王金鹏
- 作品数：7 被引量：95H指数：3
- 供职机构：苏州大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人脑胶质瘤干细胞SHG-44s的克隆及初步鉴定被引量：52
- 2005年
- 目的:探讨人脑胶质瘤体外细胞系中存在肿瘤干细胞的可能性。方法:将SHG44细胞系和SHG44-9细胞株,分别应用含血清培养基(DMEM+10%FCS)和无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF、LIF和EGF)培养。用CD133免疫磁珠分离干细胞、Hoechst33342和NESTIN流式细胞仪、Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色检测肿瘤干细胞及其分化细胞。结果:CD133磁珠分离得到的干细胞的比例:在血清组SHG44和SHG44-9分别为0.021%和0.035%;无血清组分别为1.2%和2.3%。而Hoechst33342和CD133标记后流式细胞仪检测干细胞比例:血清组中SHG44、SHG44-9分别为1.5%、0.37%;无血清组分别为16.4%和29.1%。并且这些细胞能够增殖和分化成神经元和胶质细胞。而Nestin标记后SHG44、SHG44-9中分别有51.05%、77.53%阳性细胞。结论:体外长期传代培养的人脑胶质瘤细胞系中存在肿瘤干细胞SHG44s,CD133磁珠和Hoechst33342流式细胞仪分离和检测胶质瘤干细胞是行之有效的方法,而Nestin+细胞是干细胞分化后的祖细胞或前体细胞,不能作为分离和检测干细胞特异性标记物使用。
- 王金鹏黄强张全斌董军朱玉德王爱东兰青
- 关键词：肿瘤干细胞胶质瘤流式细胞仪免疫细胞化学
- 人脑胶质瘤干细胞初步研究被引量：33
- 2007年
- 目的 从人脑胶质瘤体外细胞系和胶质瘤组织中分离、鉴定肿瘤干细胞，为进一步研究其生物学特性奠定基础。方法 将人胶质瘤SHG44细胞和手术标本制成的单细胞，分别用含血清培养基（DMEM＋10％FBS）和无血清培养基（DMEM／F12，添加bFGF、LIF和EGF）培养。用CD133免疫磁珠筛选，流式细胞仪和免疫荧光共聚焦显微镜检测干细胞、祖细胞和分化细胞特异性标志物。结果 SHG44细胞培养1周，用CD133磁珠分离得到的CD133^＋细胞的比例：血清组为0．021％，无血清组为1．2％。流式细胞仪检测：（1）Hoeehst33342一细胞比例：血清组为1．5％，无血清组为16．4％；（2）nestin^＋细胞比例：血清组为7．2％，无血清组为51．05％；（3）免疫磁珠分离的CD133^＋细胞再用流式细胞仪测得的CD133^＋细胞为83．02％，CD133^＋细胞群中有3．32％的CD133^＋细胞。标本源肿瘤细胞在无血清条件下培养两天后CD133^＋磁珠分离CD133^＋细胞比例为4％。CD133^＋细胞在分化不同阶段共表达或分别表达祖细胞标志物nestin、神经元和胶质细胞特异性标志蛋白MAP2和GFAP。结论 在胶质瘤细胞系和胶质瘤组织中均存在CD133^＋的脑肿瘤干细胞，具有自我更新和多向分化潜能、在无血清培养下细胞球体中CD133^＋细胞仍占少数，而nestin^＋细胞占多数，可作为进一步研究脑肿瘤干细胞生物学特性的实验材料在相关领域中的应用。
- 朱玉德季晓燕黄强张全斌董军王金鹏王爱东兰青
- 关键词：肿瘤干细胞神经胶质瘤免疫细胞化学体外研究
- RNA干扰技术与胶质瘤相关分子研究被引量：2
- 2004年
- 王金鹏黄强
- 关键词：RNA双链遗传学技术神经胶质瘤
- 从人脑胶质瘤组织中克隆肿瘤干细胞和长期培养的初步研究
- 目的:我们已在体外培养的胶质瘤细胞系中克隆到了肿瘤干细胞,为了探讨这类细胞是否在胶质瘤组织中也存在而进行本研究。方法:采集8例人脑胶质瘤手术标本,原代培养形成肿瘤球,经免疫磁珠分离获取CD133+细胞,用有限稀释法在含细...
- 黄强王金鹏朱玉德张全斌董军王爱东兰青
- 关键词：肿瘤干细胞胶质瘤免疫细胞化学
- 文献传递
- survivin基因RNAi逆转录病毒载体设计与构建方法实验研究被引量：9
- 2005年
- 目的 设计和构建survivin基因的表达si RNA逆转录病毒重组载体,探讨胶质瘤分子病因及用于基因治疗的可行性。方法 利用在线软件si Direct设计干扰survivin基因靶序列,合成回文DNA序列退火后克隆至线性化p SUPER质粒载体,重组质粒载体双酶切电泳鉴定和测序分析,再转染phoenix细胞产生病毒转染低分化SHG4 4 - 9胶质瘤细胞株。利用NIH3T3细胞测定病毒滴度。Western blot测定转染后SHG4 4 - 9细胞survivin表达量。结果 p SU PER表达si RNA重组质粒载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析,证实插入6 0 bp序列与原序列一致,位置正确。测定p SUPER.retro- S1、p SU PER.retro- S2病毒滴度值分别为5 .5×10 5CFU/ m l和5 .75×10 5CFU/ ml,干扰效率分别为70 .5 %和接近10 0 .0 %。结论 survivin基因的表达si RNA逆转录病毒重组载体的构建成功,不但为研究胶质瘤分子病因和基因治疗提供了有用工具,而且也为研究高表达survivin的其它肿瘤构建了新的平台。
- 程序曲王金鹏黄强王爱东董军兰青
- 关键词：RNAISURVIVIN逆转录病毒载体胶质瘤
- 人脑胶质瘤干细胞初步研究
- 目的：从人脑胶质瘤体外细胞系和胶质瘤组织中分离鉴定肿瘤干细胞，为进一步研究其生物学特性奠基。
方法：1、将SHG44细胞系和SHG44-9细胞株，分别应用含血清培养基(DMEM+10％FCS)和无血清培养基(...
- 王金鹏
- 关键词：肿瘤干细胞胶质瘤流式细胞仪免疫细胞化学诱导分化
- 文献传递
- Cdc2基因敲低逆转录病毒载体设计与构建方法被引量：2
- 2005年
- 目的设计和构建cdc2基因敲低的表达siRNA的逆转录病毒重组载体。方法利用在线软件siRNASelectionProgram和siDirect设计干扰cdc2基因靶序列,合成回文DNA序列,退火后克隆至线性化pSUPER质粒载体,重组质粒载体扩增、抽提后行双酶切电泳鉴定和测序分析,再转染phoenix细胞,产生逆转录病毒,并利用NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果pSUPER表达siRNA重组质粒载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析,证实插入的60bp序列与原序列一致,位置正确。pSUPER.retro-C1、pSUPER.retro-C2病毒滴度值分别为4.25×105CFU/ml和6.00×105CFU/ml。结论cdc2基因表达siRNA逆转录病毒重组载体构建成功,可为研究胶质瘤分子病因学提供有用工具。
- 程序曲王金鹏黄强王爱东董军兰青
- 关键词：RNA干扰基因逆转录病毒载体基因沉默神经胶质瘤
