张键荣
- 作品数：19 被引量：25H指数：3
- 供职机构：北京大学深圳医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 特异性新基因TSC43在小鼠和人睾丸组织中的表达分析
- 目的:筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因,并分析该新基因的结构和功能。方法: 将不同发育阶段的小鼠睾丸组织 cDNA 探针与 Affymetrix 全基因组芯片进行杂交,通过杂交信号的比较,筛选出差异表达的基因。用生物...
- 余振东唐爱发桂耀庭张立兵张键荣郭新蔡志明
- 关键词：基因芯片精子发生RT-PCR
- 文献传递
- 新基因TSC21的生物信息学分析及其原核载体构建表达
- 目的：用生物信息学分析新基因 TSC21并进行蛋白表达及纯化。方法：将不同发育阶段的小鼠睾丸组织 cDNA 探针与 Affy- metrix 全基因组芯片进行杂交并筛选出差异表达的基因。用生物学信息软件对该基因进行生物学...
- 余振东唐爱发桂耀庭张立兵张键荣叶炯贤蔡志明
- 文献传递
- 人共刺激分子4-1BBL表达载体的构建及转染Tca8113细胞的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆人肿瘤坏死因子配体超家族(tumor necrosis factor superfamily,TNFSF)成员4-1BBL基因,构建其真核表达载体,并检测4-1BBL基因在Tca8113中的表达。方法:从淋巴细胞中提取RNA,用RT-PCR方法将4-1BBL的编码序列cDNA扩增。然后将该基因的编码序列插入真核荧光蛋白载体pEGFP-C1质粒中,构建成最终的表达载体pEGFP-Cl-4-1BBL。运用脂质体方法将pEGFP-Cl-4-1BBL转染Tca8113细胞,转染24h后,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR和免疫印迹检测4-1BBL在该细胞中的表达。经G418筛选后,用有限稀释法建立稳定高表达的带有4-1BBL基因的Tca8113细胞系。结果:从淋巴细胞中提取的RNA经RT-PCR扩增出目的基因4-1BBL,其全长大小为768bp。测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同。转染pEGFP-Cl-4-1BBL载体的靶细胞Tca8113中,荧光显微镜下可见其表达绿色荧光蛋白,RT-PCR方法检测到目的基因4-1BBL的7686p大小的cDNA扩增产物。裂解的4-1BBL/Tca8113基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约27.5Kd的特异性条带。结论:转染4- 1BBL基因细胞株的建立,为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。
- 孙顺涛杨宏宇罗娟储眉张键荣张立兵桂耀庭
- 关键词：TCA8113共刺激分子质粒构建基因转染
- 双调蛋白在人体子宫内膜的表达特征
- 目的:双调蛋白(Amphiregulin)是表皮生长因子大家族中的一员,与 EGF 家族其他成员不同的是,该蛋白具有促进生长或抑制生长的双重着用,对不同的组织细胞有不同的作用.近年的研究
- 张键荣梁婉青桂耀庭蔡志明
- 文献传递
- 新基因TSBAG的生物信息学分析及其在小鼠睾丸组织中的表达被引量：9
- 2007年
- 目的：筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因,并探讨其在精子发生过程中所起的作用。方法：将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,通过杂交信号的比较,筛选出差异表达的基因。用生物信息学软件对该基因进行生物信息学分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸、小鼠不同组织中的表达。结果：通过4日龄、9日龄、18日龄、35日龄、54日龄和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达功能未知的新基因(GenBank登录号：BC049770),全长891 bp,含有702 bp的完整ORF,编码一个233个氨基酸、相对分子量为26．938 kD的蛋白质,我们将其命名为TSBAG(testis-specific BAG-like protein)。亚细胞定位预测显示,TSBAG基因可能在细胞核中表达。EBI功能域预测发现,在蛋白质序列8-62处有一个BAG功能域。RT-PCR分析表明,TSBAG基因特异性表达于小鼠睾丸组织中且具有时序性表达。TSBAG蛋白在人的同源基因GenBank登录号为AY349359,在233个氨基酸区域内有83%的同源性。结论：TSBAG基因在小鼠睾丸组织中特异性表达,且与小鼠精子发生过程一致。
- 余振东唐爱发桂耀庭张立兵张键荣郭新蔡志明
- 关键词：基因芯片精子发生RT-PCR
- 精子发生相关基因的筛选和功能研究
- 目的:采用基因芯片技术,比较不同年龄小鼠睾丸组织基因表达谱的差异.筛选精子发生相关的新基因:采用生物信息学、RT-PCR、免疫细胞和组织化学、免疫印迹等分子生物学技术,研究这
- 桂耀庭唐爱发余振东张立兵张键荣李贤新蔡志明
- 文献传递
- PigM基因在小鼠中的表达及其在精子发生中的功能探讨被引量：4
- 2006年
- 目的筛选与精子发生相关的基因。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,通过杂交信号的比较,筛选出差异表达的基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸及小鼠不同组织中的表达。结果通过4、91、8、35、54、日龄和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达杂交点(GenBank登录号:NM-026234),生物信息学分析发现该基因全长3 979 bp,含有1 272 bp的完整ORF,编码一个有423个氨基酸、分子量为49.788的蛋白质。PigM蛋白与大鼠同源基因PigM蛋白有96%的同源性,与人PigM蛋白有89%的同源性,显示该基因在哺乳动物中高度保守。RT-PCR分析表明PigM基因特异性表达于睾丸组织及18日龄后的小鼠睾丸中。结论PigM基因的表达与小鼠精子发生的过程一致,显示其可能在精子发生中起着重要作用。解释该基因的生物学功能,可对揭示人类无精、弱精和少精引起的男性不育的病因,治疗和预防男不育及寻找新的男子避孕药的靶位点具有重要意义。
- 唐爱发余振东桂耀庭郭新张立兵张键荣刘春霖蔡志明
- 关键词：基因芯片精子发生
- 同源盒基因-A10在人体睾丸组织的表达及其临床意义被引量：1
- 2006年
- 目的比较同源盒基因-A10(HOXA10)在正常人和隐睾症患者睾丸组织的表达差异。方法收集正常人和隐睾症患者的睾丸组织,采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学的方法检测HOXA10的表达水平。结果HOXA10在正常人和隐睾症患者的睾丸组织均有表达,与正常组织比较,HOXA10在隐睾症患者睾丸组织的表达显著降低。结论HOXA10的表达减少与隐睾症的发生有密切关系。
- 桂耀庭张立兵张键荣余振东李贤新蔡志明
- 关键词：睾丸隐睾RT-PCR免疫组织化学
- 双调蛋白在人体子宫内膜组织中的表达特征被引量：1
- 2008年
- 目的:研究双调蛋白在人体子宫内膜组织中的表达特征。方法:取增殖期和分泌期的人体子宫内膜,采用实时定量RT-PCR方法,检测双调蛋白mRNA在子宫内膜增殖期和分泌期的表达差异;采用原位杂交和免疫组织化学的方法,从基因和蛋白水平检测双调蛋白在人体子宫内膜组织中的表达特征。结果:定量RT-PCR结果显示,双调蛋白mRNA在增殖期和分泌期的子宫内膜均有表达,在分泌期其表达量显著升高,是增殖期的32倍。原位杂交和免疫组织化学结果显示,双调蛋白主要分布于子宫内膜腺体,定位于细胞浆内;双调蛋白mRNA在增殖期和分泌期子宫内膜的表达分别为0.54±0.22和2.96±0.47(P<0.01);双调蛋白在增殖期和分泌期子宫内膜的表达分别为0.77±0.47和2.60±0.43(P<0.01)。双调蛋白在分泌期子宫内膜中的表达显著升高,与荧光定量RT-PCR分析的结果相符。结论:双调蛋白在子宫内膜分泌期的表达显著增加,提示该蛋白可能与子宫内膜细胞分化或胚胎着床有关。
- 桂耀庭张键荣梁婉青蔡志明
- 关键词：双调蛋白子宫内膜逆转录聚合酶链反应原位杂交免疫组织化学
- 精子发生相关基因的筛选和功能研究
- 桂耀庭唐爱发蔡志明余振东郭新张立兵张键荣李贤新石敏李世勤朱辉于洁房家智
- 该课题筛选出小鼠睾丸组织年龄依赖性表达基因2058个，鉴定8个人体睾丸特异性表达新基因，对8个功能未知的睾丸特异性表达新基因和5个已知基因进行深入研究，确定了它们在小鼠和人体睾丸组织的表达特征。发现同源盒基因-A10，表...
- 关键词：
- 关键词：精子发生基因筛选
