李兆阳
- 作品数：21 被引量：24H指数：3
- 供职机构：中国医科大学实验动物部更多>>
- 发文基金：辽宁省科技厅科技攻关项目辽宁省科学技术基金辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 激肽释放酶转基因大鼠模型的建立被引量：3
- 2007年
- 目的建立KLK1转基因大鼠模型。方法腹腔注射PMSG-HCG（150-150IU/kg）超排不同周龄（4-8周）SD大鼠比较超排效果的差异，以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄。构建pBC-klk1转基因构件，经酶切、纯化后通过显微注射方法导入SD大鼠受精卵原核并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型，通过RT-PCR和免疫组化方法检测klk1基因表达。结果4-8周SD大鼠超排后分别获得受精卵14±14.8、30±15.2、13.3±13.7、13±14.7、8±5.7，5周龄大鼠超排效果最好，与其他周龄大鼠相比有显差异，P〈0.05；显微注射1538枚卵，移植685（44.53%）枚卵于31只受体输卵管中，12（12/31，38.7%）只怀孕，共产仔62只，经PCR检测获得6只阳性鼠，Southern检测3只阳性。对Southern检测阳性转基因大鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明klk1基因在肾脏、胰腺和乳腺内表达。结论成功建立klk1基因表达的转基因大鼠模型，该模型是高血压病研究的理想动物模型。
- 郑志红杨葳周生来王维董婉维李兆阳孙强张梅英李华王禄增
- 关键词：转基因高血压
- 5-脂氧化酶转基因小鼠模型的制备
- 目的建立5-脂氧化酶转基因小鼠,用于动脉粥样硬化的发病机制的研究。方法通过显微注射的方法,将5-脂氧化酶基因片段（6.8kb）导入BDF1受精卵雄原核中,共注射166枚受精卵,然后将90枚受精卵细胞植入同期受孕的受体母鼠...
- 张梅英杨葳李兆阳周生来于洋王惟秦英郑志红王禄增
- 关键词：潮霉素饲养层转基因
- 文献传递
- TNNT3^(R69H)突变转基因小鼠模型的建立
- 2012年
- 目的建立TNNT3(R69H)突变转基因小鼠模型。方法构建pEGFP-TNNT3(R69H)转基因构件,通过原核显微注射方法将线性化、纯化后的外源质粒pEGFP-TNNT3(R69H)注射入BDF1小鼠受精卵中,胚胎移植至同期发情的假孕受体母鼠输卵管内,获得子代小鼠。用PCR和Southern blot方法检测子代鼠尾基因组DNA,通过RT-PCR及Western blot的方法检测TNNT3基因表达。结果 8只假孕小鼠共移植注射后的胚胎82枚,出生40只子代鼠,经PCR和Southern方法检测得到5只转基因阳性小鼠。对其子代小鼠进行RT-PCR、Western blot检测结果显示,TNNT3在转基因小鼠心脏和骨骼肌中表达量明显增多。结论通过显微注射法使外源基因pEGFP-TNNT3(R69H)在小鼠基因组中整合,成功建立了TNNT3(R69H)突变转基因小鼠模型。
- 李兆阳吕相川汪瑛杨葳于洋周生来王惟张梅英郑志红
- 关键词：转基因小鼠显微注射
- 大／小鼠组织DNA两种提取方法的比较被引量：1
- 2015年
- 目的获取质量稳定的基因组DNA，快速鉴定模型动物基因型。方法以鼠尾组织为实验材料，采用苯酚／氯仿法和改良煮沸法提取鼠基因组DNA；分别用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，采用PCR检测两种方法获得DNA的扩增效果。结果酚／氯仿提取法提取的基因组DNA质量优于改良煮沸法，但两种方法获得的DNA模板均能成功应用PCR扩增进行基因型鉴定，且改良煮沸法DNA提取具有无毒、简单、高效、便捷的优点。结论大批量转基因大／小鼠基因型鉴定可以优先选择改良煮沸法提取基因组DNA。
- 陈雪婷郎雪楠李兆阳张婀娜赵文董婉维周生来张梅英郑志红
- 关键词：DNA提取PCR基因型鉴定
- 突变DJ-1转基因小鼠模型的建立被引量：3
- 2009年
- 目的探讨DJ-1L166P突变基因在帕金森病发生中的作用。方法构建pcDNA3.1-myc-his-DJ-1L166P真核表达载体,利用显微注射方法将DJ-1L166P基因片段(约3.9kb)导入BDF1小鼠受精卵雄原核并移植到同期受孕的ICR假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行聚合酶链反应和Southern blot检测,对Southern blot鉴定阳性的转基因小鼠进行逆转录聚合酶链反应和Western blot检测。结果共产生20只子代小鼠,1号和7号为DJ-1L166P转基因阳性小鼠。1号转基因小鼠大脑、小脑、肝、肺、肾、睾丸有不同程度的DJ-1mRNA表达,均高于正常对照小鼠,但只有大脑中DJ-1mRNA的表达水平显著高于正常对照小鼠(P<0.05);7号转基因小鼠只有肝、肺组织中有DJ-1mRNA表达,也高于正常对照小鼠,但差异无统计学意义。只有1号小鼠大脑有His标签蛋白的表达。结论成功获得1只DJ-1L166P基因突变转基因小鼠模型,为课题的下一步实验研究打下良好的基础。
- 张梅英吴红联蔺美娜李兆阳周生来于洋王惟吕相川王禄增
- 关键词：DJ-1基因帕金森症转基因小鼠
- 5-脂氧化酶转基因小鼠模型的制备被引量：2
- 2010年
- 目的建立5-脂氧化酶(5-LO)转基因小鼠进行动脉粥样硬化的发病分子机制的研究。方法通过显微注射的方法,将5-脂氧化酶基因片段(6.8 kb)导入BDF1受精卵雄原核并移植到同期受孕的假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行PCR、Southern blot检测,对9、20、24号转基因小鼠分别提取腹腔细胞、骨髓细胞及脾、肾组织总RNA和蛋白,并采用RT-PCR、Western blot方法进行转录水平检测和蛋白表达检测。结果共产生25只子代小鼠,经PCR和Southern检测获得7只阳性小鼠,经RT-PCR和Western blot检测结果表明,9、20、24号转基因小鼠腹腔细胞、骨髓细胞、脾、肾5-LO和5-脂氧化酶激活蛋白(FLAP)在RNA和蛋白水平表达均高于正常BDF1对照小鼠,且统计学分析腹腔细胞、骨髓细胞表达均具有显著差异(P<0.05)。结论成功建立5-LO转基因小鼠模型。
- 张梅英吴红联杨葳李兆阳董婉维周生来于洋王惟吕相川秦英郑志红王禄增
- 关键词：5-脂氧化酶动脉粥样硬化转基因
- 潮霉素抗性转基因BDF1小鼠模型的建立被引量：1
- 2007年
- 目的建立具有潮霉素(hygromycin)抗性转基因BDF1小鼠,用于制备携有hygromycin抗性筛选标志ES阳性细胞克隆的饲养层。方法通过显微注射的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因片段(5.1kb)导入BDF1受精卵雄原核中,共注射169枚受精卵,然后将129枚受精卵细胞植入同期受孕的受体母鼠输卵管内。结果共产生37只转基因小鼠,经PCR和Southern检测获得9只阳性小鼠,对一只子代鼠进行RT-PCR检测证明hyg基因已经在肾、肌肉、脾内表达。结论成功的建立具有潮霉素抗性的BDF1转基因鼠,该模型动物可以为基因敲除研究提供良好的基础条件。
- 张梅英董婉维汪瑛杨葳李兆阳周生来于洋王惟秦英郑志红王禄增
- 关键词：潮霉素饲养层转基因
- Fank1基因敲减小鼠睾丸组织ApoC2表达下调机制的研究
- 精子发生是一个高度复杂而有序的多基因调控的细胞分化过程。已证实很多基因如Fank1,Spem1、RIM-BP3,DAZAP1、TSPY1等都参与精子发生,研究这些基因的功能及表达调控通路对认识精子发生的机制有重要的意义。...
- 李兆阳
- 关键词：启动子转录调控睾丸组织
- TNNI2突变转基因小鼠模型的建立
- 2008年
- 目的建立TNNI2突变转基因小鼠模型。方法构建pEGFP-tnni2转基因构件,TNNI2基因的第175个氨基酸缺失,通过原核显微注射法,把线性化、纯化后的外源基因pEGFP-tnni2注射入BDF1小鼠受精卵中,胚胎移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠。用PCR和Southern方法检测子代鼠尾DNA鉴定基因型。通过RT-PCR方法检测tnni2基因表达。结果移植注射胚胎115枚给4只假孕小鼠共出生了23只后代鼠,经PCR和Southern方法检测得到4只阳性小鼠。对其子代进行RT-PCR检测,tnni2基因在肌肉、心脏内表达。结论通过显微注射法使外源基因pEGFP-tnni2(TNNI2基因的第175个氨基酸缺失)在小鼠基因组中得到整合,建立了转pEGFP-tnni2的转基因小鼠模型。
- 杨葳郑志红姜淼李兆阳王惟王禄增
- 关键词：显微注射法转基因小鼠
- 应用Dicer1转基因小鼠建立黑色素瘤模型的研究
- 2015年
- 目的应用D妇r1（编码蛋白属于RNA酶Ⅲ家族）转基因小鼠建立黑色素瘤模型。方法将小鼠黑色素瘤细胞株分别移植于Dicer1转基因鼠和C57BL／6J小鼠前肢腋下，观察两种小鼠的荷瘤情况，包括移植瘤生长情况、移植瘤生长曲线。结果与C57BL／6J小鼠组肿瘤比较，Dicer1转基因小鼠组的肿瘤成瘤时间短、肿瘤生长速度快、肿瘤体A（P〈0．05）。结论应用Dicer1转基因小鼠建立了黑色素瘤模型，结果显示Dicer1基因对黑色素瘤荷瘤有明显影响。
- 李兆阳姜川郭晓冲杨葳董婉维郑志红
- 关键词：转基因小鼠黑色素瘤
