田媛
- 作品数：10 被引量：20H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 与抗辐射性相关蛋白AA12相互作用蛋白的筛选被引量：1
- 2004年
- 将AA12基因克隆入酵母双杂交载体中,转化入酵母菌AH109,Western印迹检测其在酵母中的表达;将转化有AA12基因的酵母菌AH109培养再转化人前列腺cDNA文库质粒,检测报告基因的表达情况。Western印迹结果表明AA12可以在酵母菌AH109中表达。共转化子中有2个β-半乳糖苷酶活性分析和α-半乳糖苷酶活性分析结果为阳性的克隆,但测序结果为相同序列。本实验筛选到1个与AA12相互作用的蛋白,此结果为进一步研究新基因AA12的功能奠定了基础。
- 薛恒钢胡宝成刘爽田媛黄翠芬王亚
- 关键词：AAWESTERN印迹相互作用蛋白新基因酵母双杂交共转化
- AA12(LG21)可溶性表达研究及抗体制备被引量：7
- 2003年
- 用PCR技术从AA12基因上扩增出LG21(100～498bp)片段,并克隆到原核表达载体pET-28a(+)上;转化大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达研究,使其在大肠杆菌中能够可溶性表达,优化表达条件获得表达量比较高的LG21蛋白;用镍离子螯和柱(Ni-NTA)纯化LG21蛋白,获得纯度较高的蛋白。用纯蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,ELISA结果显示效价可达到1∶163840;Western结果表明该抗体可以与LG21蛋白特异结合;为进行免疫共沉淀实验,验证Chk1蛋白与AA12蛋白在体内的相互作用奠定了基础。
- 刘爽胡宝成绳纪坡田媛
- 关键词：多克隆抗体差异表达基因抗辐射性可溶性表达PCR技术
- Hus1(Hus1f)基因可溶性表达、蛋白纯化及抗体制备被引量：2
- 2005年
- 为进一步了解Hus1蛋白在细胞周期检查点信号传导通路中的功能 ,用RT PCR技术从NIH3T3细胞的总RNA中扩增出Hus1基因片段Hus1f(6 0 6～ 84 6bp) ,使其在大肠杆菌中呈可溶性表达 .用镍离子螯合柱 (Ni NTA)纯化Hus1f蛋白 ,获得纯度较高的蛋白 .用纯蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体 .ELISA结果显示效价达到 1∶6 40 0 .Western印迹结果表明 ,该抗体可以与Hus1蛋白特异结合 .通过免疫共沉淀实验发现 ,Hus1蛋白与Chk1蛋白之间存在相互作用 ,为进行信号转导通路的研究奠定了基础 .
- 刘爽田媛胡宝成黎舒佳
- 关键词：原核表达抗体制备
- 一种新的抗辐射性相关蛋白AA12和CHK1相互作用研究被引量：9
- 2003年
- 目的 :研究AA12蛋白与CHK1蛋白的相互作用。方法 :用在大肠杆菌中表达纯化的AA12 (LG2 1)蛋白制备多克隆抗体 ,Western印迹检测抗体的特异性 ;用自制的抗体在A1_5和B4细胞中进行了免疫共沉淀实验 ;同时将AA12与Chk1基因克隆入酵母双杂交载体中 ,将重组质粒导入酵母菌AH10 9中 ,检测报告基因的表达情况。结果 :Western印迹结果表明该抗体可以与AA12蛋白特异结合 ;并用免疫共沉淀实验验证了AA12蛋白与CHK1蛋白在哺乳动物细胞体内的相互作用。同时用酵母双杂交实验验证了AA12蛋白与CHK1蛋白在酵母体内的相互作用 ,β_半乳糖苷酶活性分析和α_半乳糖苷酶活性分析结果均为阳性。结论 :AA12蛋白和CHK1蛋白之间存在相互作用 ,此结果为进一步研究新基因AA12的功能奠定了基础。
- 胡宝成薛恒刚刘爽田媛黄翠芬王亚
- 关键词：AAL2相互作用免疫共沉淀酵母双杂交
- 前列腺癌细胞结合单链抗体的筛选、表达纯化及其功能初步研究
- 本研究旨在筛选出与人前列腺癌细胞结合特异性较高的抗体，以期有助于前列腺癌的早期诊断与低损伤性治疗。
首先用人前列腺癌细胞PC3、C4-2、DU145的膜蛋白混合物免疫BALB/c小鼠，从免疫鼠脾细胞中提取总RN...
- 田媛
- 关键词：前列腺癌肿瘤噬菌体单链抗体
- 文献传递
- 体内筛选技术在靶向治疗中的新进展被引量：1
- 2004年
- 用噬菌体展示技术进行体内筛选可以更好地模拟靶抗原的天然环境 ,以筛选到与活体内某些器官或组织有特异结合活性的肽或抗体。近年来利用该技术在动物体内的研究已取得了可喜的进展。综述了体内筛选技术在器官和组织血管靶向载体的筛选、基因治疗及绘制人类血管分子图谱方面的应用 ,并对其今后的研究发展方向进行了阐述。
- 田媛胡宝成
- 关键词：动物体内靶向治疗靶抗原基因治疗活体分子图谱
- CHK1相互作用蛋白的筛选被引量：1
- 2004年
- 将CHK1基因克隆入酵母双杂交载体中,转化入酵母菌AH109,将转化有CHK1基因的酵母菌AH109培养并再转化人前列腺cDNA文库质粒,检测报告基因的表达情况,筛选与CHK1相互作用的蛋白。共转化子中有4个β-半乳糖苷酶活性分析和α-半乳糖苷酶活性分析结果为阳性的克隆,但测序结果其中有2个克隆为相同序列。本实验筛选到3个与CHK1相互作用的蛋白,此结果为进一步研究与CHK1相互作用的蛋白奠定了基础。
- 薛恒钢胡宝成刘爽田媛黄翠芬
- 关键词：CHK1酵母双杂交蛋白基因克隆
- 肿瘤特异单链抗体库的构建及肿瘤血管特异性结合抗体的体内筛选被引量：2
- 2007年
- 目的:构建肿瘤组织特异的噬菌体呈现型单链抗体库,用噬菌体体内筛选与肿瘤血管特异性结合的单链抗体,为癌症的诊断和治疗奠定基础。方法:取食道癌、胃癌、脑癌、肺癌、脊髓瘤患者肿瘤组织,提取各肿瘤组织膜蛋白混合后免疫BALB/c小鼠,取鼠脾脏淋巴细胞提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因(VH和VL),经Linker连接形成ScFv基因片段,将ScFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB5E的连接产物转化大肠杆菌TG1,在辅助噬菌体M13KO7的作用下,获得重组噬菌体单链抗体库。以人宫颈癌HeLa细胞致瘤裸鼠为实验模型,用所构建的单链抗体库进行了4轮特异抗体的体内筛选。挑取了24个PCR鉴定为阳性的单链抗体做免疫组化分析,将在HeLa致瘤的组织切片上呈阳性染色、而在对照的肾组织切片上没有阳性染色的单链抗体进行序列测定。结果:选用7株不同的肿瘤细胞系建立裸鼠致瘤模型,以HeLa细胞致瘤裸鼠成瘤效果最好。用所构建的库容量为1.6×106的单链抗体库对肿瘤血管特异结合抗体进行体内筛选,得到1株单链抗体ScFv(VH-linker-VL),命名为ScFvH1。结论:成功构建肿瘤特异单链抗体库,并用此抗体库筛选到与肿瘤血管结合特异性较好的单链抗体,为肿瘤的早期诊断和治疗提供了一条新的技术路线。
- 秦玺田媛胡宝成薛建红
- 关键词：肿瘤血管单链抗体噬菌体展示
- 前列腺癌细胞结合单链抗体的克隆表达及其功能初步研究被引量：1
- 2006年
- 目的:在获得纯化的前列腺癌细胞结合单链抗体scFvP-9后,对其生物学功能进行初步探讨,为前列腺癌的诊断和治疗奠定基础。方法:利用MTT比色实验初步研究了scFvP-9对多种肿瘤细胞及正常肝细胞HL02的生物学作用,并建立人宫颈癌的裸鼠模型,进行了抑瘤实验。结果:scFvP-9不影响HL02细胞及恶性程度低的人前列腺癌细胞LNCaP的生长,但对人前列腺癌细胞PC3、人宫颈癌细胞HeLa、人肺癌细胞PLA801D均有生长抑制作用;scFvP-9在荷瘤模型体内也显示了较好的抑瘤效果,与对照组相比有显著性差别,且瘤周皮下给药组效果更为显著。结论:该抗体具有潜在的重要临床应用价值。
- 田媛秦玺胡宝成黄翠芬
- 关键词：前列腺癌细胞单链抗体肿瘤抑制
- 抗前列腺癌细胞特异抗体库的构建及特异结合抗体的筛选被引量：3
- 2005年
- 目的:获得前列腺癌的噬菌体呈现型单链抗体库,筛选与前列腺癌特异结合的抗体,为前列腺癌的诊断和治疗奠定基础。方法:用两种恶性程度较高的前列腺癌细胞PC3,DU145膜蛋白混合物免疫Balb/c小鼠。取脾脏提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因(VH和VL),经Linker连接形成ScFv基因片段,将ScFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB5E的连接产物转化大肠杆菌TG1。用辅助噬菌体M13K07进行超感染,获得重组噬菌体抗体。以恶性程度低的前列腺癌细胞LNCap为对照,用PC3细胞对重组噬菌体抗体库进行五轮筛选后,随机挑取克隆,经phage-ELISA筛选特异性结合PC3细胞的ScFv。结果:用所构建的库容量为3.5×106的单链抗体库筛选特异结合抗体,得到一个与PC3细胞特异结合的噬菌体-单链抗体。结论:本研究所构建的抗体库中可筛选到与前列腺癌细胞结合特异性较好的抗体,可用于前列腺癌的诊断和治疗中。
- 田媛秦玺胡宝成黄翠芬
- 关键词：噬菌体展示前列腺癌单链抗体库
