李邦印
- 作品数：22 被引量：63H指数：4
- 供职机构：解放军第309医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌Rv3425蛋白的原核表达纯化及其血清学诊断价值被引量：1
- 2013年
- 目的:用原核系统表达结核分枝杆菌Rv3425蛋白并纯化,评价该重组蛋白在结核病血清学诊断方面的价值。方法:以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板,PCR扩增得到Rv3425基因序列,克隆至表达载体pET-28a中,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导、表达后纯化,用Western印迹和ELISA法进行抗原性初步评价。结果:在原核系统内经IPTG诱导表达后,Rv3425蛋白主要以包涵体形式存在,经复性和镍柱层析纯化后,纯度达95%以上;Western印迹和ELISA结果证明重组Rv3425具有较强的抗原活性;用纯化的Rv3425蛋白做抗原,临床诊断结核病人血清,阳性率达50%。结论:高纯度的Rv3425蛋白在结核病诊断方面具有很高的应用价值,可作为结核病诊断的备选抗原。
- 孙卫国李邦印刘艳华张灵霞熊志红程小星
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达血清学诊断
- Rv2653c在大肠杆菌中的克隆与表达研究
- 目的：从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法：根据H37Rv基因组序列合成引物，以PCR方法钓取Rv2653c基因，克隆到pGEM-T上，挑取阳性克隆进行测序，将正确编码基因克隆到pE...
- 李邦印孙卫国程小星孙昌文熊志红王仲元王金河苏锐
- 关键词：结核分枝杆菌大肠杆菌基因克隆蛋白表达结核病
- 两种DNA探针杂交检测结核分枝杆菌的研究被引量：8
- 2001年
- 张灵霞庄玉辉杨华卫李邦印夏湘萱
- 关键词：结核分枝杆菌DNA探针聚合酶链反应痰标本斑点杂交
- 结核分枝杆菌PPE17蛋白原核表达与抗原性分析
- 2013年
- 目的利用原核系统生产重组结核分枝杆菌PPE17蛋白,Western-Blot方法鉴定PPE17蛋白的抗原性和特异性。方法 PCR扩增Rv1168c基因序列然后克隆至原核表达载体pET-24b中,对PPE17蛋白进行表达和纯化,并以Western blot分析其抗原性和特异性。结果 PPE17蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,复性后的PPE17蛋白与结核病患者阳性血清标本呈强阳性反应,与健康人血清标本无反应。结论 PPE17蛋白在大肠杆菌中以包涵体表达形式存在,具有抗原特异性和免疫原性,可开发为结核病临床诊断试剂。
- 孙卫国李邦印张灵霞熊志红李国利程小星
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达抗原性
- Rv2653c在大肠杆菌中的克隆与表达研究
- 目的从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法:根据H37Rv基因组序列合成引物,以PCR方法钓取Rv2653c基因,克隆到pGEM-T上,挑取阳性克隆进行测序,将正确编码基因克隆到pET...
- 李邦印孙卫国程小星孙昌文熊志红王仲元王金河苏锐
- 关键词：结核分枝杆菌大肠杆菌克隆
- 文献传递
- 结核分枝杆菌16KD重组蛋白的纯化及血清学诊断应用价值的研究被引量：3
- 2007年
- 目的：纯化获得结核分枝杆菌重组16KD蛋白，并评价其在血清学诊断方面的应用价值。方法：应用亲和层析方法纯化结核分枝杆菌重组16KD蛋白，应用ELISA方法检测220例血清中的抗结核抗体。结果：结核分枝杆菌重组16KD蛋白以包涵体形式表达，以48名正常人血清0D492＋2S为正常限值，57例PPD阳性血清，47例菌阳结核患者血清和68例菌阴结核患者血清阳性检出率分别为19．30％、93．62％和82．35％。结论：结核分枝杆菌16KD重组蛋白以包涵体形式高效表达，具有较强的抗原特异性和免疫反应性。
- 阳幼荣李邦印吴雪琼张俊仙梁艳李洪敏王兰张翠英孟祥红朱琰
- 关键词：分枝杆菌血清学试验
- Rv2653c在大肠埃希菌中的克隆与表达研究被引量：2
- 2010年
- 目的从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法根据H37Rv基因组序列合成引物,以PCR方法钓取Rv2653c基因,克隆到pGEM-T上,挑取阳性克隆进行测序,将正确编码基因克隆到pET24b载体上,在BL21大肠埃希菌菌株中以IPTG诱导表达重组蛋白。以金属螯合层析初步分离纯化重组蛋白,采用western blot方法对重组抗原进行抗原性初步分析。结果首先获得了重组的Rv2653c编码的蛋白,表达产率不低于20%,初步纯化纯度约90%,以人血清进行的western blot分析发现,Rv2653c重组蛋白有较好的抗原性。结论获得了Rv2653c重组蛋白为进一步寻探讨其功能及应用价值奠定基础。
- 李邦印孙卫国程小星孙昌文熊志红王仲元王金河苏锐
- 关键词：分枝杆菌结核大肠埃希菌细菌蛋白质类重组蛋白质类
- rDNA探针杂交检测病人痰标本中结核杆菌的研究被引量：10
- 2000年
- 应用结核分枝杆菌特异的rDNA探针杂交检测痰标本中的结核杆菌rDNA ,评价其在临床标本检测中的应用价值。方法 用引物b对结核分枝杆菌 1 6S - 2 3SrDNA间隔区序列进行扩增 ,同时加入生物素标记 ,制成 2 50bp的rDNA探针。对该探针的敏感性、特异性进行了研究 ,并对 90份结核病人 ,30份非结核病人痰标本的PCR产物进行了斑点杂交检测。结果 rDNA探针检测引物bPCR扩增产物的敏感性为 1 0 0pg。rDNA探针与受试 2 4种分枝杆菌和 1 1种非分枝杆菌引物bPCR扩增产物杂交只有结核分枝杆菌、胃分枝杆菌为阳性杂交 ,特异性较高。而rDNA探针对 90份结核病人痰标本引物b扩增产物检测的阳性率为 80 .2 % ,高于PCR扩增产物电泳检测结果 (64% )。rDNA探针与 30份非结核病人痰标本杂交结果均为阴性杂交。结论 rDNA探针与引物bPCR扩增相结合能提高结核病人痰标本检测的敏感性与特异性。
- 张灵霞庄玉辉杨华卫李邦印夏湘萱
- 关键词：结核分枝杆菌聚合酶链反应肺结核
- 结核分枝杆菌对左氧氟沙星与莫西沙星的交叉耐药性及gyrA和gyrB基因突变分析被引量：23
- 2010年
- 目的研究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）对左氧氟沙星（1evofloxacin，LVF）与莫西沙星（moxifloxacin，MXF）的交叉耐药性，分析gyrA和gyrB基因突变位点分布及突变位点与耐药水平的关系。方法采用改良罗氏培养基检测MTB标准菌株H。，Rv、66株LVF耐药和55株LVF敏感的MTB临床分离菌株LVF和MXF的最低抑菌浓度（minimal inhibition concentration，MIC）。通过PCR直接测序法测定gyrA和gyrB耐药基因片段。结果MXF的MIC比LVF低2～4倍，MXF抗MTB菌株的活性是LVF的2～4倍。MTB标准菌株H37Rv未见gyrA和gyrB基因突变。66株LVF耐药和55株LVF敏感菌株均存在gyrAAGc95ACC（Ser→Thr）突变；55株LVF敏感菌株gyrA和gyrB基因未见其他突变。66株LVF耐药菌株中，40株（60．6％）gyrA GAC94（AAC或GGC或GCC或CAC或TAC）（Asp→Asn或Gly或Ala或His或Tyr）突变；19株（28．8％）gyrAGCG90GTG（Ala→Val）和1株（1．59／6）gyrA GCG90AAG（Ala→Lys）（未见报导）双碱基突变；3株（4．6％）gyrA TCG91CCG（Ser→Pro）突变；1株（1．5％）gyrBGAC500AAC（Asp→Asn）突变；2株（3．0％）呈gyrA GAC94（AAC或GCC）（Asp→Asn或Ala）与gyrB GGG551AGG（Gly→Arg）（未见报导）双位点突变。gyrA GAC94（AAC或GGC）（Asp→Asn或Gly）突变引起FOs药物较高水平耐药；GAC94GCC（Asp→Ala）和GCG90GTG（A1a→Val）突变引起FQs药物较低水平耐药。结论LVF与MXF之间存在交叉耐药，MXFMIC随LVFMIC增高而增高，但耐药水平不同。GyrA基因突变位点可能与耐药水平有关，有可能根据基因突变的位点分析耐药水平。
- 李国利陈澎孙昌文张灵霞李邦印赵雁林
- 关键词：氧氟沙星莫西沙星GYRAGYRB
- 两种DNA探针杂交检测结核分支杆菌方法的研究被引量：4
- 2000年
- 为改进结核杆菌DNA探针的特异性与实用性,研制了以生物素标记的两种对结核分支杆菌特异的DNA探针:一个5’端标记的20bp的寡核苷酸探针和一个采用PCR方法合成的188bp长链探针。两种探针分别与结核分支杆菌的全染色体DNA,以及基因组上IS6110序列的一段317bp的PCR扩增产物进行斑点杂交,以碱性磷酸酶(AP)催化的染色反应检测,测试了两个探针的敏感性和特异性。系统地比较研究了两种探针杂交检测条件:探针的浓度选择,杂交温度与洗膜温度的选择,以及杂交与洗膜温度对检测的敏感性与特异性的影响。寡核苷酸探针和188bp探针杂交检测纯化结核分支杆菌基因组DNA的敏感性分别为100ng与6ng,杂交检测PCR产物的敏感性分别是400pg与50pg。两探针的最佳杂交浓度均为40～160ng/ml,最佳杂交温度分别是42℃与68℃,最佳洗膜温度分别是60℃与60～68℃之间。两种探针均仅与结核分支杆菌及BCG有杂交信号,而与其它受试分支杆菌及非分支杆菌杂交结果都呈阴性。它们的特异性都很强,但188bp探针的敏感性约是寡核苷酸探针的7～16倍,而且188bp探针检测本底较低。
- 杨华卫杨树德庄玉辉李国利李邦印
- 关键词：斑点杂交结核分支杆菌DNA探针
