张磊
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 特发性血小板减少性紫癜患儿骨髓MSC TGF-β1和HGF的表达及对免疫的调节作用的研究被引量：5
- 2009年
- 目的:研究特发性血小板减少性紫癜(Idiopa thicthrombocytopenic purpura,ITP)患儿骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)体外的免疫抑制能力。方法:采集ITP患儿和对照儿童的骨髓标本,分离、培养和扩增MSC,观察细胞形态及增殖能力,计数分析骨髓MSC成纤维细胞集落形成单位(Colony forming unit-fibroblast,CFU-F);采用混合淋巴细胞反应检测骨髓MSC体外对淋巴细胞的免疫抑制能力;采用RT-PCR和ELISA方法检测骨髓MSC细胞内转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)mRNA的表达水平和细胞培养上清中因子的浓度。结果:(1)ITP患儿的骨髓MSC呈典型的成纤维样细胞形态,CFU-F计数(21.29±5.25)与对照组骨髓MSC的CFU-F计数(22.33±5.33)无显著差异(P>0.05);(2)ITP患儿骨髓MSC免疫抑制率([74.93±8.01)%]与对照组骨髓MSC免疫抑制率([76.42±8.80)%]比较无显著性差异(P>0.05);(3)ITP患儿骨髓MSC细胞内TGF-β1、HGF mRNA的表达水平与对照组比较均无显著性差(P>0.05);(4)ITP患儿骨髓MSC培养上清中TGF-β1的浓度([617.88±81.89)pg/ml]与对照组骨髓MSC培养上清中TGF-β1的浓度([632.40±126.90)pg/ml]比较无显著性差异(P>0.05);ITP患儿骨髓MSC培养上清中HGF浓度([520.20±30.67)pg/ml]与对照组骨髓MSC培养上清中HGF的浓度([521.56±36.72)pg/ml]比较无显著性差异(P>0.05)。结论:ITP患儿骨髓MSC TGF-β1和HGF的表达水平及免疫抑制能力与对照组比较无显著性差异。
- 吴艳于洁张磊罗庆肖剑文刘筱梅宪莹戴碧涛徐酉华苏庸春
- 关键词：特发性血小板减少性紫癜免疫抑制转化生长因子-Β1肝细胞生长因子
- 逆转录病毒载体介导Fn-TPO基因修饰人骨髓间充质干细胞被引量：1
- 2006年
- 目的应用逆转录病毒载体介导纤维连接蛋白-血小板生成素(Fn-TPO)基因修饰人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),观察Fn-TPO基因修饰对于骨髓MSCs的影响。方法构建携带Fn-TPO基因的重组逆转录病毒载体,并以其对骨髓MSCs进行体外基因修饰;台盼蓝拒染法计数活细胞数检测基因修饰后骨髓MSCs的体外增殖能力,RT-PCR检测Fn-TPO基因在骨髓MSCs中的表达情况,MTT法检测基因修饰后骨髓MSCs黏附造血细胞的能力,ELISA检测基因修饰后骨髓MSCs分泌至细胞培养液中的TPO浓度。结果成功构建携Fn-TPO基因的重组逆转录病毒载体且以该逆转录病毒载体对骨髓MSCs进行体外基因修饰;Fn-TPO基因在骨髓MSCs内能够正常转录;基因修饰后的骨髓MSCs体外增殖能力无明显改变(P>0.05);黏附造血细胞能力增强(P=0.01),分泌TPO的能力增强且不随培养时间延长而显著减弱(P<0.01),但受细胞生长状态影响。结论成功应用携带Fn-TPO基因的逆转录病毒载体对人骨髓MSCs进行基因修饰,使基因修饰后骨髓MSCs黏附造血细胞分泌TPO能力增强。
- 于洁张磊莫姝杨光李欣宪莹
- 关键词：骨髓间充质干细胞纤维连接蛋白血小板生成素逆转录病毒载体基因修饰
- 再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞免疫调节作用的研究被引量：4
- 2009年
- 目的研究再生障碍性贫血(以下简称再障)患儿骨髓间充质干细胞(MSC)体外对淋巴细胞的免疫抑制能力。方法2006年4月至2007年10月重庆医科大学附属儿童医院血液科采集24例再障患儿和11例对照儿童的骨髓标本,分离、培养和扩增MSC,观察细胞形态及增殖能力,计数分析骨髓MSC成纤维细胞集落形成单位;采用混合淋巴细胞反应检测骨髓MSC体外对淋巴细胞的免疫抑制能力;采用逆转录PCR(RT-PCR)的方法检测骨髓MSC细胞内转化生长因子-β1(TGF-β1)和肝细胞生长因子(HGF) mRNA的表达水平;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测骨髓MSC分泌的TGF-β1和HGF的浓度。结果(1)再障患儿骨髓MSC呈典型的成纤维样细胞形态,成纤维集落形成单位(CFU-F)计数显著低于对照组,差异有统计学意义(t=-2.74,P<0.05);(2)再障患儿骨髓MSC免疫抑制率显著低于对照组,差异有统计学意义(t=-3.48,P<0.01);(3)再障患儿骨髓MSC细胞内TGF-β1 mRNA表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(t=-3.34,P<0.01);HGF mRNA表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(t=-2.54,P<0.05);(4)再障患儿骨髓MSC培养上清中TGF-β1浓度显著低于对照组,差异有统计学意义(t=-2.48,P<0.05);再障患儿骨髓MSC培养上清中HGF浓度显著低于对照组,差异有统计学意义(t=-2.46,P<0.05)。结论再障患儿骨髓MSC的免疫抑制能力较对照组显著降低,其发生机制可能与再障患儿骨髓MSC增殖能力减低、细胞表达和分泌TGF-β1、HGF减少有关。
- 吴艳于洁张磊罗庆肖剑文刘筱梅宪莹戴碧涛徐酉华苏庸春
- 关键词：再生障碍性贫血间充质干细胞免疫抑制肝细胞生长因子转化生长因子-Β1
- 儿童急性白血病及恶性淋巴瘤的靶向治疗
- 2006年
- 张磊于洁
- 关键词：儿童急性白血病靶向治疗药物恶性淋巴瘤化疗药物靶向药物淋巴瘤细胞
- FN-TPO基因修饰的骨髓间充质干细胞支持脐血造血干细胞植入的实验研究
- 2009年
- 目的观察纤维连接蛋白-血小板生成素(FN-TPO)基因修饰的人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)支持脐血造血干细胞植入的能力。方法将20只严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠经亚致死剂量射线辐射后随机分为实验组(n=5):FN-TPO基因修饰的骨髓MSCs联合脐血单个核细胞(CB-MNC)组共移植;对照组:包括单纯CB-MNC移植组(n=5)、CB-MNC联合未修饰骨髓MSCs共移植组(n=5)和仅输入不含血清的IMDM培养基的空白对照组。细胞移植后,持续观察各组小鼠4周,记录一般情况及生存率;通过检测不同时间点(辐射前,辐射后细胞移植前,细胞移植后2 d及1、2、3、4周)的小鼠外周血常规来反映小鼠造血系统恢复情况;4周后以流式细胞术和PCR等检测移植后小鼠体内的人源细胞的整合情况。结果辐射前、辐射后细胞移植前、移植后2 d及移植2周后各组动物外周血白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数均无明显差别;细胞移植1周,实验组小鼠外周血WBC、RBC、Hb和Plt分别为(0.83±0.15)×109/L、(9.84±0.36)×1012/L、147.50±4.80 g/L和(198.75±71.14)×109/L,均较对照组为高,差别均有统计学意义(P<0.05),且实验组小鼠外周血常规变化比较平稳。移植4周各组动物生存率,基因修饰和未修饰MSCs联合CB-MNC共移植组较单纯CB-MNC移植组明显为高(80%VS40%);存活下来的细胞移植小鼠骨髓和外周血中均检测到人源性CD45+细胞,实验组小鼠骨髓和外周血中人CD45+细胞比例(%)分别为:8.15±1.72和2.28±0.57,与单纯CB-MNC移植组的3.93±1.28和0.82±0.06相比差别均具有统计学意义(P<0.05);PCR检测移植后4周存活小鼠体内人beta-actin基因表达情况显示:小鼠外周血、骨髓及心、肝、脾、脑、肺等重要脏器基因组DNA中有人beta-actin基因存在。结论FN-TPO基因修饰的骨髓MSCs能够更有效的支持脐血造血干细胞植入。
- 张磊于洁莫姝吴艳宪莹李欣
- 关键词：造血干细胞脐血纤维连接蛋白血小板生成素植入
- 再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞体外造血支持作用的研究被引量：15
- 2008年
- 目的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)具有造血支持作用,再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)的发病机制涉及到造血微环境的异常,将两方面联系起来,体外研究再障患儿骨髓MSC的造血支持作用与再障的造血微环境异常的关系。方法采集24例再障患儿和19例对照儿童的骨髓标本,分离、培养和扩增MSC;观察细胞形态及骨髓MSC成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)计数分析;应用MTT法检测骨髓MSC粘附造血细胞的能力;应用ELISA检测骨髓MSC分泌干细胞生长因子(SCF)的浓度;对骨髓MSC进行贴壁培养,接种骨髓单个核细胞,计数扩增细胞数和红系爆式集落生成单位(BFU-E),粒细胞巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM),混合细胞集落生成单位(CFU-GMME)。结果①再障患儿骨髓MSC传代时间延长,CFU-F计数15.70±5.78显著低于对照组21.73±5.74,P<0.05;②再障患儿骨髓MSC培养上清中SCF的浓度30.69±16.82 pg/mL显著低于对照组50.74±14.83 pg/mL,P<0.01;③再障患儿骨髓MSC支持下的单个核细胞(MNC)细胞扩增总数和红系爆式集落生成单位(BFU-E),粒细胞巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM),混合细胞集落生成单位(CFU-GMME)计数显著低于对照组,P<0.01。结论再障患儿骨髓MSC体外造血支持作用较对照儿童骨髓MSC显著降低,其发生机制可能与再障患儿骨髓MSC增殖能力减低及分泌SCF减少有关。
- 吴艳于洁张磊罗庆肖剑文刘筱梅宪莹戴碧涛徐酉华苏庸春
- 关键词：再生障碍性贫血间充质干细胞干细胞生长因子
- 骨髓间充质干细胞体外Fn-TPO基因修饰体系的建立
- 目的:建立骨髓问充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外Fn-TPO融合基因修饰体系, 观察基因修饰后骨髓MSCs生长状态、粘附造血细胞能力及分泌TPO能力。方法:应用基因重组的方法构建携...
- 张磊莫姝于洁杨光
- 文献传递
- Fn、TPO基因修饰对人骨髓间充质干细胞的影响被引量：2
- 2007年
- 目的观察纤维连接蛋白(Fn)、血小板生成素(TPO)融合基因修饰对人骨髓间充质干细胞(MSC)的影响。方法构建携带 Fn-TPO 融合基因的重组逆转录病毒载体,并以其对骨髓 MSC进行基因修饰;观察 Fn-TPO 基因在骨髓 MSC 中的表达,以及基因修饰后骨髓 MSC 的体外增殖、黏附造血细胞和分泌 TPO 的能力;并将脐血 CD34^+细胞接种到基因修饰后骨髓 MSC 形成的滋养层,培养7d 观察修饰后骨髓 MSC 对造血细胞体外扩增和集落形成能力的影响。结果成功构建携带 Fn-TPO基因的重组逆转录病毒载体且以该逆转录病毒载体对骨髓 MSC 进行体外基因修饰;Fn、TPO 基因在骨髓 MSC 内能够正常转录;基凶修饰后的骨髓 MSC 体外增殖能力[(6.92±0.77)×10~4/ml]与对照组[(7.18±0.89)×10~4/ml]比较差异无统计学意义(P>0.05);基冈修饰组和对照组黏附造血细胞能力分别为0.188±0.018和0.167±0.017(P<0.01),分泌 TPO 能力分别为(7.46±0.59)ng/ml 和(5.58±0.37)ng/ml(P<0.01),细胞分泌 TPO 的能力不受培养时间的影响,但受细胞生长状态影响;2×10~4脐血 CD34^+造血干/祖细胞经基因修饰后骨髓 MSC 联合必要细胞因子体外扩增7 d,有核细胞数、CD34^+细胞比例、BFU-E、CFU-GM 及 CFU-GEMM 分别为(29.9±2.7)×10~4、(33.3±2.8)%、109.3±4.1/1×10~4 CD34^+细胞、163.7±7.1/1×10~4 CD34^+细胞、13.3±1.5/1×10~4 CD34^+细胞,较对照组明显增加(P<0.01)。结论 Fn-TPO 基因修饰能够增强骨髓 MSC 黏附造血细胞、分泌 TPO 及支持脐血 CD34^+细胞扩增的能力。
- 张磊于洁莫姝杨光李欣宪莹金先庆
- 关键词：骨髓间充质干细胞造血干细胞纤维连接蛋白血小板生成素基因修饰
- 当归多糖与血小板源性生长因子、血小板生成素对巨核细胞造血影响的比较研究被引量：6
- 2008年
- 目的研究当归多糖（APS）、血小板源性生长因子（PDGF）和血小板生成素（TPO）对巨核细胞株M-07e生长和凋亡的影响作用，为进一步探讨细胞因子对巨核细胞／血小板造血的作用及其机制提供基础。方法采用细胞计数和锥虫蓝拒染法进行细胞存活率检测，Annexin Ⅴ、Caspase-3和JC-1 3种流式方法检测APS、PDGF和TPO对无血清培养诱导的M-07e凋亡的影响。结果M-07e培养24、48、72h后，APS组、PDGF组和TPO组细胞增殖及细胞存活率都显著高于对照组（P〈0．05）。Annexin Ⅴ法检测72h各组死亡细胞，APS组、PDGF组和TPO组中全部死亡细胞分别占（19．41±7．59）％、（21．38±7．25）％和（18．77±8．00）％，与对照组（34．33±5．46）％比较差异有统计学意义；Caspase-3检测结果显示，APS组、PDGF组和TPO组中Caspase-3活性增高的细胞分别占（12．27±5．18）％、（12．39±6．26）％和（13．75±8．25）％，其中APS组、PDGF组与对照组（18．92±6．09）％比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；JC-1检测结果显示，APS组、PDGF组、TPO组和对照组中死亡细胞分别占（23．64±6．69）％、（28．00±10．05）％、（27．99±8．99）％和（39．48±11．86）％，APS组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），APS组与PDGF组、TPO组比较，差异无统计学意义。结论APS与PDGF、TPO都具有促进M-07e增殖和抵抗无血清培养诱导的M-07e细胞凋亡的作用，且APS与PDGF、TPO的作用相当。
- 莫姝于洁杨默李志光李桂霞张磊
- 关键词：血小板生成当归多糖类血小板源性生长因子血小板生成素
- DNA链间交联修复与范可尼贫血发病机制的研究进展被引量：1
- 2013年
- 范可尼贫血（Fanconi anemia,FA）是一种罕见的常染色体或X染色体隐性遗传病,临床表现为多样化先天畸形、进行性骨髓衰竭、色素沉着症、恶性血液系统肿瘤及实体瘤倾向。该病最典型的特征是对DNA交联剂具有高度敏感性,可产生DNA链间交联（Interstrand Cross-Links,ICL）。目前已发现至少15种FA基因,其编码的蛋白参与特有的DNA修复途径—FA途径。
- 张磊戴碧涛
- 关键词：范可尼贫血DNA修复发病机制染色体隐性遗传病色素沉着症
