沈芸竹
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南京大学医学院临床学院更多>>
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- CpG甲基转移酶诱导紧密连接蛋白7和8基因表达下调对人结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响
- 2013年
- 目的探讨CpG甲基转移酶M．SssI对人结肠癌HT-29细胞中紧密连接蛋白7（claudin-7）和claudin-8表达的调节作用，及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法以50U／ml的M．SssI处理HT-29细胞24h（过甲基化组），采用重亚硫酸盐测序法检测claudin-7和claudin-8基因启动子区域CpG岛的甲基化状态，实时荧光定量PCR法检测claudin-8和claudin-8mRNA的表达，细胞免疫荧光技术和Westernblot法检测claudin-7和claudin-8蛋白的表达，Hoechst33342荧光染色法和流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HT-29细胞的增殖。同时设对照组（以2山PBS处理HT-29细胞）和5-Azacytidine组（以10I．t,moL／L5-Azaeytidine处理HT-29细胞）。结果过甲基化组claudin-7和claudin-8靶序列中发生甲基化的CpG胞嘧啶数目分别为25和10个，对照组分别为9和5个，5-Azacytidine组分别为0和3个。过甲基化组claudin-7和chudin-8 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组（均P〈0．05），而5-Azacyfidine组ciaudin-7和claudin-8mRNA和蛋白的表达均明显高于对照组（均P〈0．05）。Hoechst33342荧光染色结果显示，对照组和5-Azacytidine组的HT-29细胞均呈均匀蓝色荧光，细胞呈圆形，大小一致，无明显差异；而过甲基化组HT-29细胞呈高度白色荧光的凋亡细胞明显增多。流式细胞术检测结果显示，过甲基化组HT-29细胞的早期凋亡率比对照组增加84．7％（P=0．002）。MTr法检测结果显示，过甲基化组HT-29细胞的生长速度较对照组缓慢（P=0．002），HT-29细胞的增殖抑制率为32．1％；5-Azacytidine组HT-29细胞的增殖水平与对照组相似（P=0．084）。结论CpG甲基转移酶可以通过上调claudin-7和claudin-8基因启动子区的甲基化程度，下调HT-29细胞中claudin-8和elaudin-8mRNA和蛋白的表达，从而诱导细胞产生凋亡，并抑制其增殖。
- 王文辉汪芳裕魏娟沈芸竹刘畅舒小闯
- 关键词：HT-29细胞紧密连接蛋白
- CpG甲基转移酶诱导人结肠癌细胞凋亡的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的紧密连接蛋白(claudin)-7在结肠癌中表达上调,并与肿瘤的发生转移密切相关。文中探讨CpG甲基转移酶(CpG methyltransferase)又称M.SssI在体外对人结肠癌细胞HT-29细胞的凋亡诱导和增殖的抑制作用及对紧密连接蛋白-7表达的影响。方法分别用50U/ml M.SssI为过甲基化组,10μmol/L氮杂胞苷(5-azacytidine)为甲基化酶抑制组干预培养HT-29细胞,只加PBS为对照组。24 h后用流式细胞术观察3组细胞的凋亡情况。应用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测各组细胞的增殖能力。用细胞免疫荧光技术观察紧密连接蛋白-7的细胞学定位和表达程度在3组细胞中的差异。结果过甲基化组细胞早期凋亡率明显高于PBS对照组,P<0.05,而甲基化酶抑制组早期凋亡率低于对照组,差异无统计学意义,P>0.05。M.SssI显著抑制HT-29细胞增殖,P<0.05,抑制率达32.1%,而甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷可促进细胞增殖,但与对照组比较差异无统计学意义,P>0.05。与对照组和甲基化酶抑制组相比,紧密连接蛋白-7在过甲基化组表达明显下降,P<0.05,而5-氮杂胞苷组中紧密连接蛋白-7的表达量较对照组表达明显增强,P<0.05。结论CpG甲基转移酶可诱导HT-29细胞的凋亡、抑制增殖,可能与CpG甲基转移酶促使紧密连接蛋白-7基因启动子发生过甲基化,导致相应蛋白表达下降有关。
- 王文辉汪芳裕沈芸竹王颖超袁俊芳
- 关键词：HT-29细胞细胞凋亡
