1,pLP2,pLP/VSVG共转染HEK293T细胞,获得高滴度慢病毒颗粒。感染K562细胞,检测内源THAP11敲低效果。感染人CD34+细胞,流式分选GFP阳性细胞,检测原代细胞中THAP11的敲低效果。结果成功构建针对THAP11两个位点的RNAi慢病毒载体siTHAP11-1和siTHAP11-2并获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达1.8×108TU/ml。感染K562细胞后建立稳定株,THAP11的蛋白水平和mRNA水平均有下调。感染CD34+细胞效率达30%以上,siT-HAP11-1可下调THAP11mRNA约80%,siTHAP11-2约下调85%。结论成功构建THAP11的RNAi慢病毒载体,包装后的病毒颗粒可有效敲低细胞株及原代细胞中内源性THAP11的表达,为后续研究THAP11对CD34+细胞的影响奠定基础。
- 孔祥祯尹荣华郑巍薇詹轶群杨晓明李长燕
- 关键词：RNA干扰慢病毒细胞系人造血干细胞
- HPD基因启动子报告基因载体构建与转录活性分析被引量：1
- 2015年
- 目的:HPD是一种酪氨酸分解代谢途径中的关键酶,特异表达于肝脏。目前对HPD的研究主要集中在HPD与酪氨酸血症等疾病的关系上,而对其转录调控的报道较少,并且对HPD在肝脏中特异性表达的转录调控机制尚不清楚,也未见报道。通过构建HPD基因启动子荧光素酶报告基因载体,检测其在肝源细胞中的特异转录活性,进而揭示其肝脏特异性表达的调控机制。方法:运用UCSC在线数据库分析人HPD基因组结构,并获得其5'端上游启动子区域-2000^+39bp的DNA序列。以人的肝癌细胞Hep G2基因组DNA为模板,利用PCR扩增该序列,并克隆到p GL3-Basic荧光素酶报告基因载体上。通过设计不同引物,进一步构建系列缺失体,共获得7个不同长度的荧光素酶报告基因载体。将构建的载体分别转染Hep G2、L02及HEK293细胞,通过双荧光素酶活性分析实验检测不同缺失体的转录活性。结果:报告基因实验结果显示-600^-400区域在肝源细胞系Hep G2和L02细胞中具有较强转录活性,而在HEK293细胞中活性较低,-400^+39区段则在两种细胞中均有转录活性。生物信息学分析结果显示-600^-400区域内存在较多肝脏特异性转录因子结合位点。结论:成功构建了HPD基因启动子荧光素酶报告基因载体,发现-600^-400存在调控HPD肝脏特异表达的关键元件,为进一步深入揭示HPD肝脏特异性表达的转录调控机制奠定了理论基础。
- 满善晴孔祥祯董小明陈慧詹轶群李长燕杨晓明
- 关键词：启动子
