孙凯
- 作品数:9 被引量:5H指数:1
- 供职机构:河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金:国家科技支撑计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
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- 人β2微球蛋白成熟肽基因克隆及其原核表达载体的构建被引量:1
- 2010年
- 根据GenBank基因库中人β2微球蛋白(β2m)成熟肽基因序列设计2对引物,使用RT-PCR法从健康人血液中扩增人β2m成熟肽基因,扩增产物进行T-A克隆和测序.结果表明,获得的人β2m成熟肽基因为297 bp,与模板序列的同源性为100%.利用基因重组技术,将β2m成熟肽基因亚克隆入pET-28 a(+)载体中,经PCR、酶切和测序鉴定,证实所获重组表达质粒pET-28/Humβ2m中含有目的片段,且连接、构建正确,表明成功构建了重组表达质粒pET-28/Humβ2m.
- 张蕾李新生崔保安陈红英魏战勇孙凯宋亚鹏阮武营
- 关键词:原核表达载体成熟肽重组表达质粒四聚体
- 鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基因的克隆与分子进化分析
- 2009年
- 根据GenBank中登录(登录号:AB115244)的鸭MHC-Ⅰα链序列设计并合成1对引物,采用RT-PCR技术从鸳鸯鸭脾脏组织中克隆出鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基因,并进行T-A克隆和序列测定。结果表明,所获得的鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基因长909bp,编码303个氨基酸的多肽,含一个完整的鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因。序列比较发现,鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基因与GenBank登录的其它品种的鸭MHC-Ⅰα链核苷酸同源性为89.4%~91.0%,与人和其他动物的MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因的氨基酸同源性为11.1%~79.3%,表明MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因存在着种的多样性,且亲缘关系越近,同源性越高。鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因的成功克隆为进一步研究鸭MHC-Ⅰ基因表达、生物学活性和应用奠定基础。
- 孙凯李新生崔保安陈红英魏战勇张蕾宋亚鹏阮武营
- 关键词:鸳鸯鸭克隆
- HLA-A胞外区成熟肽基因的克隆及其原核表达载体的构建
- 2009年
- 根据GenBank基因库中HLA-A胞外区成熟肽基因序列设计2对引物,用RT-PCR法从健康人血液中扩增HLA-A胞外区基因,扩增产物进行T-A克隆、测序.结果表明,获得的HLA-A胞外区基因大小为819bp,与模板序列的同源性为96%.利用基因重组技术,将HLA-A胞外区基因亚克隆入pET-21a(+)载体中.经PCR、酶切和测序鉴定,证实所获重组表达质粒pET–21/HLA-A中含有目的片段,且连接、构建正确,表明成功构建了重组表达质粒pET–21/HLA-A.
- 张蕾李新生崔保安陈红英孙凯宋亚鹏
- 关键词:成熟肽基因克隆原核表达
- 白来航鸡MHC-Ⅰ重链基因克隆与序列分析
- 2010年
- 参照GenBank发表的鸡MHC-Ⅰ重链(BF2)基因序列,设计并合成1对引物,无菌采取纯系来航SPF鸡抗凝静脉血,直接提取总RNA,采用RT-PCR技术,PCR扩增BF2基因,并进行克隆和序列测定。测序结果表明,获得了来航鸡BF2基因,其大小为1 035 bp,包含一个完整阅读框,共编码345个氨基酸。与GenBank上鸡BF2基因序列进行比较,其核苷酸同源性在93.0%~97.6%之间,氨基酸同源性在83.2%~97.1%之间。来航鸡与人和其他种动物的MHC-Ⅰ重链基因核苷酸同源性在12.9%~83.6%之间。
- 宋亚鹏李新生崔保安陈红英魏战勇孙凯张蕾阮武营
- 关键词:白来航鸡克隆
- 新城疫病毒—减蛋综合征病毒抗原液与抗原浓缩液的HA效价关系被引量:2
- 2010年
- 采用Millipore CogentTM超滤系统对新城疫病毒抗原液和减蛋综合征病毒抗原液进行浓缩试验。结果显示,新城疫病毒浓缩抗原液的HA效价按浓缩比率相应上升,而超滤液的HA效价为阴性;减蛋综合征病毒浓缩病毒液的HA效价均比未浓缩病毒液相应增高,而超滤液的HA效价均为零。
- 阮武营崔保安李新生高文明孙凯
- 关键词:新城疫病毒减蛋综合征病毒HA效价抗原
- 鸳鸯鸭MHCⅠ类分子蛋白表达与结构分析及其限制性病毒T细胞表位的筛选
- 主要组织相容性复合体I(MHC I)广泛存在于所有有核细胞表面,是由MHC I类基因编码的重链(α链)同另一条染色体上p2m基因编码的轻链(p2m链)以非共价键连接而组成,它可以和病毒的某些抗原多肽结合,将多肽递呈到细胞...
- 孙凯
- 关键词:RT-PCR技术
- 文献传递
- 鸭MHC-Ⅰ α链胞外区成熟肽基因克隆、序列分析及其表达载体的构建
- 目的:克隆鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pET/Du MHC-Ⅰ。方法:从GenBank/DDBJ/EMBL基因库中读取鸭MHC-Ⅰ基因进行序列分析并设计1对引物,使用RT-PCR...
- 孙凯李新生崔保安陈红英魏战勇张蕾宋亚鹏阮武营
- 关键词:克隆原核表达载体
- 文献传递
- 鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因的克隆、序列分析及表达载体构建被引量:1
- 2010年
- 【目的】克隆鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pET/DuMHC-Ⅰ。【方法】依据GenBank/DDBJ/EMBL基因库中公布的鸭MHC-Ⅰ基因序列设计1对引物,采用RT-PCR技术从鸳鸯鸭脾脏组织中扩增MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因cDNA,T-A克隆到pGEM-T Easy载体中,并进行测序。通过PCR和酶切的方法,将鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因亚克隆入pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET/Du MHC-Ⅰ,并进行PCR、NcoⅠ和NotⅠ双酶切及测序鉴定。【结果】测序结果表明,获得了MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因,其长度为813 bp,编码271个氨基酸。MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因与GenBank中登录的鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因序列的同源性为89.4%~91.7%,氨基酸同源性为78.2%~83.7%;与鸡、鹅、鹌鹑、草鱼、狗、猪、鼠和人的MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽氨基酸序列的同源性分别为64.6%,79.3%,59.4%,41.0%,26.6%,45.0%,12.5%和22.1%,这表明MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因存在着种属多样性,且...
- 孙凯李新生崔保安陈红英魏战勇张蕾宋亚鹏阮武营
- 关键词:原核表达载体
- 一例臧獒脾脏纤维肉瘤的病理学诊断
- 2006年
- 本文运用巨检和常规石蜡切片病理学方法对一例臧獒脾脏肿瘤进行诊断,结果显示肿瘤组织的异型性明显,肿瘤细胞呈成纤维细胞样,排列紊乱,形态、大小不一,胞核形状多样,病理性核分裂相多见,确诊为脾脏纤维肉瘤。
- 王平利孙凯焦喜兰梁宏德
- 关键词:脾脏纤维肉瘤病理学