王金蓉
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院生物治疗国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- hNET基因重组腺病毒载体构建和体外表达被引量：4
- 2008年
- 目的以复制缺陷的腺病毒为载体,用细菌内同源重组法构建含有人的去甲肾上腺素转运子(human neurotransmitter transporter,hNET)基因的腺病毒载体。方法利用限制性内切酶KpnⅠ+XbaⅠ从pCMV5质粒中切下目的基因hNET,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,形成重组穿梭质粒pAdtrack-CMV-hNET,PmeⅠ酶切线性化后,与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的基因的重组体质粒Ad-hNET,PacⅠ酶切后用脂质体Lipofectamine2000转染HEK293细胞,包装成重组体腺病毒。采用PCR技术和Western Blotting对重组体腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中带有绿色荧光蛋白报告基因检测表达,经过扩增和纯化,测定病毒滴度。结果测序结果证明hNET序列的正确,PCR、PacⅠ酶切电泳和Western Blotting证实腺病毒重组质粒Ad-hNET构建成功。扩增纯化后测定重组病毒Ad-hNET的滴度为1.2×1010pfu/mL。结论成功构建了能表达hNET基因的重组腺病毒载体,为肿瘤的靶向治疗提供前期的研究工作。
- 贾志云欧晓红魏海燕邓候富黄蕤王金蓉张仕琼
- 关键词：腺病毒载体同源重组
- 紫外线和过氧乙酸对腺病毒灭活效果的观察被引量：1
- 2009年
- 目的:寻找对腺病毒灭活的有效方法,来预防大规模生产腺病毒时所致的生产细胞的污染。方法:采用紫外线照射和不同浓度过氧乙酸的灭活方法灭活腺病毒,并将处理后的病毒加入到正常人胚肾293细胞中培养,观察细胞是否出现病变作为灭活效果判断标准。结果:我们发现一定强度紫外线照射至少2 h以上才能完全灭活腺病毒,过氧乙酸达到1%的浓度和至少作用30 min,才能将完全病毒灭活。结论:紫外线照射2 h以上能有效灭活腺病毒,我们可以用于操作台的腺病毒灭活;1%浓度的过氧乙酸作用30 min以上能有效将腺病毒灭活,我们可以运用于实验室大空间的腺病毒灭活。
- 田箐米绪华刘文涛王金蓉张仕琼石刚傅艳平周红魏海燕范春元
- 关键词：紫外线过氧乙酸腺病毒灭活
