王秋香
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 供职机构：兰州医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：甘肃省应用技术研究与开发专项计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人PKM<sub>2</sub>基因克隆、表达及蛋白纯化
- 目的构建人丙酮酸激酶基因PKM2(M2-type pyruvate kinse)的原核表达质粒pET30a(+)-PKM2,在大肠杆菌DH5α中进行基因扩增,导入大肠杆菌BL21中进行人丙酮酸激酶基因PKM2融合蛋白表达...
- 王秋香
- 关键词：克隆纯化
- 人ENO1基因的克隆及其重组逆病毒载体ENO1-pBABE-Puro的构建
- 2014年
- 目的构建含人烯醇化酶1(ENO1)目的基因的重组逆转录病毒载体。方法从人癌细胞中提取总RNA合成cDNA,PCR扩增目的基因ENO1,用sal1和BamH1双酶切ENO1及pbabe质粒,然后用连接酶将ENO1插入pbabe中,最后将重组质粒转化感受态E.coli DH 5α大肠杆菌,提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序。结果重组逆转录病毒载体ENO1-pBABE-Puro测序结果与GenBank上的序列完全一致,克隆的目的基因已经正确插入到逆转录病毒载体pBABE-Puro中。结论成功构建了含有ENO1目的基因的重组逆转录病毒载体,为进一步观察ENO1在肿瘤发生、发展中的作用及与宫颈癌细胞化疗敏感性的相关性做好准备。
- 李海红王秋香王海琳刘会玲祝秉东王千千朱晓艳
- 关键词：PCR质粒构建逆转录病毒载体宫颈癌
- 人PKM_2基因克隆、表达及纯化的研究
- 2013年
- 目的:构建人PKM2(M2-type pyruvate kinase)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达,镍离子柱亲和层析法纯化融合蛋白。方法:用PCR方法从宫颈癌Hela细胞全基因组中扩增出目的基因PKM2,通过克隆载体pET30a(+)构建质粒载体pET30a(+)-PKM2。经双酶切和DNA测序证实正确后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化。结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果和报道一致。经SDS-PAGE分析,纯化后的蛋白约在58KDa位,条带单一,无杂带出现。结论:成功表达纯化了PKM2融合蛋白,为肿瘤疫苗研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础。
- 王秋香刘会玲祝秉东李海红王千千王海琳
- 关键词：克隆纯化
- 人PKM2基因克隆、表达及蛋白纯化
- 目的构建人丙酮酸激酶基因PKM2(M2-type pyruvate kinse)的原核表达质粒pET30a(+)-PKM2,在大肠杆菌DH5α中进行基因扩增,导入大肠杆菌BL21中进行人丙酮酸激酶基因PKM2融合蛋白表达...
- 王秋香
- 关键词：克隆纯化
- 文献传递
