王越
- 作品数：16 被引量：44H指数：3
- 供职机构：沈阳药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 含有α-氨基醇片段的2H-1,4-苯并噁嗪类化合物的合成研究被引量：1
- 2019年
- 目的合成含有α-氨基醇片段的2H-1,4-苯并噁嗪类化合物。方法以邻硝基苯酚类化合物为原料,经与2-溴代羧酸酯的Williamson醚合成、还原硝基成氨基、分子内酯胺解关环酰基化、LiBEt3H还原得到目标化合物。结果与结论合成了9个α-氨基醇型2H-1,4-苯并噁嗪类化合物,其结构经1H-NMR和MS谱表征。该合成方法适合2位无取代或小结构取代的该类型化合物的合成。
- 解歆宇耿小惠鲍莹刘建宇刘依林王越王斌梁伊静杨辰许永男
- DC-SIGN真核表达载体的构建及其稳定转染BHK21细胞系的建立被引量：3
- 2010年
- 目的构建DC-SIGN分子真核表达载体,获得可稳定表达DC-SIGN分子的BHK21细胞系。方法以pUNO-hDC-SIGN1Aa质粒为模板,通过PCR方法扩增人DC-SIGN基因,经过NotI和BamHI双酶切之后,将其克隆入真核表达载体pIRES-neo,构建真核表达载体pIRES-neo-DC-SIGN,以NotI和BamHI双酶切以及测序验证重组质粒的正确性。将重组质粒以Lipo-fectamineTM2000转染到BHK21细胞,通过G418及有限稀释法进行阳性克隆的筛选,建立稳定表达DC-SIGN分子的BHK21细胞系,利用流式细胞仪、Western blotting及免疫荧光法检测DC-SIGN分子的表达。结果双酶切鉴定证明DC-SIGN基因已经成功克隆入真核表达载体pIRES-neo中,测序结果表明DC-SIGN基因与原序列一致。pIRES-neo-DC-SIGN转染BHK21细胞后,获得了稳定表达DC-SIGN分子的细胞系。流式细胞仪检测结果显示,阳性克隆中DC-SIGN分子的表达率为85.42%。免疫荧光结果显示,DC-SIGN分子主要表达于细胞膜表面。Western blotting能检测到DC-SIGN蛋白表达的特异条带。结论成功构建了稳定、高效表达DC-SIGN分子的BHK21细胞系,为后续DC靶向性疫苗研究奠定了基础。
- 王宇阎瑾琦张亮王越于继云
- 关键词：树突细胞
- 大鼠CTLA4-FasL融合基因的克隆、表达及体外生物活性研究被引量：1
- 2011年
- 目的表达并纯化CTLA4-FasL重组融合蛋白,鉴定其体外生物活性,为今后将该重组基因用于真核或者病毒载体递送系统的体内研究做准备。方法用RT-PCR方法从大鼠脾细胞中钓取CTLA4和FasL胞外区基因,搭建二者融合的重组基因,以pGEX-6P-1载体表达和纯化融合蛋白;去除GST标签,获得的目的蛋白经体外流式检测分析与细胞表面的相应配体B7和受体Fas分子的结合;CCK8检测系统分析其抑制T淋巴细胞的增殖作用。结果与结论成功调取了目的基因,获得并纯化了CTLA4-FasL目的蛋白,该蛋白既可与细胞表面的B7配体结合,又可与细胞表面的Fas受体结合,并能明显抑制T淋巴细胞的增殖,为今后动物体内研究奠定了基础。
- 张瑾王博王越汪习阎瑾琦徐元基于继云张巍
- 关键词：CTLA4FASL克隆生物活性
- α-1，6-甘露糖转移酶基因缺陷的毕赤酵母菌株的构建及应用
- 酵母表达系统已经被广泛应用于多种重组蛋白的表达。酵母对蛋白的糖基化修饰过程不同于哺乳动物，其特点为产生高甘露糖型糖基且易发生过度糖基化。本研究是毕赤酵母糖基化改造工作中的一个重要组成部分。α-1，6-甘露糖转移酶(OCH...
- 王越
- 关键词：毕赤酵母基因敲除生化药理学
- 文献传递
- 人hCGβ真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立被引量：2
- 2010年
- 目的：构建人hCGβ真核表达载体，稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，建立稳定表达人hCGβ的小鼠黑色素瘤细胞系。方法：采用PCR方法扩增出人hCGβ全长基因的cDNA编码区序列，利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES—neo中，并加入酶切位点和6×His标签，得到重组表达质粒pIRES—neo—hCGβ-（His）6。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，经G418加压筛选出阳性克隆。RT—PCR、Western blot及免疫荧光检测人hCGβ在B16细胞中的表达。结果：经限制性内切酶鉴定及序列分析，pIRES—neo—hCGβ一（His）6重组体构建正确，最终建立的表达人hCGβ基因的B16细胞系阳性率高于90％。结论：成功构建了真核表达载体plRES—neo—hCGβ-（His）6，建立的稳定转染人hCGβ小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达hCGβ基因。该稳定转染细胞系的建立为进一步研究人hCGβ抗肿瘤基因疫苗的功能提供了良好的实验基础，为hCGβ在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。
- 张亮王宇江乐阎瑾琦王越胡明明于继云
- 关键词：HCGΒ稳定转染小鼠黑色素瘤细胞肿瘤免疫治疗
- LINE-1编码蛋白L1-ORF1的原核表达纯化和多克隆抗体制备被引量：3
- 2010年
- 目的:制备具有肿瘤组织特异性表达的L1-ORF1蛋白多克隆抗体并进行初步应用研究。方法:采取基因工程表达方法制备L1-ORF1蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗体效价,Western blot和细胞免疫荧光方法检测抗体特异性,免疫检测验证其识别肿瘤细胞内L1-ORF1蛋白的特异性。结果:制备的抗L1-ORF1蛋白多克隆抗体具有很高的敏感性与特异性,免疫学检测表明该抗体不仅能检测出正常细胞中瞬时表达的L1-ORF1蛋白,而且可检测出肿瘤细胞中天然表达的L1-ORF1蛋白。结论:制备的多克隆抗体具有较高的敏感性与特异性,为以后该抗体的进一步应用奠定了基础。
- 胡明明朱运峰王越王宇张亮高旭东董金凯于继云
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体间接免疫荧光
- 可复制型抗肿瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB的构建及体内外表达被引量：5
- 2011年
- 目的构建以塞姆利基森林病毒复制子载体为基础的可复制型抗肿瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB,验证其在人胚肾293T细胞及免疫小鼠肌肉组织内的表达情况。方法首先用NheI酶切既往构建的pVAX1-2PFcGB重组质粒,补平酶切后的粘末端,然后再用限制性内切酶BssHII继续酶切该线性化质粒,补平粘末端后即获得含有编码Survivin及hCGβ-CTP37肿瘤抗原的融合基因片段2PFcGB,接着利用DNA重组技术将该片段克隆入基于塞姆利基森林病毒复制子载体改造的PSCK载体,筛选阳性重组质粒。接着,利用阳离子脂质体介导法将其瞬时转染入人胚肾293T细胞,利用流式细胞术及免疫荧光法检测融合抗原在293T细胞中的表达;利用电脉冲基因导入仪将该重组质粒递送至BALB/C小鼠股四头肌,利用免疫组化法验证肿瘤抗原在小鼠体内的表达。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示酶切片段大小与预期一致,流式细胞术检测该重组质粒瞬时转染的293T细胞,可见大量的阳性荧光细胞,其IRES序列上游融合肿瘤抗原分子阳性表达率为5.70%,下游佐剂分子阳性表达率为19.75%;同时,利用两种肿瘤抗原特异抗体在免疫小鼠股四头肌组织切片上均检测到了相应表达。结论成功构建了可复制型抗肿瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB,该重组质粒在体内外均能高效表达外源肿瘤抗原及佐剂分子,这些结果为该抗肿瘤DNA疫苗进一步的抑瘤活性及免疫学作用机制的研究奠定了坚实的实验基础。
- 张亮阎瑾琦王越肖毅高昆董金凯王博于继云
- 关键词：DNA疫苗
- 重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在毕赤酵母中的表达及活性分析被引量：3
- 2008年
- 目的:利用毕赤酵母野生型菌株GS115(his4)和突变型菌株GJK01(ura3,ade1,arg4,his4,och1)表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF),并对其活性及糖基修饰情况进行比较。方法:用PCR技术扩增目的基因,引入XhoⅠ、NotⅠ双酶切位点,构建pPIC9-hGM-CSF表达载体,电击转化毕赤酵母GS115和GJK01感受态细胞,得到工程菌;经甲醇诱导,对其表达产物进行糖基分析和生物学活性分析。结果:hGM-CSF在野生型菌株GS115和突变型菌株GJK01中均得到表达,其中野生菌表达的为过度糖基化的糖蛋白,而突变型菌株表达的为低糖化的糖蛋白,且二者均可刺激TF-1细胞的生长,比活性分别为9.79×105和2.21×105U/mL。结论:利用酵母工程菌表达了低糖化的重组hGM-CSF,为其药物研究提供了新的思路,也为酵母的糖基工程改造提供了良好的糖蛋白模型。
- 宋淼刘波王越刘党生吴军
- 关键词：毕赤酵母N-糖基化生物活性
- α-1,6-甘露糖转移酶基因敲除的毕赤酵母菌株构建及其用于融合蛋白HSA/GM-CSF表达的研究被引量：19
- 2007年
- 酵母对蛋白的糖基化修饰过程不同于哺乳动物,其特点为产生高甘露糖型糖基且易发生过度糖基化。本研究通过两步基因重组敲除目标基因的方法成功敲除了毕赤酵母中的α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)基因,获得了och1敲除的菌株。以此为基础,构建了高效表达人血清白蛋白与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白(HSA/GM-CSF)的工程酵母,与野生型毕赤酵母表达的过度糖基化HSA/GM-CSF不同,och1敲除菌表达的该融合蛋白糖基化程度明显降低,这为该融合蛋白的开发提供了重要基础。och1敲除菌株的构建不仅提供了一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统,而且为进一步的酵母糖基工程改造提供了基础。
- 王越巩新唱韶红刘波宋淼黄海华吴军
- 关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子人血清白蛋白毕赤酵母
- 一种广谱抗肿瘤双质粒可复制型DNA疫苗
- 本发明公开了一种广谱抗肿瘤双质粒可复制型DNA疫苗，其活性成分包括：以复制子DNA疫苗载体pSVK为出发载体构建的携带肿瘤抗原复合基因的抗肿瘤抗原复制子DNA疫苗pSVK-CAVA，以复制子DNA疫苗载体pSVK为出发载...
- 于继云阎瑾琦王伟张亮徐元基张巍贾锐王越王宇
- 文献传递
