李真光
- 作品数：29 被引量：124H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划吉林省科技发展计划基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异分析被引量：5
- 2012年
- 从天津和内蒙古猪场中分离到2株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（TJ和NM1）,将TJ株经Marc-145细胞连续传代92代,得到致弱疫苗株TJM株。采用RT-PCR方法扩增TJ、NM1和TJM完整的ORF5基因片段,进行序列测定,并与其他国内外毒株的ORF5基因序列进行了比较和变异分析。结果表明：TJ株和NM1株ORF5基因与国内分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）具有较高的同源性,均为99.5%~99.8%,与欧洲型PRRSV同源性最低,分别为63.3%和63.5%。致弱疫苗株TJM与其原始毒株TJ相比有4个氨基酸发生突变（F23S,G80V,R151K,Q196R）,这些突变可能与TJ株毒力的降低有关。
- 冷雪李真光王凤雪温永俊王炜夏铭崎武华
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因
- 猪生殖与呼吸综合征病毒NM1株的分离鉴定及其Nsp2基因的序列分析被引量：4
- 2009年
- 从内蒙古某猪场患高热症病猪病料中分离到1株病毒,该病毒能在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR法鉴定证明,该病毒为美洲型PRRSV,将其命名为NM1。应用设计的特异性引物扩增NM1株的Nsp2基因,并与国内外PRRSV分离株的Nsp2基因序列进行了比较。结果表明,NM1株Nsp2基因推导的氨基酸序列出现30个不连续的缺失,与PRRSV高致病性毒株HuN4、HuB2、JXA1的核苷酸序列同源性分别为99.1%、99.0%和98.9%。动物回归试验结果显示,人工感染的5头仔猪全部发病,其中3头死亡,说明NM1株为发生变异的PRRSV,其致病力有所增强。
- 李真光冷雪齐巧玲温永俊武华
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒NSP2基因
- 高致病性PRRSV TJ株和致弱毒TJM株Nsp2测序及结构分析被引量：8
- 2011年
- 参照GenBank中PRRSV VR-2332株全序列设计特异性引物,扩增高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Por-cine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)TJ株和其致弱毒株TJM株非结构蛋白2(Nonstructure pro-tein 2,Nsp2)编码区,经过基因的扩增、连接、转化、筛选阳性克隆进行核苷酸测序.结果表明,PRRSV TJ株Nsp2长2 850 bp,TJM株Nsp2长2 490 bp.通过序列比较分析,发现Nsp2编码区序列保守性差,TJ株和TJM株Nsp2与VR-2332核苷酸序列的同源性分别为83.6%和82.9%,运用RNAdraw软件对Nsp2编码区RNA的2级结构预测分析表明,分离的高致病性强毒株TJ株和细胞致弱毒株TJM株与经典毒株VR-2332有较大不同,PRRSVNsp2的1级序列的变化导致RNA的2级结构发生构象变化,推测这可能是3个PRRSV毒株致病力不同的原因之一.
- 王凤雪温永俊刘准冷雪李真光武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒非编码区
- 鉴别PRRSV野毒感染与弱毒活疫苗TJM-F92免疫d120-ELISA方法的应用被引量：1
- 2016年
- 本实验研究了免疫后攻毒的GST-d120特异性抗体血清动力学变化特点,d120-ELISA和IDEXX检测不同免疫状态临床样品S/P值之间的区别与联系,并根据结果判断免疫动物是否发生野毒感染或存在弱毒疫苗的母源抗体。血清动力学实验中,免疫组6头实验动物免疫弱毒活疫苗TJM-F92(简称TJM-F92),对照组4头实验动物注射等体积PBS,第28天2组分别注射强毒TJ F3,采集血清,绘制血清动力学曲线。d120-ELISA检测结果显示,免疫组中5头免疫及攻毒后均为阴性,1头免疫1d^28d为阴性,攻毒后血清抗体水平上升并在第14天转为阳性;对照组4头动物攻毒后17d左右出现抗体阳性转化。IDEXX检测结果显示,免疫组均在第10天左右出现血清阳性转化,抗体水平逐渐上升并维持较高水平,攻毒后血清抗体无较大变化;对照组在攻毒后7d左右出现阳性转化。结果表明,d120-ELISA检出抗体阳性的时间要晚于IDEXX试剂盒10d左右,但d120-ELISA能够检测出IDEXX试剂盒无法检出的免疫TJM-F92后发生强毒感染的动物。临床应用试验中,采集并检测HP-PRRSV的TJM-F92和弱毒活疫苗JXA1-R(简称JXA1-R)免疫14d和28d后的临床血清样品,以及疑似发生PRRSV感染和未发生感染的灭活疫苗免疫猪场的样品。试验结果显示,d120-ELISA检测TJMF92免疫阳性血清为阴性;在免疫14d和28d后,d120-ELISA检出JXA1-R临床免疫血清阳性率为0%(0/15)和86.7%(13/15),相应IDEXX检出阳性率为86.7%(13/15)和100%(15/15)。d120-ELISA和IDEXX检测免疫灭活疫苗并疑似发生PRRSV感染的猪群样品的阳性率分别为45.0%(9/20)和100%(20/20),而检测未感染猪场样品的阳性率分别为0%(0/30)和40%(12/30)。综上所述,血清动力学试验和和临床应用试验结果证明,d120-ELISA可以鉴别野毒感染与TJM-F92或灭活疫苗免疫动物,为组装ELISA试剂盒、筛选并剔除TJM-F92免疫动物中发生野毒感染的动物、净化猪群奠定了基础。
- 王西西王凤雪李真光温永俊王鑫师新川宋妮武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征
- 副流感病毒对不同宿主致病性研究进展被引量：1
- 2017年
- 副流感病毒(PIV)广泛地存在于自然界,其基因型较多,宿主范围广泛,不仅引起人的呼吸道疾病,而且使牛,羊,犬等动物感染发病,给畜牧业生产造成较大的经济损失。论文就副流感病毒的病毒学基础、致病机制、引起不同宿主动物特别是牛、羊、犬等的广泛感染流行情况进行综述,为副流感病毒致病机制的研究以及诊断和预防策略的提出提供理论依据。
- 何民辉李真光王凤雪朱洪伟张淑琴孙娜汪孟航温永俊武华
- 关键词：副流感病毒宿主动物致病机制
- 牛传染性鼻气管炎诊断方法研究进展被引量：17
- 2010年
- 进行牛传染性鼻气管炎分子流行病学调查时,首先通过临床症状观察进行初诊,然后再进行实验室确诊。目前实验室诊断主要包括病原学诊断和血清学诊断。病原学诊断方法包括包涵体检查、病毒分离和病毒核酸检测;血清学诊断方法包括中和试验、琼脂扩散试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验和变态反应。有时还要进行鉴别诊断,鉴别诊断主要有单克隆抗体法、鉴别PCR等。牛传染性鼻气管炎在世界范围内流行,给全球的养牛业造成了很大的影响。论文综述了牛传染性鼻气管炎诊断方法研究进展,为预防和消除该病提供参考。
- 徐晓琴冷雪李真光武华
- 关键词：牛传染性鼻气管炎牛传染性鼻气管炎病毒
- 高致病性PRRSV TJ株Nsp2蛋白的缺失及其二级结构预测被引量：2
- 2011年
- 根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJ株F3代全基因序列(GenBank登录号为EU860248),结合多个PRRSV亚洲株Nsp2基因比对结果,设计合成引物,选择高致病性PRRSV TJ株噬斑克隆纯化前后14个不同代次,利用合成的引物扩增各代次Nsp2基因的高变区片段及F3代和F92代Nsp2全基因,并进行产物克隆和氨基酸序列分析及结构预测。测序结果表明:PRRSV TJ株在克隆传代过程中出现了序列整段缺失,共缺失120个氨基酸,并且从F18代噬斑克隆开始一直稳定存在。缺失高变区及Nsp2蛋白二级结构预测结果表明:缺失的氨基酸使Nsp2蛋白在空间结构上发生了较大的变化,推测这可能与PRRSV TJM–F92的毒力和致病力减弱有关。
- 王凤雪冷雪李真光温永俊刘准武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白二级结构
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒（TJ株）分离鉴定及其ORF5基因序列分析
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。该病自1987年在美国首次发现以来,迅速遍及世界各地,给全球的养猪业带来了巨大的经济损失。PR...
- 李真光
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因
- 文献传递
- 表达PRRSV强弱毒Nsp2的Marc-145细胞系的建立及Nsp2蛋白对PRRSV复制的影响被引量：2
- 2012年
- 为探讨Nsp2蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的影响,采用体外克隆法构建表达高致病性PRRSV TJ株和其致弱毒TJM株Nsp2基因的真核表达质粒pEGFP-TJ Nsp2和pEGFP-TJMNsp2,含有增强式绿色荧光蛋白表达盒,瞬时转染重组质粒到Marc-145细胞系单层,利用G418抗性筛选建立细胞系,通过PCR和RT-PCR鉴定。PRRSV感染筛选的细胞系,检测病毒TCID50。结果建立稳定表达TJ株和TJM株Nsp2基因的猴肾细胞系Marc-145-TJ Nsp2和Marc-145-TJM Nsp2;在表达PRRSV TJ株和TJM株Nsp2蛋白的Marc-145细胞上感染PRRSV病毒,在复制早期病毒时增殖速度快,即Nsp2蛋白对PRRSV复制早期有正向调控作用,并且强毒的Nsp2此作用更明显。
- 王凤雪刘准温永俊冷雪李真光武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞系
- 中国蓝耳病流行现状及高致病性蓝耳病弱毒疫苗的研制被引量：1
- 2014年
- 近年来,蓝耳病作为中国养猪业的龙头疫病,一直让养殖场饱受其害。目前对于蓝耳病的防控行业人士总离不开两个话题,一是蓝耳病是否需要免疫？如果需要免疫,又是哪些猪场需要免疫？二是到底选择哪种疫苗进行免疫？是政府招标疫苗还是商品化疫苗？是经典毒株疫苗还是高致病性毒株疫苗？
- 徐晓琴冷雪李真光
- 关键词：蓝耳病弱毒疫苗细菌病两点式传播链
