李纪平
- 作品数：12 被引量：47H指数：4
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海-联合利华研究与发展基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PPARγ2诱导脂肪细胞分化相关基因的克隆及鉴定被引量：5
- 2001年
- 目的分离和克隆小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ2 (mPPARγ2 )诱导脂肪细胞分化的相关基因。方法在体外建立mPPARγ2诱导NIH3T3成纤维细胞分化成脂肪细胞模型基础上 ,采用mRNA差异显示技术分离、克隆PPARγ2诱导的脂肪细胞高表达或低表达的cDNA片段 ,再通过半定量RT—PCR证实。 结果经mRNA差异显示技术分离到 2 0条差异显示片段 ,进一步对差异显示片段进行PCR扩增、T/A亚克隆及测序分析 ,与GenBank基因数据库比较后 ,得到 8个已知基因 ,一条新基因序列 ,2个EST序列和 7个新的EST序列。半定量RT—PCR结果显示UNR基因在PPARγ2诱导的脂肪细胞中表达上调 ,而凋亡抑制因子 5 (API5 )的表达则下调。
- 李果左祥生丁伟骆天红李纪平罗敏
- 关键词：PPARΓ2MRNA差异显示基因克隆CDNA脂肪细胞分化
- 小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ_2重组逆转录病毒载体在NIH3T3细胞中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 通过应用重组逆转录病毒介导小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(mPPARγ2 )基因整合入NIH3T3细胞基因组中并进行表达。方法 从经测序证实含正确序列mPPARγ2的重组质粒pcDNA3/mPPARγ2 中 ,双酶切下约 1.5Kb的mPPARγ2 全长cDNA编码序列 ,亚克隆入逆转录病毒载体pGCEN中构建重组逆转录病毒载体pGCEN/mPPARγ2 。pGCEN/mPPARγ2 及pGCEN经LipofectAMINE感染病毒包装细胞系PA317细胞 ,通过筛选PA317细胞G418抗性克隆 ,收集病毒上清 ,然后用其感染靶细胞NIH3T3细胞 ,用免疫荧光染色及Western印迹方法鉴定mPPARγ2 在NIH3T3细胞中的表达情况。结果 构建了含mPPARγ2 全长cDNA重组逆转录病毒载体 ,获得了滴度分别为 5×10 4 CFU/ml和 6× 10 5CFU/ml的pGCEN/mPPARγ2 及pGCEN的病毒上清。经鉴定pGCEN/mPPARγ2 能有效地感染靶细胞NIH3T3细胞并表达mPPARγ2 。结论 本研究结果为在体外建立脂肪细胞分化模型及为进一步研究PPARγ2
- 李果左祥生骆天红李纪平刘赟孙卫华罗敏
- 关键词：NIH3T3细胞逆转录病毒科小鼠脂肪细胞
- 泛素在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的表达被引量：8
- 2005年
- 目的检测高浓度葡萄糖对血管内皮细胞凋亡的影响和泛素表达的变化。方法ECV-304细胞在高糖(25mmol/L)和正常糖浓度(5.5mmol/L)DMEM培养液中分别培养24、48、72h,用MTT法检测细胞活力,用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡特异性的DNA片段,并用Northernblot检测泛素mRNA的变化。结果高糖24、48、72h组细胞OD值比正常浓度组均显著下降(P<0.05);1.8%琼脂糖凝胶电泳在高糖48、72h组检测到细胞凋亡特异性DNA片段;泛素mRNA在高糖24、48、72h组分别增加25.37%、53.47%和63.93%(P<0.05)。结论高浓度葡萄糖可增加血管内皮细胞凋亡,泛素mRNA在高糖诱导的内皮细胞凋亡中表达上调,且发生在凋亡形态学改变之前,泛素参与调节高血糖诱导的细胞凋亡。
- 王晓李果李纪平刘赟
- 关键词：高糖内皮细胞泛素细胞凋亡血管内皮细胞功能紊乱
- 受血糖调控的定点突变胰岛素原真核表达载体的构建被引量：2
- 2004年
- 目的 构建受血糖调控的含葡萄糖-6-磷酸酶(G6p)启动子的定点突变胰岛素原基因真核表达载体。方法 应用基因突变技术(重叠延伸拼接法)改变胰岛素原C肽两端的氨基酸序列,使之能被存在于大多数细胞中的furin酶所识别并剪切为成熟的胰岛素,新序列命名为INS/furin;应用基因重组技术将G6p启动子序列替代真核表达载体pIRES中的CMV启动子序列,并将INS/furin亚克隆至pIRES的多克隆位点B。结果 Sgf Ⅰ和Sac Ⅰ、Xba Ⅰ和Not Ⅰ两种组合的双酶切及特定引物测序均证实载体构建成功。结论 带有G6p启动子的含定点突变胰岛素原基因的真核表达载体有望成为糖尿病基因治疗理想的候选载体。
- 张芳林张迪刘优萍周文中杨键刘赟李纪平李果罗敏
- 关键词：血糖真核表达载体糖尿病
- 糖脂病相关基因克隆、鉴定及功能分析-代谢综合征分子机制系列研究
- 李果张芳林罗敏朱宏达骆天红左祥生陈刚李纪平刘优萍刘赟张迪周文中陈家伦
- 该课题建立了接近人类临床表现、包括糖尿病心血管病变在内的各种糖脂病变的大鼠模型。进行瘦素受体、脂蛋白酶、ApoE、ACE等基因与中国人2型糖尿病及其心血管并发症的多态性系列分析，对相关基因型的检测有助于疾病的早期诊断和治...
- 关键词：
- 关键词：糖脂病基因克隆代谢综合征分子机制
- 原代分离的大鼠胰岛细胞对葡萄糖刺激胰岛素分泌的反应性研究被引量：4
- 2005年
- 目的:研究原代分离的大鼠胰岛对葡萄糖刺激的胰岛素分泌反应性。方法:胶原酶原位灌注法分离大鼠胰岛,在含0.5%BSA、5.5或11.1mmol/L葡萄糖的培养基中培养不同时间后,用含0.2%BSA、3.3mmol/L葡萄糖的KRB缓冲液预培养胰岛30min,分别换入含不同浓度葡萄糖KRB缓冲液,培养1h,收集上清,RIA法测定胰岛素浓度。结果:大鼠胰岛过夜培养后,在基础(3.3mmol/L)和高浓度(16.7mmol/L)葡萄糖条件下胰岛素分泌量分别为(12.4±3.2)和(45.2±4.2)μU/ml/10islets/h;5.5mmol/L和11.1mmol/L葡萄糖浓度下培养12h和20h后,胰岛对葡萄糖的反应性均明显高于16.7mmol/L和22.5mmol/L葡萄糖组(P<0.05);体外培养5d后,对高糖的反应性为(4.28±0.67)倍。结论:原代分离的大鼠胰岛可在(1～5)d内保持对葡萄糖的反应性。
- 谢晓雁王晓顾燕云李纪平李果罗敏
- 关键词：胰岛素胰岛素分泌量葡萄糖浓度反应性胰岛细胞
- PPARγ2诱导脂肪细胞分化相关基因克隆及鉴定
- 目的:在体外建立PPARγ2诱导脂肪细胞分化模型基础上,分离和克隆与PPARγ2诱导脂肪细胞分化的相关基因,为进一步揭示PPARγ2诱导脂肪细胞分化的分子机制提供理论依据.方法:采用分子克隆、基因转染、逆转录包装及感染靶...
- 李果左祥生骆天红丁伟王晓李纪平刘斌罗敏
- 文献传递
- PPARγ2表达诱导NIH3T3成纤维细胞向脂肪细胞分化(英文)被引量：3
- 2001年
- 目的 应用重组逆转录病毒载体介导小鼠过氧化物酶体增殖体激活的受体γ2 (mPPARγ2 )基因在NIH3T3成纤维细胞中表达 ,并进一步研究其功能。方法 从经荧光测序证实含正确mPPARγ2cDNA序列的重组质粒pcDNA3/mPPARγ2中 ,双酶切下mPPARγ2全长cDNA序列 ,亚克隆入逆转录病毒载体pGCEN中 ,构建重组逆转录病毒载体pGCEN/mPPARγ2。用PA317细胞对pGCEN/mPPARγ2及pGCEN进行包装 ,并用G4 18进行PA317细胞抗性克隆筛选 ,收集病毒上清 ,感染靶细胞NIH3T3成纤维细胞。表达mPPARγ2的NIH3T3成纤维细胞在含PPARγ激活物 5 ,8,11,14-二十碳四烯酸(ETYA)等分化介质中培养 ,可被诱导向脂肪细胞分化。结果 构建了含mPPARγ2全长cDNA重组逆转录病毒载体pGCEN/mPPARγ2 ,获得了较高pGCEN/mPPARγ2及pGCEN的逆转录病毒上清。重组逆转录病毒载体可介导mPPARγ2在NIHT3T3成纤维细胞胞核中表达。油红O染色证实 ,表达mPPARγ2的NIHT3T3成纤维细胞在分化介质中培养分化 10天后 ,胞浆中明显积聚了较多的中性脂肪 ,其细胞形态也与体内成熟脂肪细胞相似 ,而且这些细胞表达脂肪细胞特异性标志基因如AP2和leptin。结论 本研究在体外成功地建立了由PPARγ2诱导NIH3T3成纤维细胞向脂肪细胞分化的模型 。
- 左祥生李果骆天红李纪平刘贇罗敏
- 关键词：成纤维细胞逆转录病毒脂肪细胞
- 染色体20q13区域SNP与中国人2型糖尿病的相关性被引量：2
- 2005年
- 目的采用单核苷酸多态性(SNP)标记,在以往所发现的中国汉族2型糖尿病相关基因定位区域(20q13)内寻找疾病易感基因位点。方法选取70例散发糖尿病病人及其正常配偶作为研究对象,通过生物信息学方法在公共SNP数据库中查找定位区域内11个候选基因的21个SNP位点,用等位基因专一性实时PCR方法进行分型,并做病例—配偶对照关联分析。结果21个SNP中有8个在中国人群中为常见SNP位点。病例—配偶对照关联分析结果显示,PRex1基因的SNP位点rs3936192的等位基因频率在2型糖尿病组和正常对照组间有显著性差异(P=0.0280)。结论上述SNP位点可能与中国汉族2型糖尿病相关,为进一步研究这一位点所在的基因与2型糖尿病的关系提供了理论依据。
- 张宏利朱鋐达骆天红王琴琴苏莉珍陆骆赵列宾戴蒙刘优萍李纪平刘赟李果罗敏
- 关键词：单核苷酸多态性2型糖尿病
- 蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因多态性与2型糖尿病和肥胖的相关性研究被引量：13
- 2006年
- 目的研究中国人群中蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP-1B)基因的单核苷酸多态性(SNP)与2型糖尿病及肥胖的相关性。方法采用直接测序法对PTP-1B基因作SNP筛查,并在夫妻配对样本中对所检出的SNP作基因分型。结果共检出6个SNPs位点,其中内含子区3个(I5/37C→A,I6/82A→G,I7/301C→T),外显子区3个(E8/45C→T,E9/35G→A,E10/372G→A),其中E9/35G→A为新发现的突变类型;在病例-配偶对照研究中发现,I5/37C→A,I6/82A→G和I7/301C→T等位基因频率在糖尿病患者和正常人配偶中差异有统计学意义(均P<0.05),其余位点的等位基因频率在两组间的分布则无明显差异。与肥胖的相关性研究中发现I5/37C→A和I7/301C→T位点与男性的腰臀比(WHR)相关(P<0.05)。结论PTP-1B基因的SNP位点I5/37C→A,I6/82A→G和I7/301C→T多态性可能和2型糖尿病的发病相关,其中I5/37C→A和I7/301C→T与男性的WHR相关。
- 张宏利朱鋐达骆天红王琴琴苏莉珍陆骆赵列宾戴蒙刘优萍李纪平杨键刘赟江凌李果罗敏
- 关键词：肥胖症蛋白酪氨酸磷酸酶-1B腰臀比
