石文达
- 作品数：27 被引量：82H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体Sn和CD163 TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立
- 2012年
- 为建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)允许细胞表面的Sn和CD163受体的方法,本研究设计针对Sn和CD163基因的特异性引物和荧光探针,建立了检测PRRSV Sn和CD163受体的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法在检测101copies/μL～108copies/μL模板范围内具有良好的线性关系。标准曲线的相关系数r值均大于0.996,扩增效率分别为100%和107%;该检测方法对Sn和CD163的检测下限均为10拷贝,敏感性高;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均小于5%,具有良好的重复性。利用该方法对PRRSV感染肺泡巨噬细胞(PAM)72 h后Sn和CD163受体mRNA的转录水平进行了检测,结果表明Sn和CD163受体的转录水平显著上调。本研究为PRRSV病毒感染后两种主要受体变化趋势的研究提供了有效的检测方法。
- 韩梓峰刘永刚石文达王刚何玉利王淑杰刘鹤董建国武嘉男蔡雪辉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GD3株的分离鉴定及其分子特征被引量：1
- 2009年
- 2005年从广东发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征疑似病料中,分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),命名为GD3株。采用RT-PCR、IFA对分离毒株进行鉴定,并在Marc-145细胞上完成了病毒的增殖和理化性质的鉴定。应用RT-PCR方法扩增出GD3株的6条基因大片段,扩增产物克隆于pMD18-T载体鉴定后测序,同时应用RACE技术对GD3株的5'末端进行扩增和测序。结果表明GD3株基因组全长15425nt,包含个9开放阅读框,5'UTR长189nt,3'UTR长150nt。序列分析结果表明,GD3株在分子遗传演化上介于PRRSV变异毒株(HuN4株、JXA1株)和CH-1a之间,与HuN4和JXA1之间的相似性为97.1%和97.2%;与CH-1a的核苷酸相似性为94.9%。
- 马平蔡雪辉刘永刚石文达王淑杰王洪峰李成君张琪
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗株cDNA感染性克隆及其应用
- 本发明提出了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗株cDNA感染性克隆及其应用，公开了一种重组载体，其是通过反向遗传操作技术构建的我国猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗株CH1R的感染性克隆，包含猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗株CH-1R的...
- 翁长江蔡雪辉李江南王承宝刘永刚黄丽石文达
- 文献传递
- 东北地区猪群链球菌分离鉴定及流行病学调查分析被引量：11
- 2009年
- 为了解猪链球菌在东北地区正常猪群中的流行情况,对黑龙江、吉林、辽宁省等地无菌采集的2 204份鼻拭子接入含有1‰抗生素的链球菌液体选择培养基中,37℃静止培养24 h,挑取细菌培养物涂片,革兰氏染色后镜检,将镜检为革兰氏阳性的链球菌利用PCR方法进行猪链球菌种的鉴定,在此基础上再利用PCR方法进行猪链球菌1、2、7、9血清型的分型鉴定。结果显示,黑龙江、吉林、辽宁3省猪群链球菌的携带率分别为29%、27%、34%,东北地区分离得到猪链球菌共155株,其中1型猪链球菌7株,2型猪链球菌39株,7型猪链球菌4株,9型猪链球菌11株,其他型猪链球菌94株。
- 王淑杰雷连成徐敏孙长江李成君蔡雪辉刘永刚张琦刘狄萩石文达
- 关键词：猪链球菌流行病学调查
- 抗谷氨酸脱氢酶蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了谷氨酸脱氢酶蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明将链球菌GDH基因的抗原性和疏水性进行分析，去除信号肽和跨膜区域后设计一对引物对GDH基因进行克隆，以大肠杆菌成功表达了WC-SS7的GDH蛋白，将纯化的G...
- 王淑杰蔡雪辉徐敏武佳斌刘永刚石文达李丽琴徐明明荣福龙
- 文献传递
- 猪全血中IFN-γ、IL-2、TNF-αTaqMan定量RT-PCR方法的建立及对猪瘟疫苗的免疫评价被引量：1
- 2013年
- 为建立猪相关细胞因子的检测方法,本研究针对GenBank中猪IFN-γ、IL-2、TNF-α的基因设计特异性引物和荧光探针,建立了这3种细胞因子TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,建立的检测方法在101～109拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,相关系数R2均高达0.999。利用该方法对猪瘟(CSF)活疫苗进行细胞免疫评价,结果显示,CSF疫苗免疫组猪瘟病毒(CSFV)刺激细胞相对于空白对照细胞,IFN-γ、IL-2、TNF-αmRNA表达量在免疫后3 d～10 d之间均显著升高(p<0.05),而IFN-γ在14 d仍保持高水平表达;对照组CSFV刺激细胞和空白对照细胞的3种细胞因子表达量均无明显差异(p>0.05)。以上结果表明,该方法具有高度的特异性、敏感性和重复性,对不同疫苗的细胞免疫反应评价是可靠的。
- 汪志艳刘永刚王刚石文达武嘉男涂亚斌姜成刚何玉利韩梓峰李玉明王延群蔡雪辉
- 关键词：全血猪瘟活疫苗
- 猪链球菌7型强弱毒株SBP_bac_5差异表达蛋白的鉴定
- 2013年
- 前期研究表明细菌胞外溶质结合蛋白家族5(SBP_bac_5)基因在猪链球菌7型(S.suis 7)型强毒株WC0711中表达量高于弱毒株M13中,推测SBP_bac_5为S.suis 7型强弱毒株差异性表达蛋白。为进一步证实该结果,本研究采用real-time RT-PCR技术在基因水平检测S.suis 7型强弱毒株中SBP_bac_5 mRNA的表达量差异,结果显示,强毒株WC0711中SBP_bac_5的mRNA表达量为在弱毒株M13中的4.59倍。将SBP_bac_5的PCR产物克隆于pET-30a中,通过E.coli BL21诱导表达,纯化后的蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清检测S.suis强弱病毒株中SBP_bac_5的表达量差异。结果显示,重组蛋白获得高效表达,S.suis 7型强毒株WC0711中SBP_bac_5表达量是弱毒株M13的3.8倍。
- 金家民王淑杰高明明王延群李玉明汪志艳石文达刘鹤姜成刚张秀英蔡雪辉
- 关键词：猪链球菌强毒株弱毒株
- 一种基于16SrRNA基因检测猪嗜血支原体PCR方法的建立被引量：2
- 2013年
- 本试验目的是建立一种基于16SrRNA基因检测猪嗜血支原体的PCR方法。根据GenBank上猪嗜血支原体16S rRNA基因(ID:U88565)设计特异引物,对哈尔滨采集病料进行PCR并克隆pMD18-T,测序所扩增的片段为411bp,同源性分析表明,该序列与参考序列同源性97.57%。特异性和敏感性试验表明,所建立的PCR诊断方法对猪肺炎支原体、大肠杆菌、沙门菌、葡萄球菌无交叉反应;血液基因组DNA最小检出量为0.75fg/μL。该方法具有快速、特异、敏感等特点,为猪嗜血支原体病的快速诊断及流行病学调查提供了新的手段。
- 文辉强刘永刚石文达武嘉男姜成刚张交儿蔡雪辉
- 关键词：PCRRRNA基因
- 伪狂犬病病毒gE基因的表达及gE蛋白单克隆抗体的制备被引量：5
- 2007年
- 以猪伪狂犬病病毒(PRV)Min-A株pMD-gE质粒为模板,利用所合成的特异性引物进行PCR扩增,获得了1 000 bp的DNA片段,并将其克隆至表达载体pET-30a中,转化到大肠杆菌中进行了原核表达,对表达产物进行了抗原性分析;在此基础上,用纯化的gE蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选和鉴定了分泌抗gE蛋白单抗的杂交瘤细胞株。结果显示,原核表达的gE蛋白具有良好的抗原性,其分子质量为46 ku。筛选获得3株分泌抗gE蛋白单抗的杂交瘤细胞株,Western-blot和间接免疫荧光试验证实,所获得的3株单抗具有良好的特异免疫反应原性。3株单抗均为IgG1亚类,且轻链均为κ链。
- 王淑杰蔡雪辉刘永刚吴国军刘狄萩张琦马平李成君石文达
- 关键词：伪狂犬病病毒原核表达单克隆抗体
- 高致病性PRRSV HuN4株Nsp4的原核表达及其抗体水平检测被引量：2
- 2011年
- 为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western blot试验显示,Nsp4在大肠杆菌中获得较高水平的表达,并且具有良好的反应活性。利用该蛋白建立ELISA方法,检测PRRSV HuN4株感染仔猪的不同时间内的血清,并比较抗Nsp4,囊膜蛋白和M蛋白,N蛋白的抗体水平,结果表明Nsp4抗体升高的时间晚于囊膜蛋白和M蛋白、N蛋白出现的时间,同时抗体水平也低于其他蛋白。
- 董建国刘永刚石文达武嘉男王刚刘鹤徐明明荣福龙李丽琴田志军蔡雪辉
- 关键词：NSP4原核表达抗原性
