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通过染色体整合表达古菌乙酰化酶合成N-末端乙酰化胸腺肽β4被引量：2: 2011年; 胸腺肽β4(Tβ4)是N-末端乙酰化的43肽,具有多种重要生物学功能.其生物合成存在两大难点,即乙酰化修饰和小分子肽的表达.本研究发现来自古菌Sulfolobus solfataricus的乙酰化酶ssArd1可以催化Tβ4的N-末端乙酰化修饰.利用Red同源重组技术将ssArd1基因表达盒整合至E.coli BL21(DE3)染色体的lpxM位点上,构建了可以实现Tβ4N-末端乙酰化修饰的新型宿主E.coli BDA.将Tβ4编码基因融合在改造的微型Spl DnaX Intein的N端,并在Intein的C端添加His标签,构建了表达载体pET-Tβ4-Intein.在E.coli BDA中表达的融合蛋白,经镍亲和层析纯化后用β-巯基乙醇诱导融合蛋白切割释放小分子多肽,获得了具有N-末端乙酰化的Tβ4.; 曹赛戴红梅孙旭颛孙丹丹和金周司信喜李树龙方宏清陈惠鹏谢达平周长林; 关键词：乙酰化酶 INTEIN

Red同源重组在大肠杆菌基因组修饰中的应用被引量：5: 2011年; Red同源重组技术发展迅速,已广泛应用于大肠杆菌基因组修饰,在点突变、基因敲除、序列整合等方面发挥着重要作用。简要综述了Red同源重组的重组机制和操作策略等研究进展,并介绍了Red同源重组在大肠杆菌基因组减小及多基因代谢途径优化方面的应用情况。; 孙旭周长林方宏清; 关键词：RED同源重组大肠杆菌基因敲除

基于PTS缺陷型大肠杆菌构建莽草酸生产菌被引量：6: 2011年; 对大肠杆菌芳香族氨基酸合成途径进行代谢流改造,以实现高效的生物制备莽草酸。以磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(PTS系统)敲除菌DH5α△ptsHIcrr(DHP)为基础,特异性敲除aroL、ydiB基因并转入受阿拉伯糖诱导表达的T7-RNA聚合酶基因,最终构建一系列产莽草酸宿主菌。再将aroE、aroB、tktA、glk、aroFfbr组成的系列基因串联起来置于质粒上,在T7启动子控制下表达,经摇瓶培养检测得知,不同重组菌产莽草酸能力与对照相比均有明显提高,其中DHPYA-T7/pAOC-TGEFB菌株产量最高,可达到392 mg/L。为进一步构建高表达莽草酸工程菌奠定基础。; 邹永康周军智孙旭蔡亚非戴红梅李树龙周长林方宏清; 关键词：莽草酸

一种工程菌及其在生产紫穗槐-4, 11-二烯中的应用: 本发明公开了一种工程菌及其在生产紫穗槐-4，11-二烯中的应用。本发明提供了一种工程菌，是在大肠杆菌中导入如下基因得到的重组菌：紫穗槐-4，11-二烯合酶基因、HMG-CoA还原酶基因、HMG-CoA合酶基因、甲羟戊酸激...; 方宏清吴涛孙旭戴红梅李树龙

一种工程菌及其在生产紫穗槐-4,11-二烯中的应用: 本发明公开了一种工程菌及其在生产紫穗槐-4，11-二烯中的应用。本发明提供了一种工程菌，是在大肠杆菌中导入如下基因得到的重组菌：紫穗槐-4，11-二烯合酶基因、HMG-CoA还原酶基因、HMG-CoA合酶基因、甲羟戊酸激...; 方宏清吴涛孙旭戴红梅李树龙; 文献传递

N-末端乙酰化蛋白或多肽的制备方法及其专用工程菌: 本发明公开了一种能产生N-末端乙酰化的蛋白质或多肽的方法及其专用工程菌。该重组工程菌，是将表达来自古细菌的乙酰化酶的表达盒整合到宿主菌染色体上，得到在染色体上表达古细菌乙酰化酶的重组菌；所述表达古细菌乙酰化酶的表达盒包括...; 方宏清戴红梅孙旭任元涛司信喜李树龙陈惠鹏周长林

N-末端乙酰化蛋白或多肽的制备方法及其专用工程菌: 本发明公开了一种能产生N-末端乙酰化的蛋白质或多肽的方法及其专用工程菌。该重组工程菌，是将表达来自古细菌的乙酰化酶的表达盒整合到宿主菌染色体上，得到在染色体上表达古细菌乙酰化酶的重组菌；所述表达古细菌乙酰化酶的表达盒包括...; 方宏清戴红梅孙旭任元涛司信喜李树龙陈惠鹏周长林; 文献传递

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孙旭