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腰果主要过敏原Anao2基因克隆及原核表达被引量：1: 2012年; 目的克隆腰果主要过敏原Anao2基因,并利用pMAL-c表达载体表达该蛋白。方法提取腰果总RNA,设计特异性引物,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆腰果Anao2基因,将其反转录基因连入pMD18T sim-ple vector,提取质粒、双酶切、鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pMAL-c,将重组质粒转入BL21宿主表达菌中,丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达目的蛋白Anao2。结果测序结果表明克隆腰果Anao2基因片段全长为1 332 bp,编码443个氨基酸,与GenBank中蛋白序列完全相同;对获得的重组蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。结论成功克隆并表达了腰果过敏原Anao2。; 刘飞燕贾梦阳刘志刚肖小军李建杰夏立新; 关键词：腰果克隆

牛奶主要过敏原β-乳球蛋白的一基因片段的克隆、表达、纯化及抗原性鉴定被引量：8: 2011年; 目的克隆并表达牛奶中主要过敏原β-乳球蛋白(β-LG)的一基因片段,并检测其抗原性。方法利用RT-PCR技术克隆β-LG蛋白基因片段,测序后将目的片段克隆入原核表达质粒pET载体,转化至大肠杆菌origami,经IPTG诱导表达,获得重组β-LG片段蛋白。用Ni2+亲和层析柱纯化,用Western blot和ELISA检测重组蛋白与牛奶过敏患者血清IgE的结合活性。结果克隆获得β-LG片段蛋白,其开放阅读框基因为264 bp(含终止密码子),编码87个氨基酸。获得的重组β-LG片段蛋白既以包涵体形式存在又以可溶性形式存在,用可溶性的蛋白进行纯化,经Western blot和ELISA检测具有较好的抗原性。结论成功地克隆和表达了β-LG的一基因片段,为后续牛奶的免疫原性研究提供参考,也为研制牛奶主要过敏原的单克隆抗体和制备其主要过敏原的检测试剂奠定了基础。; 李建杰陈大玮闫浩杨成彬邓利刘杰刘志刚黄钟; 关键词：Β-乳球蛋白抗原性基因

鸡卵清蛋白食物过敏大鼠中药口服治疗的实验研究被引量：2: 2015年; 目的建立鸡卵清蛋白(OVA)食物过敏大鼠模型,利用中药复方Formula-3对食物过敏大鼠进行治疗,探讨其治疗效果及其机制。方法将24只BN大鼠按随机数字表法分为PBS对照组、OVA模型组及中药复方Formula-3治疗组,每组8只。OVA模型组与中药复方Formula-3治疗组在前6周和第7、9、11、13周分别予OVA(1mg·mL-1)灌胃致敏,每天1次;于第13周末以OVA(100mg·mL-1)进行激发,建立大鼠OVA食物过敏模型。其中中药复方Formula-3治疗组于第7周开始同时给予1mL中药复方Formula-3(150mg·mL-1)灌胃治疗,每天1次;OVA模型组则以1 mL的0.1 mmol·L-1 PBS灌胃治疗。PBS对照组致敏、激发和治疗均予以浓度为0.1mmol·L-1的PBS 1mL灌胃。激发24h后处死大鼠,测定3组大鼠血清中OVA特异性IgE水平、计算肥大细胞脱颗粒的百分比、观察肠道组织超微结构病理变化等,对治疗效果进行评价。结果OVA模型组血清中OVA特异性IgE抗体显著高于PBS对照组、脱颗粒肥大细胞数量显著多于PBS对照组(均P<0.01);中药复方Formula-3治疗组血清中OVA特异性IgE水平显著低于OVA模型组、肥大细胞脱颗粒显著少于OVA模型组(均P<0.01)。OVA模型组肠黏膜微绒毛变形,细胞内细胞器损伤,细胞间连接破坏,炎性细胞浸润增多;中药复方Formula-3治疗组微绒毛均匀整齐,细胞器基本正常,细胞间连接紧密,与OVA模型组相比病变明显轻微。结论中药复方Formula-3能有效地降低食物过敏大鼠血清中OVA特异性IgE,减少肥大细胞脱颗粒并减轻肠道的病理改变,对食物过敏有良好的治疗效果。; 王俊轶李建杰李国平刘志刚刘晓宇; 关键词：食物过敏中药治疗超微结构

改良中药复方Formula-3治疗BN大鼠食物过敏模型的疗效及肠道的病理变化: 2016年; 目的探讨改良中药复方Formula-3治疗卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏BN大鼠食物过敏模型的疗效及肠道的病理变化。方法将24只BN大鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组、OVA模型组、中药复方Formula-3治疗组和中药复方Formula-3对照组,每组6只。将OVA模型组6只BN大鼠建立OVA模型,均成功建模。前6周,OVA模型组、中药复方Formula-3治疗组BN大鼠均给予OVA混合液灌胃,生理盐水对照组、中药复方Formula-3对照组BN大鼠均给予生理盐水灌胃。第7周开始,中药复方Formula-3治疗组、中药复方Formula-3对照组BN大鼠均给予中药复方灌胃,生理盐水对照组、OVA模型组BN大鼠均给予生理盐水灌胃,同时第7、9、11、13周,OVA模型组、中药复方Formula-3治疗组BN大鼠均给予OVA混合液灌胃。第13周后用100g·L-1 OVA灌胃激发,24h后给予乙醚注射液麻醉,处死,摘除眼球取血。检测各组BN大鼠血清OVA-免疫球蛋白E(IgE)、IL-4的水平,光学显微镜和透射电镜下观察各组BN大鼠肠道组织的病理变化。结果 OVA模型组、中药复方Formula-3治疗组BN大鼠血清OVA-IgE、IL-4水平均明显高于生理盐水对照组、中药复方Formula-3对照组(均P<0.05)。中药复方Formula-3治疗组BN大鼠血清OVA-IgE、IL-4水平均明显低于OVA模型组(均P<0.05)。光学显微镜下观察显示中药复方Formula-3治疗组的肠道炎症程度、肠绒毛破坏明显减轻。透射电镜下观察显示OVA模型组可见肠道上皮细胞消失,微绒毛排列紊乱,细胞器破坏,肥大细胞脱颗粒严重,细胞核固缩、消失。中药复方Formula-3治疗组的肠道上皮细胞排列整齐,微绒毛轻度肿胀,肥大细胞脱颗粒减少,细胞核结构正常。结论改良中药复方Formula-3能够通过保护肠道黏膜屏障和抑制炎症来治疗食物过敏性疾病。; 贺守第李建杰黄胜光杨平常刘志刚; 关键词：食物过敏肠道病理变化疗效 BN大鼠

经合理的序列重组制备花生主要过敏原Ara h 2低致敏衍生物被引量：4: 2011年; 目的:构建经序列重组的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其低致敏原性。方法:根据已鉴定的Ara h 2 IgE抗原表位,利用基因工程技术将Ara h 2基因进行合理的组合,并将其序列进行合成,再将合成后的基因连入原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入Origami宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;Western blotting和ELISA鉴定该重组蛋白的低致敏原性。结果:测序结果表明合成后的序列成功转入原核表达载体pET-32a(+)上。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western blotting和ELISA结果均表明通过基因工程改造的Ara h 2蛋白(S-Ara h 2)与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏病人混合血清中IgE显著降低。结论:成功构建了经序列重组的Ara h 2表达载体,该基因表达的重组蛋白具有良好的低致敏原性,这将会为花生过敏患者的脱敏治疗提供了新的安全疫苗基础。; 易海涛刘芳夏立新闫浩刘飞燕李建杰刘志刚; 关键词：花生 H 疫苗

口服益生菌对食物过敏大鼠肠道粘膜免疫及病理变化的实验研究被引量：3: 2015年; 采用4周棕色挪威大鼠,随机分为PBS对照组、OVA致敏模型组和益生菌治疗组,检测血清中OVA特异性Ig E水平,采用HE染色和甲苯胺蓝染色观察肠道炎症水平以及腹腔肥大细胞变化,用电镜观察肠道超微结构组织形态的变化,建立大鼠食物肠道过敏模型,以研究口服益生菌对食物过敏大鼠肠道的免疫变化以及病理变化.研究结果表明:通过口服益生菌治疗,小鼠血清中特异性Ig E水平降低,腹腔肥大细胞减少,肠道黏膜结构破坏减轻.采用口服益生菌疗法对大鼠食物过敏性肠道疾病有一定的治疗效果,对食物过敏性肠道疾病的预防治疗提供了一条新途径.; 袁谢芳李建杰李国平刘志刚刘晓宇; 关键词：益生菌超微结构

中药Formula-3抑制RBL-2H3细胞脱颗粒机制的研究被引量：1: 2014年; 目的通过研究中药复方Formula-3(乌梅、灵芝、人参、当归、黄连、干姜)对嗜碱性粒细胞系(RBL-2H3细胞)和SOC通道的作用,探讨Formula-3对肥大细胞脱颗粒的作用机制。方法体外培养大鼠RBL-2H3细胞系制作肥大细胞的模型,通过MTT实验、脱颗粒实验和激光共聚焦(Confocal)实验来研究Formula-3对肥大细胞脱颗粒的作用机制。结果 Formula-3(终质量浓度0.05、0.2、0.8 mg/ml)在急性(0.5 h)和慢性(12 h)作用下呈质量浓度依赖性的抑制致敏RBL-2H3细胞脱颗粒(P<0.01),而对非致敏RBL-2H3细胞没有影响(P>0.05)。Formula-3可显著的抑制SOC通道钙离子内流(P<0.01)。结论 Formula-3通过抑制SOC通道钙离子内流来显著抑制肥大细胞脱颗粒,为治疗过敏性疾病提供理论依据。; 李兴永李建杰孙宏治何韶衡杨平常刘志刚

双歧杆菌对食物过敏治疗作用的实验研究被引量：2: 2011年; 目的探讨双歧杆菌对食物过敏的治疗作用。方法 4周龄棕色挪威大鼠(Brown-Norway Rat,BN Rat)构建卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏动物模型,以OVA 1 mg每天连续灌胃6周,同时分别建立PBS对照组和双歧杆菌治疗组;第6周取血测定血清中OVA特异性IgE(OVA-IgE)水平和IgG(OVA-IgG)水平作为模型评测指标;采用张力换能器测定肠道收缩情况,苏木素-伊红染色(Hematoxylin-Eosin stain,HE)及甲苯胺蓝(Toluidine blue Benzen esulfonic acid,TB)染色观察肠组织病理变化和肠粘膜肥大细胞数目和形态变化。结果第6周时实验组OVA-IgE和OVA-IgG含量显著升高,与对照组相比,OVA-IgE存在显著性差异(P<0.05),OVA-IgG存在极显著差异(P<0.01);经益生菌治疗后,OVA-IgE和OVA-IgG含量显著下降,与实验组相比,存在显著性差异(P<0.05)。双歧杆菌治疗组肠组织收缩较OVA组显著降低,存在显著性差异(P<0.05);HE染色和甲苯胺蓝染色可见双歧杆菌治疗组肠粘膜破坏程度、肠粘膜肥大细胞脱颗粒现象较OVA组缓解。结论 OVA致敏模型和双歧杆菌治疗组模型成功建立,双歧杆菌对食物过敏有较好的治疗作用。; 李建杰刘晓宇杨成彬陈思刘志刚; 关键词：双歧杆菌食物过敏肠组织肥大细胞

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