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酿酒酵母adh2和ald6双基因缺失突变株的构建被引量：7: 2009年; 酿酒酵母乙醇合成代谢过程中,阻断或削弱乙醛至乙酸代谢流不但能增强乙醇合成流,同时还能降低发酵乙酸含量。本研究以乙醇脱氢酶Ⅱ(adh2)基因缺陷型酿酒酵母YS2-Δadh2为出发菌株,应用长侧翼同源两步PCR(LFH-PCR)策略构建乙醛脱氢酶Ⅵ(ald6)基因敲除组件,转化酿酒酵母YS2-Δadh2敲除ald6基因,之后转入表达质粒pSH65到阳性克隆中,半乳糖诱导表达Cre重组酶切除Kanr基因筛选标记,最后,传代丢失质粒pSH65获得单倍体ald6基因缺失突变株。利用同样的敲除组件和技术再次敲除其等位基因,最终获得双基因缺失突变株YS2-△adh2-Δald6。发酵实验表明与出发菌株YS2相比,突变株乙酸合成量降低18%,乙醇最高产量提高12.5%。; 王艳尊雷娟娟江贤章高媛媛李欣蓝灿华陈由强陈如凯黄建忠; 关键词：酿酒酵母基因敲除

油菜根内生菌分离、鉴定及其植物益生作用筛选被引量：4: 2021年; 从油菜中分离鉴定根内生细菌菌株,检测评估其促生、抑菌潜力和机制,为开发具有植物促生和病害防控的微生物肥料提供依据。以油菜为研究对象,通过分离纯化和16S rRNA基因扩增分离和鉴定油菜根内生细菌,并进一步通过平板法、酶活法以及抑菌试验等分析分离其木制纤维素降解能力、促生作用以及抑菌活性等益生特性及其机理。结果表明:根据细菌菌落形态、颜色和大小,挑取纯化得到14株油菜根内生细菌菌株。经16S rRNA基因测序和鉴定分析,分别为假单胞菌、肠杆菌、芽孢杆菌、葡萄球菌和莱略特菌。在分离纯化的14株内生菌株中,除菌株Y-7、Y-8外都具有明显的木聚糖酶活性,除菌株Y-1、Y-7、Y-8、Y-9、Y-10外都具有纤维素分解能力,进一步对14株内生菌株的植物益生作用进行初步筛选和评价,得到产铁载体菌株Y-2、Y-4、Y-6、Y-10、Y-11、Y-13、Y-14,具有稳定固氮能力的固氮菌株Y-1、Y-2、Y-10、Y-13、Y-14。在拮抗内生菌筛选中,得到拮抗大肠杆菌菌株Y-1、Y-6、Y-7、Y-8、Y-12,拮抗金黄色葡萄球菌菌株Y-3、Y-4,拮抗枯草芽孢杆菌菌株Y-1以及拮抗黑曲霉菌株Y-3、Y-4、Y-6、Y-9、Y-10、Y-14。大多数分离的油菜根内生菌具有一定的木质纤维素降解能力。分离的油菜根内生菌具有广泛而多样性的植物益生特性,如促生长和抑菌活性,这些益生特性可能与其具有的产铁载体、产IAA以及固氮能力有关。结果表明油菜根内生菌可以作为筛选和开发具有植物促生和病害防控作用的微生物菌剂的重要来源。; 张沁怡杨美雪张婷程林洁黎烨张羽杉李景虹蓝灿华田宝玉李欣; 关键词：分子鉴定

鱼蛋白水溶氨基酸肥的制备及其对植物生长发育的影响: 2024年; 水溶性氨基酸肥料是一种新型的植物功能性有机肥料。为探究水溶氨基酸肥对植物生长的影响,本文以鱼产品下脚料为原料,通过合理优化料水比、蛋白酶种类和酶量以及水解条件制备水溶性氨基酸肥料。进而通过水培试验以不同稀释倍数的鱼蛋白水溶肥对小麦百农矮抗58进行施肥,确定最适稀释倍数,并分别采取喷施与浇施两种方法对番茄新中蔬四号进行施肥,研究水溶性氨基酸肥不同施肥处理对农作物生长发育的影响。结果表明:以1∶3料液比、添加0.1%碱性蛋白酶、50℃酶解4 h条件下,利用鱼蛋白下脚料可以制备可溶氨基酸总量为16.925 mg·g^(-1),且植物易利用氨基酸比例高(约50%)的鱼蛋白水溶肥。水培试验表明鱼蛋白氨基酸水溶肥的最适施用浓度为稀释100倍(DB100)。DB100显著提高了小麦种子萌发率和种子活力指数,促进了小麦幼苗的根长和根冠比(P<0.05)。以DB100作为稀释标准,盆栽番茄喷施氨基酸肥显著提高了番茄幼苗的株高(22.9%)、叶面积(38%)和叶片叶绿素含量(33.3%)(P<0.05),且降低了番茄叶片丙二醛含量(26.7%,P<0.05)。而水溶肥浇施与对照CK相比无显著差异(P>0.05)。盆栽试验说明叶面喷施水溶肥能够直接为植物提供营养物质,植物易吸收和利用,从而促进番茄的生长发育,增强植物叶光合作用效率,提高植物抗氧化能力。综上所述,合理使用水溶氨基酸肥可以显著促进植物种子萌发和幼苗生长,而叶面喷施水溶氨基酸肥显著促进了植物叶片的光合效率和植株的生长。; 林湘雪何咏梅辛恺达张婷李欣田宝玉; 关键词：促进植物生长

伯克霍尔德氏菌ZYB002脂肪酶lipC24基因的克隆、表达及其酶学性质被引量：2: 2015年; 【目的】克隆伯克霍尔德菌ZYB002菌株中的新型脂肪酶lip C24基因,测定其基本酶学性质,为后续深入研究该基因在菌株中的生理功能奠定基础。【方法】根据洋葱伯克霍尔德菌JK321菌株的全基因组DNA信息,直接设计引物从伯克霍尔德菌ZYB002菌株基因组中扩增出lip C24基因,并对之进行原核表达、重组蛋白的纯化及酶学性质分析。【结果】lip C24基因全长1317 bp,编码438个氨基酸残基;多肽链中具有保守五肽-G-X1-S-X2-G-序列;重组蛋白Lip C24的分子量为45 k Da;能有效水解各种对硝基苯酯,对中链脂肪酸的对硝基苯酯表现出偏爱性;其催化水解反应的最适温度为40℃,最适p H7.5;40℃下的半衰期为15.72 min,在p H 7.0-8.0的条件下,具有较好的稳定性。【结论】lip C24的编码产物为一个45 k Da蛋白,具有明显的脂肪酶活性,为中温中性脂肪酶。; 林红黄建忠舒正玉刘艳如武海龙李欣江贤章叶菲郑贞芬林跃鑫; 关键词：酶学性质

酶法原位制备过氧乙酸对活性艳蓝KN-R氧化脱色的工艺被引量：4: 2015年; 利用过水解酶催化合成过氧乙酸,过氧乙酸原位氧化活性艳蓝KN-R脱色.在单因子试验的基础上,通过正交优化试验确定活性艳蓝KN-R的最佳脱色条件为:在5 m L反应体系中,最适p H 5.0,加酶量为20 U·反应-1,乙酸乙酯对过氧化氢的摩尔比率为40∶1和活性艳蓝KNR的浓度为80 mg·L-1.在此条件下反应6 h后,活性艳蓝KN-R的脱色率为81.11%,24 h后的脱色率为91.96%.在50倍放大试验中,该工艺24小时的脱色率为84.55%.; 武海龙舒正玉林红李婷刘艳如叶菲慕向朵李欣江贤章黄建忠; 关键词：过氧乙酸原位制备脱色活性艳蓝KN-R

植物根际芽胞杆菌菌种资源采集及其具有过水解催化活性水解酶基因的克隆被引量：1: 2020年; [背景]芽胞杆菌源枯草杆菌蛋白酶(subtilisin carlsberg)、乙酰基木聚糖酯酶(acetyl xylan esterase)和头孢菌素乙酰水解酶(cephalosporin acetyl hydrolase)具有较高的过水解催化活性,有商业开发价值。[目的]挖掘芽胞杆菌菌株中具有过水解酶催化活性的水解酶蛋白基因,为后续制备过水解酶及酶法合成过氧乙酸奠定基础。[方法]利用定向筛选培养基,从植物根际及纳豆产品中筛选产蛋白酶芽胞杆菌候选菌株,并利用RFLP及16S rRNA基因对其进行鉴定。从蛋白酶高产芽胞杆菌菌株中克隆枯草杆菌蛋白酶、乙酰木聚糖醋酶和头孢菌素乙酰水解酶的全长基因。[结果]从植物根际土壤及纳豆产品中共分离到85个候选菌株,RFLP及16S rRNA基因鉴定结果表明候选菌株均为芽胞杆菌,分别属于Bacillus subtilis、Bacillus cereus、Bacillus pumilus和Bacillus megaterium四个类群。从B.subtilis NSYT-3克隆的枯草杆菌蛋白酶基因编码的多肽链全长381个氨基酸,从B.pumilus OSLJ-3克隆得到的乙酰基木聚糖酯酶基因编码的多肽链全长320个氨基酸,从B.subtilis NSYT-3克隆的头孢菌素乙酰水解酶基因编码的多肽链全长318个氨基酸,3D结构模拟表明这3个酶蛋白均具有α/β水解酶折叠家族蛋白结构特点。[结论]芽胞杆菌源具过水解催化活性水解酶基因的克隆,为后续开发酶法合成过氧乙酸工艺奠定了基础。; 王倩李欢郑琳贾文敬黄建忠李欣董思圳舒正玉; 关键词：根际细菌芽胞杆菌

破囊壶菌△4-脂肪酸脱饱和酶基因5′端侧翼区域的克隆与鉴定: 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,简称DHA)是目前发现的碳链最长、不饱和度最高的ω-3长链高度不饱和脂肪酸(Long-chain polyunsaturated fatty acids,Lc-P...; 江贤章陈金卿田宝玉高媛媛舒正玉李欣蓝灿华黄建忠; 关键词：破囊壶菌启动子绿色荧光蛋白; 文献传递

GC-MS结合OAV分析生物降糖发酵红曲酒特征性香气成分: 2023年; 为高品质红曲酒的酿造提供技术支撑,以传统甜型红曲酒为对照,在生物降糖发酵低糖红曲酒理化指标分析、感官品评的基础上,采用GC-MS定性分析生物降糖发酵低糖度红曲酒香气成分,进一步采用OAV评估特征性香气成分以及醇酯比值的变化,以此表征生物降糖发酵低糖度红曲酒特征性香气成分。结果表明:(1)生物降糖发酵低糖红曲酒呈橙红色,具有红曲酒清雅醇香,口感鲜美圆润、爽口醇和,酒体协调,感官评分96分,优于传统甜型黄酒(感官评分94分)。(2)生物降糖发酵低糖红曲酒总糖含量仅26 g·L^(-1),比传统甜型红曲酒下降了79.2%。(3)生物降糖发酵红曲酒和对照样品中共鉴定出挥发性物质32种,分别为醇类(7种)、酯类(18种)、其他类(7种)。挥发性化合物种类占比最高的是酯类,其次是醇类,其中乙醇、β-苯乙醇、2,3-丁二醇、乙酸乙酯、己酸乙酯、乙酸异戊酯等14种风味物质OAV值都>1,是红曲酒特征性香气的重要香气成分。; 黄建明黄祖新李欣章文贤林锦云; 关键词：红曲酒 GC-MS OAV

葡糖酸醋杆菌内源复制片段的克隆: 2011年; 采用改进的碱裂解法提取Gluconacetobacter hansenii ATCC23769自发不产膜突变体的内源隐蔽质粒。用不同的限制性内切酶对混合质粒直接进行酶切,酶切后的片段混合物与pUC18载体连接构建重组载体。重组载体回转入G.hansenii ATCC23769获得隐蔽质粒上具有复制能力的片段,序列结果分析表明:该片段上没有某些其他质粒所具有的Rep蛋白。利用该片段,构建了能同时在大肠杆菌和葡糖酸醋杆菌中复制的质粒载体,体内的抗生素抗性实验证明该载体具有良好的稳定性。; 颜彩玲李欣黄建忠

敲除SNF1基因提高酿酒酵母乙醇生物合成的研究被引量：2: 2009年; SNF1基因编码的Snf1p对起始受葡萄糖阻遏基因的转录是必需的。通过重叠延伸PCR和两步PCR法合成了两端各带有352bp和345bp与SNF1序列上下游同源的基因敲除组件。将该敲除组件转化至酿酒酵母YS2,获得被loxP-kan-loxP序列组件替换而产生kanr的阳性克隆子。然后将质粒pSH65转入阳性克隆子并诱导表达Cre酶切除kan基因,进而通过传代丢失质粒pSH65后得到SNF1单倍体缺陷型菌株。重复转化敲除组件实现另一条等位基因的敲除,得到SNF1双倍体缺陷型菌株YS2-△snf1::loxp-kan-loxp。厌氧发酵试验表明该突变株的乙醇产量较出发菌株YS2提高了8.74%。残糖量试验表明在培养基中葡萄糖消耗殆尽后,突变株相对于出发菌株而言并没有利用乙醇作为碳源,乙醇产量保持稳定未有下降。敲除SNF1基因是提高酿酒酵母生物合成乙醇的一条有效途径。; 雷娟娟王艳尊江贤章高媛媛李欣蓝灿华陈由强吴松刚黄建忠; 关键词：酿酒酵母基因敲除乙醇

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李欣

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