杜志游
- 作品数：49 被引量：106H指数：5
- 供职机构：浙江理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学医药卫生更多>>
- 黄瓜花叶病毒芭蕉分离物的RNA3全长克隆与序列分析
- 黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是分布最广泛和危害最严重的植物病毒。该病毒主要分为Ⅰ组(SubgroupⅠ)和Ⅱ组(SubgroupⅡ)。迄今为止,在我国和广大亚洲地区的CMV分离物基本...
- 覃佐东金磊磊田清花严师节杜志游陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒
- 文献传递
- 利用烟草脆裂病毒同时表达两种外源蛋白的载体构建法
- 本发明公开了一种同时非融合表达两个外源蛋白载体pTRV2e<Sup>3</Sup>的构建方法：以TRV基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料，采用病毒基因缺失策略构建包含TRV的2b和2c基因启动子载体pTR...
- 廖乾生郭歌常发光赖家良杜志游
- 文献传递
- 黄瓜花叶病毒辣椒分离物侵染性克隆构建被引量：4
- 2008年
- 【目的】鉴定引起辣椒产生褪绿黄化症状的病原物,构建侵染性克隆。【方法】大田辣椒样品通过ELISA检测,结合病毒外壳蛋白SDS-PAGE及病毒RNA分析,初步确定辣椒中病原物为黄瓜花叶病毒(CMV)Phy株系。以辣椒病毒粒子RNA为模板,采用含T7启动子的不同正向引物通过RT-PCR扩增CMV-Phy全长基因组RNA1、RNA2和RNA3。PCR产物经过双酶切后连接到pUC118载体,并分别比较5种(DH5α、HB101、JM109、LE392和NM522)感受态细胞的转化效率。体外转录CMV-Phy的基因组cDNA克隆(pUC-P1、pUC-P2和pUC-P3)成RNA分子(P1P2P3),分析其转录效率和侵染活性。P1P2P3与CMV的卫星RNA进行假重组,进一步确定CMV-Phy侵染性克隆的成功构建。【结果】引起辣椒产生褪绿黄化症状病原物为CMV,携带卫星RNA;心叶烟接种辣椒病毒粒子后同样产生褪绿黄化症状。HB101感受态细胞最适合CMV-Phy基因组转化。CMV-Phy基因组及其卫星RNA的大小如下:RNA1为3356nt、RNA2为3048nt和RNA3为2220nt,卫星RNAPz-satRNA为384nt(序列登陆号分别为:DQ402477,DQ412731,DQ412732EF363688)。CMV-Phy的cDNA克隆体外转录在5′端添加G有利于提高转录效率,但影响其侵染活性;P1P2P3在苋色藜和心叶烟产生的症状与其病毒粒子产生的症状相一致。除了Pz-satRNA,P1P2P3还能作为T1-satRNA、Rs-satRNA和Tsh-satRNA辅助病毒;T1-satRNA可加重CMV-Phy在心叶烟症状反应,而其它3个卫星RNA则对此起减弱作用。【结论】以病毒粒子RNA为模板,采用touch-upPCR扩增参数在1个反应管中同时获得CMV-Phy基因组RNA1、RNA2和RNA3;CMV-PhyRNA1、RNA2和RNA3的5′端添加1个G最有利于侵染性克隆构建。
- 廖乾生杜志游张华荣吴鹏朱丽萍陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒侵染性克隆
- 一种利用原位合成微流体芯片的检测方法
- 本发明公开了一种利用原位合成微流体芯片的检测方法，包括以下步骤：1)利用现有模式植物上公开报道的非编码小RNA的序列，优选miRNA的序列信息，依据其正义链或其负义链序列设计互补的寡核苷酸杂交探针；2)用原位合成方法制备...
- 陈集双尹雪鸿竺锡武朗秋蕾高晓莲杨文征杜志游
- 文献传递
- 黄瓜花叶病毒2b蛋白对寄主光合速率和叶绿体结构的影响被引量：8
- 2007年
- 黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)2b蛋白作为重要致病因子的角色在茄科模式植物上已为广泛描述,但其致病机理尚未廓清.从寄主叶绿体结构和光合特征的角度探索了病毒侵染过程中2b蛋白对心叶烟(Nicotiana glutinosa)的影响.首先利用PCR方法导入突变位点,构建了2b蛋白不表达的人工突变体Fny-CMV!2bpro,然后通过平行接种野生型Fny-CMV和Fny-CMV"2bpro,分析二者侵染后心叶烟的症状表现、叶绿素含量、光合速率以及叶绿体超微结构变化.结果显示:接种30天,Fny-CMV侵染的心叶烟表现重花叶、畸形和矮化症状,植株的光合速率和叶绿素含量显著降低,叶绿体形态和结构发生明显病变.但是,Fny-CMV#2bpro侵染的心叶烟植株仅表现轻微花叶或不表现明显症状,与健康对照相比,其光合速率和叶绿素含量没有显著差异,叶绿体形态和结构亦未出现明显病变.由此可见,野生型病毒侵染导致的相对低的光合速率和叶绿素含量,与2b蛋白引起的叶绿体形态和结构的破坏有一定的相关性.RNA杂交分析结果显示:2b蛋白的致病性与CMV子代RNA在寄主体内的积累量有关,不表达2b蛋白使得CMV基因组RNA1和RNA2含量显著下降,其亚基因组RNA4(编码CP蛋白)含量降低尤为显著.
- 陈斐斐杜志游刘歆谢礼陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒光合速率叶绿体结构
- MicroRNA靶向病毒携带的microRNA模拟靶序列对病毒的抑制作用被引量：2
- 2017年
- Micro RNA模拟靶序列(target mimic,TM)通过竞争性结合miRNA,从而干扰miRNA对靶标m RNA的调控.我们前期工作发现:以黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)作为载体在植物体内表达TM序列有效地抑制了miRNA的活性或稳定性,从而消减了miRNA对靶基因的调控.但是,miRNA与CMV携带的TM序列的结合在一定程度上抑制了病毒的积累.研究分析了miRNA靶向病毒携带的TM序列对病毒抑制作用的内在原因.a.通过RNA印迹分析CMV携带不同miRNA TM序列对病毒积累的影响,进一步明确miRNA靶向病毒携带的TM序列对病毒的抑制作用;b.利用GFP作为报告基因,通过荧光显微镜、蛋白质印迹以及RNA印迹分析TM序列对重组病毒积累的影响;c.以GFP作为报告基因,利用荧光显微镜观察和免疫印迹方法分析模拟靶序列对GFP翻译的影响;d.利用CMV病毒的反式复制系统分析miRNA模拟靶序列对病毒负链RNA合成的影响.结果表明,多种植物内源的miRNA靶向CMV基因组携带的miRNA TM序列,在不同程度上抑制了病毒的积累,miRNA与其TM序列的结合抑制GFP蛋白的翻译和负链的合成.植物内源的miRNA通过与病毒基因组携带的miRNA模拟靶序列结合,通过抑制病毒蛋白的翻译以及病毒负链RNA的合成,从而降低了病毒的积累水平.基于该论文的研究结果有可能建立一种抗病毒的新方法.
- 王妹妹陈文虎廖乾生杜志游
- 关键词：黄瓜花叶病毒MICRORNA
- 黄瓜花叶病毒2b蛋白介导病毒在寄主体内的适应性选择
- 病毒适应性是直接评价病毒在寄主体内的繁殖或复制能力的指标,是病毒与寄主相互作用的复杂过程。文献报道 HIV 的适应能力与其致病性存在一定的相关性。病毒的致病性很大程度上由病毒编码的致病因子决定。黄瓜花叶病毒（Cucumb...
- 陈斐斐杜志游曾蓉陈燕飞陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒适应性
- 文献传递
- 一种从植物微量组织中提取RNA病毒核酸的方法
- 本发明公开了一种从植物微量组织中提取RNA病毒核酸的方法，依次包括以下步骤：1)将被病毒侵染的植物寄主组织，按照0.05－0.2克/100μl的比例在预冷的病毒粒子保护性缓冲溶液中研磨至匀浆，病毒粒子保护性缓冲溶液的pH...
- 陈集双杜志游竺锡武王镨陈绍宁
- 文献传递
- 利用烟草脆裂病毒同时表达两种外源蛋白的载体构建法
- 本发明公开了一种同时非融合表达两个外源蛋白载体pTRV2e<Sup>3</Sup>的构建方法：以TRV基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料，采用病毒基因缺失策略构建包含TRV的2b和2c基因启动子载体pTR...
- 廖乾生郭歌常发光赖家良杜志游
- 黄瓜花叶病毒基因沉默载体的效率和稳定性分析被引量：3
- 2017年
- 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)已被广泛应用于植物基因的功能研究。试验以八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)作为指示基因,在本生烟体内分析黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)作为VIGS载体对植物内源PDS mRNA的沉默效率。采用分子克隆的方法,将FnyCMV 2b ORF替换为不同长度的PDS序列,并分析了其在本生烟植物上诱导的PDS沉默效率。结果表明,该重组病毒能诱导上部系统叶的光漂白表型,且沉默效率与插入片段长度呈一定的正相关性,但在顶端新生叶中均不引起明显的光漂白现象,过长的片段插入(≥518 nt)影响病毒基因组的遗传稳定性,导致插入片段的部分缺失。CMV作为VIGS载体,最适合的插入片段约为350 nt。
- 向志丹张震霄李超杜志游
- 关键词：黄瓜花叶病毒八氢番茄红素脱氢酶
