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Tet-off诱导表达CUEDC2稳定细胞系的建立: 2011年; CUEDC2(CUE domain containging protein 2)是近年来发现的一个功能尚未十分明确的蛋白质。实验室前期的研究表明,CUEDC2通过影响孕激素受体PR抑制乳腺癌细胞生长。此外,研究还发现CUEDC2通过招募PP1磷酸酶,促进IKK复合体的去磷酸化,抑制NF-kB信号通路的激活。为了深入研究CUEDC2的功能,构建了CUED2可诱导表达载体(p617-neo-T-CUEDC2-I-tTA4),并通过逆转录病毒系统获得tet-off可诱导表达CUEDC2的稳定细胞系。该诱导表达细胞株的建立为CUEDC2功能基因的研究提供了必要的手段。; 徐金敬王玉博王芊艺周杰梁冰穆蕊于鸣巩伟丽张维娜; 关键词：CUEDC2 稳定细胞系

HeLa/GFP—H2B细胞系的构建及对其有丝分裂进程的动态观察被引量：3: 2011年; 准确的染色体分离依赖于有丝分裂过程的精确调控,包括有丝分裂的时间,及纺锤体检查点的正确调控等。通过动态观察有丝分裂染色体的运动可对上述研究进行精确定量。结果显示,利用逆转录病毒系统成功构建了稳定融合表达绿色荧光蛋白GFP—H2B的HeLa细胞系,结合细胞同步化方法,建立了一套利用活细胞荧光共聚焦显微镜观察HeLa细胞有丝分裂的实验体系。; 李腾高彦飞常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳; 关键词：有丝分裂细胞同步化

体外APC/C活性体系的建立及其影响因素的研究: 2011年; 为获得具有细胞周期后期促进复合物(APC/C)活性的细胞裂解液并建立APC/C体外活性检测体系,以其底物Cyc-lin B及Securin的降解为检测指标,分别从细胞阻滞于有丝分裂期的时间,UBCH10(APC/C的E2酶)的浓度以及裂解液浓度等几个方面研究了各种处理因素对APC/C活性的影响,并且用体外翻译底物验证了其活性及相关结论。此项工作为进一步探索APC/C相关分子事件奠定了基础。; 高彦飞李腾常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳; 关键词：CYCLIN SECURIN UBCH10 活性

Mad2蛋白在有HeLa细胞有丝分裂期的动态定位: 2011年; 在细胞有丝分裂中纺锤体检查点对保证遗传信息的稳定性有着重要的调控意义。其中Mad2蛋白作为纺锤体检查点蛋白在前中期被招募到未与微管正确结合的着丝粒上,从而保证纺锤体检查点的激活并抑制后期的开始。通过活细胞荧光共聚焦显微镜对Mad2的定位动态追踪,定量了其在有丝分裂过程中位于着丝粒上的光强变化,从而为研究纺锤体检查点的功能提供了依据。而Mad2本身的蛋白表达过强过弱均可导致肿瘤的发生,因此通过对其有丝分裂中光强的定量也为研究肿瘤的发生机制提供了线索。; 李腾高彦飞常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳; 关键词：MAD2 有丝分裂

磷酸酶PPM1G与IKKi相互作用下调IRF的转录活性: 2011年; 为了研究磷酸酶PPM1G对IRF信号通路的影响,首先在真核细胞中成功表达了HA-PPM1G蛋白质。应用双荧光报告系统,研究了PPM1G对IRF信号通路的影响。结果显示,过表达PPM1G能够显著抑制IKKi激活的IRF转录活性。进一步免疫共沉淀的实验结果表明,PPM1G和IKKi在细胞内存在相互作用。; 陈亮穆蕊甄诚高彦飞李腾周杰于鸣巩伟丽张维娜; 关键词：IRF 转录活性

SOX4能与p53蛋白发生相互作用被引量：1: 2008年; 目的:研究SOX4和p53蛋白之间的相互作用。方法:应用GSTpull-down、免疫共沉淀实验验证相互作用。结果:GSTpulldown实验证实SOX4能结合GST-p53融合蛋白,但不能结合GST蛋白;免疫共沉淀实验也证明,SOX4与p53能在细胞内发生相互作用。结论:SOX4能与p53发生相互作用,为p53信号通路的研究提供了新的线索。; 潘欣何昆张维娜李慧艳赵洁周涛张学敏李爱玲; 关键词：P53 相互作用

miR-769-3p对甲型H1N1流感病毒核蛋白表达的调控被引量：4: 2013年; 目的:预测靶向甲型流感病毒核蛋白(NP)基因的微小RNA(miRNA),并检测其对NP表达的影响。方法:从miRBase数据库中获取人成熟miRNA序列,利用miRanda软件预测潜在靶向流感病毒A/FM/1/47(H1N1)NP基因的人miRNA;通过双萤光素酶报告基因系统及Western印迹验证所预测的miRNA对NP表达的影响。结果:用miRanda软件在流感病毒A/FM/1/47(H1N1)NP基因上预测得到分值及最小结合自由能均较好的miR-769-3p;双萤光素酶报告基因结果显示miR-769-3p能显著降低报告基因载体萤光素酶的表达;Western印迹结果显示miR-769-3p能明显抑制NP的表达,但突变NP基因上的miR-769-3p结合位点后,miR-769-3p不能抑制NP的表达。结论:miR-769-3p可靶向流感病毒A/FM/1/47(H1N1)NP基因并抑制NP的表达,为抗甲型流感病毒的miRNA药物研发提供了依据和潜在药物靶标。; 郭振东侯小强何涛张维娜高玉伟汪莉王玉民; 关键词：甲型流感病毒核蛋白微小RNA 靶向

体外反应体系中APC/C活性及相关研究: 2011年; 为利用体外反应体系研究纯化的细胞周期后期促进复合物(APC/C)相关的分子事件,以其底物泛素化为检测指标,分别从来源细胞裂解液浓度,不同底物间泛素化强度,以及与纺锤体检查点复合物的解离等几方面进行了研究。结果显示,由浓度高的细胞裂解液纯化出的APC/C活性高,其对底物Geminin的泛素化活性较Cyclin B高,在APC/C活性由被抑制到释放过程中,APC/C与Mad2,BubR1结合减少且Cdc20泛素化增强。; 高彦飞李腾常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳; 关键词：底物活性解离

稳定表达线粒体钙离子荧光探针4mt-GCaMP6巨噬细胞系的构建: 2021年; 目的构建稳定表达线粒体钙离子荧光探针的巨噬细胞系,用于研究线粒体钙离子信号在巨噬细胞生理和病理活动中的作用和调节机制。方法用通过绿色荧光强度反映细胞线粒体钙离子浓度的探针4mt-GCaMP6制备慢病毒并感染永生化小鼠骨髓来源巨噬细胞(iBMDM),经嘌呤霉素抗性筛选获得稳定表达线粒体钙探针的细胞系iBMDM-4mt-GCaMP6。使用共聚焦荧光显微观测钙荧光探针在细胞内的表达,使用线粒体指示探针Mito-TrackerTMRed FM验证所表达钙荧光探针的线粒体定位,Time-lapse成像动态观测加入内质网钙释放剂离子霉素后该细胞对线粒体钙离子浓度变化的响应和指示能力。结果共聚焦荧光显微镜观测结果显示,所有细胞均表达了绿色线粒体钙离子荧光探针,其与线粒体指示探针MitoTrackerTMRed FM有明确的共定位。Time-lapse成像动态观测结果显示,加入离子霉素后线粒体钙离子探针荧光强度瞬时(6~9 s)升至基础水平的2倍,持续约45 s逐渐降低到基础水平。结论本研究成功构建了稳定表达线粒体钙离子荧光探针的巨噬细胞iBMDM-4mt-GCaMP6,该细胞系可用于实时监测巨噬细胞线粒体钙离子浓度变化。; 华盛平王瑶郑润琪李金亮张维娜夏晴; 关键词：巨噬细胞钙信号

SOX11结合p53并上调其转录活性被引量：1: 2010年; 目的:研究SOX11对p53转录活性的影响,并检测二者的体外相互作用。方法:在H1299(p53缺失)和H460(含野生型p53)2种细胞中分别过表达SOX11和p53,用双萤光素酶方法测定p53的转录活性;用大肠杆菌DH5α表达GST和GST-p53融合蛋白并将其纯化,用GST pull-down实验检测SOX11与p53在体外是否存在相互作用。结果:萤光素酶实验结果表明,在H1299和H460细胞中,过表达SOX11分别能促进外源p53和内源p53的转录活性;GST pull-down实验表明SOX11能在体外与p53发生相互作用。结论:SOX11能在体外与p53发生相互作用并促进p53的转录活性,为进一步研究p53的功能提供了新的线索。; 常艳张维娜李腾高彦飞李慧艳满江红梁冰巩伟丽于鸣潘欣; 关键词：P53 相互作用转录活性

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张维娜

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