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秦伟: 作品数：13 被引量：26H指数：3; 供职机构：同济大学附属同济医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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低氧对Jurkat细胞低氧诱导因子-1α及其类泛素化的影响及意义被引量：3: 2010年; 目的探讨低氧条件下Jurkat细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）类泛素化的变化对其基因转录活性和蛋白稳定性的影响,以及对下游靶基因转录活性调控的影响和意义.方法氯化钴（CoCl2）化学缺氧法模拟肿瘤缺氧不同时间,分别用荧光定量PCR、Western blot法检测HIF-1α基因及蛋白稳定性的变化,类泛素-1（SUMO-1）、类泛素蛋酶-1（SENP-1）蛋白水平的表达,VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1和survivin等基因转录活性的变化.结果在缺氧诱导4、8、16、48、72 h后,HIF-1α基因转录活性分别为缺氧诱导前的（0.79 ±0.19）、（2.65±2.05）、（4.19±4.72）、（2.77±3.37）、（0.09±0.05）、（0.69±0.55）倍（P〉0.01）,而蛋白稳定性逐渐增高后减低（P〈0.01）.SEN-1蛋白的表达与SUMO-1蛋白表达呈相反趋势,前者逐渐增高后减低,而后者逐渐减低后增高（P〈0.01）.除survivin 基因外,VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1基因转录水平与HIF-1α蛋白稳定性相平行.结论缺氧引起SENP-1表达变化,通过减低HIF-1α蛋白类泛素化作用而影响HIF-1α稳定性,从而改变下游VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1等基因的转录活性而最终影响细胞牛物学过程.; 黄滨滨修冰陆惠娜秦伟梁爱斌; 关键词：低氧诱导因子-1Α 靶基因 JURKAT细胞

JAK2及其抑制剂与骨髓增殖性肿瘤的研究进展被引量：2: 2010年; 骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasms,MPNs）是一系或多系分化相对成熟的骨髓细胞克隆性增殖所致的一组肿瘤性疾病,包括真性红细胞增多症（polycythemia vera,PV）、原发性血小板增多症（essentialthrombocythemia，ET）和原发性骨髓纤维化（primarymyelofibrosis，MF）等多种疾病，各疾病之间可相互转化。; 秦伟梁爱斌傅建非; 关键词：骨髓增殖性疾病 JAK2

白血病细胞株K562中HIF1-α的表达及其对下游基因的影响被引量：2: 2010年; 目的探讨白血病细胞株K562中低氧诱导因子1-α(HIF-1α)表达的增加对下游靶基因的影响及意义。方法氯化钴(CoCl_2)做化学缺氧诱导剂,加入K562细胞培养基,分别培养0、4、8、16 h。Real-Time RT-PCR及Western印迹法分别检测HIF-1αmRNA和蛋白水平的表达。Real-Time RT-PCR检测不同时间HIF-1α下游靶基因VEGF、MDR1/MDR3、survivin、Bcl-2、Caspase-3、Bax等的表达。分析HIF-1α表达的变化对下游基因转录活性的影响和意义。结果随着CoCl_2作用时间的增加,K562细胞HIF-1αmRNA水平表达略有增加,但变化不大(P>0.05),蛋白水平增加明显。下游VEGF、MDR1/MDR3、survivin、Bcl-2转录活性增加(P<0.05),而Bax、Caspase-3表达先增加后减少。结论 CoCl_2主要增加K562细胞株HIF-1α蛋白的表达。HIF-1α蛋白使VEGF、MDR1/MDR3、survivin、Bcl-2等促肿瘤存活基因的转录活性增加,而最终减少了Caspase-3、Bax等促肿瘤细胞凋亡基因的表达。因此,HIF-1α可能是调控白血病进展的关键调节因子。; 黄滨滨修冰陆惠娜秦伟熊红梁爱斌; 关键词：K562 多药耐药基因 BAX

SOCS超甲基化与经典型慢性骨髓增殖性肿瘤的研究被引量：1: 2011年; 目的探讨细胞因子信号转导抑制蛋白（suppressor of cytokine signaling，SOCS）基因超甲基化在经典型骨髓增殖性肿瘤（MPD）中的临床作用及其机制。方法采用甲基化特异性PCR方法检测SOCS1、2、3基因CpG岛甲基化发生情况，直接测序法检测100例MPD患者JAK2V617F突变情况，用实时定量PCR方法检测SOCS1、2、3的mRNA表达情况。结果100例MPD患者中有27例（27％）存在SOCS1基因超甲基化，9例（9％）存在SOCS2基因超甲基化，34例（34％）存在SOCS3基因超甲基化。在100例MPN患者中，64例（64％）JAK2V617F突变阳性。MPD患者中SOCS1和SOCS3基因超甲基化组与未甲基化组相比，其SOCS1和SOCS3基因mRNA表达量明显减少（P〈0．05）；SOCS1和SOCS3基因JAK2V617F突变组与野生型组相比，其SOCS1和SOCS3基因mRNA表达量明显减少（P〈0．05）。结论MPD患者中存在JAK2V617F突变及SOCS基因超甲基化，且JAK2V617F突变和SOCS基因甲基化导致SOCSmRNA表达水平降低，SOCS超甲基化和JAK2V617F突变可改变JAK—STAT信号通路等的转录活性而最终影响疾病的发展，这些改变可能代表了一种潜在的治疗方向。; 秦伟李伶理陆惠娜黄滨滨修冰薄兰君高清梅张文君傅建非; 关键词：骨髓增殖性肿瘤聚合酶链反应

IL-21诱导SUDHL-4细胞凋亡的作用及其机制: 2012年; 目的探讨IL-21对弥漫大B淋巴瘤（DLBCL）细胞系SUDHL4细胞凋亡的影响及其相关机制。方法用不同浓度IL-21（终浓度1、10、100、1000ng／m1）处理SUDHL4细胞不同时间（24、48、72h），用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率，绘制细胞增殖抑制曲线，计算IC50值；用流式细胞术检测细胞凋亡；用Westernblot法检测IL-21处理后SUDHL-d细胞caspase-9、caspase-3、cleavedcaspase-3、Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax和c-myc蛋白表达。用RT-PCR法检测Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax、c-myc和Sur-vivin基因mRNA表达。结果IL-21可明显抑制SUDHL4细胞增殖，且呈时间-剂量依赖性，其48h半数抑制浓度（IC50）为140．9ng／ml。流式细胞术分析发现100ng／mlIL-21处理的SUDHL-4细胞48h凋亡率（AnnexinV-FITC^＋细胞率）明显增加[（19．7±2．3）％]，同时caspase-9、caspase-3、Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达减低，均呈时间依赖性。cleavedcaspase-3从48h开始出现明显的剪切带；Bax和c-myc蛋白表达明显增高，而Bid蛋白表达变化不明显。RT-PCR检测显示IL-21上调c-myc和Bax基因mRNA的表达，下调Bcl-2和Bcl-XL基因mRNA的表达，Bid和Survivin基因mRNA表达变化不明显。结论IL-21可抑制SUDHL-4细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用可能是通过c-myc和Bcl-2基因调节的线粒体途径实现。; 梁伟张文君高青梅秦伟陆惠娜黄滨滨修冰梁爱斌; 关键词：白细胞介素21 细胞凋亡

构建shRNA慢病毒载体抑制U937细胞株VEGFR-1基因的表达被引量：3: 2010年; 目的构建针对血管内皮生长因子受体1(vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR-1)基因的siRNA前体表达载体,鉴定其对U937细胞株VEGFR-1基因干扰效率。方法体外设计并合成针对VEGFR-1基因的慢病毒shRNA干扰载体,通过PCR及测序证实载体构建成功。将慢病毒颗粒以最适滴度转染人单核白血病细胞株U937,应用Real-Time PCR、Western印迹法检测抑制效率。结果构建的慢病毒载体的序列通过PCR、测序等鉴定,与设计序列相同。Real-Time PCR检测显示U937细胞干扰组VEGFR-1 mRNA表达率下降75.98%,Western印迹法显示U937细胞干扰组VEGFR-1蛋白表达量较空白载体对照组明显减少。结论构建的shRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制U937细胞株VEGFR-1基因的表达。; 修冰陈敬德黄滨滨陆惠娜秦伟梁爱斌; 关键词：血管内皮生长因子受体1 RNA干扰慢病毒 U937细胞系

2种CCK-8试剂最佳实验条件比较被引量：6: 2012年; 在细胞学实验中，MTT（噻唑蓝）比色法常用于细胞毒性、细胞活性和细胞增殖的检测。因MTT法具有简便、经济、安全等特点，而被广泛使用，但其操作较繁琐，需加入二甲基亚砜（DMSO）溶解甲腆颗粒，且往往因溶解不全而对实验结果造成影响，为克服MTT法的不足，近年来出现了另外一些检测试剂，如XTr试剂、MTS试剂，国外研发出了1种新型的检测方法CCK-8（cellcountingkit-8），其原理为活细胞线粒体脱氢酶转化的黄色结晶为高度水溶性，; 梁伟高青梅张文君秦伟陆惠娜黄滨滨梁爱斌; 关键词：CCK-8 细胞活性试剂比较

细胞因子信号转导抑制蛋白3与骨髓增殖性肿瘤关系的研究进展被引量：3: 2010年; 细胞因子信号转导抑制蛋白(suppressor of cytokine signaling,SOCS)是一类对细胞因子和生长相关因子信号转导通路起负性调节的蛋白家族,目前已发现20多个成员,其中SOCS3是该家族中研究最热、最为清楚的成员之一。近年来研究发现,骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPN)患者中存在SOCS3基因异常,提示其可能在MPN的发生、发展、转移过程中扮演重要角色。本文就SOCS3与MPN关系的研究进展进行综述,讨论的问题主要包括有:SOCS蛋白家族概况,SOCS3的结构,功能,表达与调控,以及COCS3与MPN的关系等。; 秦伟; 关键词：细胞因子信号传导骨髓增殖性疾病

YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及机制初探被引量：1: 2012年; 目的研究生存素（survivin）抑制剂YMl55对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及作用机制，为应用YMl55治疗淋巴瘤提供实验依据。方法培养滤泡淋巴瘤细胞株SUDHL-4至对数生长期，加入YMl55形成一系列浓度梯度：100、10…101、0rig／ml，培养24、48、72h后进行活细胞计数试剂盒（CCK）8实验，观察YMl55对其生长抑制效应，计算其细胞半数抑制药物浓度（IC50）。加入YMl55至培养瓶中使其药物浓度为1．g／ml，培养24、48、72h进行流式细胞术检测，膜联蛋白（Annexin）V一异硫氰酸荧光素（FITC）／碘化丙啶（PI）双染法观察细胞凋亡情况。选取不加药的对照组和加YMl55后24、48h的实验组细胞抽提总RNA，然后进行反转录PCR（RT．PCR）检测48h时抗凋亡基因bcl-2、bcl．xl、survivin和促凋亡基因bid、bax的mRNA的相对表达量，检测24h时survivinmRNA的相对表达量。同时抽提各个时间点的总蛋白用Western印迹技术检测survivin、半胱氨酸蛋白酶（caspase）9、活化的caspase-9、caspase-3和活化的caspase一3蛋白的表达量。结果YMl55对SUDHL-4具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性，24、48、72h的Ic，。分别为6．1、2．7、1．2ng／ml。用流式细胞仪分析发现细胞凋亡比例随时间的推移逐步增加（17．3％4-2．1％、35．7％-4-3．3％、54．6％±4．3％比2．1％-t-O．3％，均P〈0．05）；PCR结果显示YMl55作用后24和48h下调survivin基因mRNA的表达（0．72±0．02、0．56±0．01比1．00，均P〈0．05），但bcl．2家族基因表达变化不显著（P〉0．05）。Western印迹检测发现随着时间的推移，survivin、caspase．3蛋白的表达逐渐减低，caspase-9和活化的caspase-9蛋白表达没有明显变化，而活化的easpase-3表达逐渐增加。结论YMl55能够有效促进淋巴瘤SUDHL-4细胞株凋亡，其机制可能是由于survivin蛋白下调绕过caspase-9直接激活下游easpase-3，从而切�; 梁伟张文君高青梅秦伟陆惠娜黄滨滨修冰梁爱斌; 关键词：淋巴瘤细胞凋亡

SOCS1与经典型慢性骨髓增殖性肿瘤关系的研究: 2011年; 目的探讨细胞因子信号转导抑制蛋白(suppressorofcytokinesignaling,SOCS)在经典型骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPNs)中的临床作用及其机制。方法采用实时定量PCR检测SOCS1的表达情况,DNA直接测序法检测SOCS1基因突变,甲基化特异性PCR检测SOCS1甲基化发生情况,旨在研究SOCS1在MPNs患者发病机制中的作用,以期为该疾病的诊断和治疗探索新的途径。结果 100例MPNs患者中有37例(37%)存在SOCS1基因甲基化,44例polycythemia vera(PV)有15例(34%)存在SOCS1基因甲基化,48例essential thrombocythemia(ET)有19例(38%)存在SOCS1基因甲基化,8例primary myelofibrosis(MF)有3例(37.5%)存在SOCS1基因甲基化;对照组病例共173例患者中有21例(12%)存在SOCS1基因甲基化:93例Chronic myelocytic leukemia(CML)有15例(16%)存在SOCS1基因甲基化,30例myelodysplastic syndrome(MDS)有4例(13.3%)存在SOCS1基因甲基化,30例acute myeloblastic leukemia(AML)有2例(6.7%)存在SOCS1基因甲基化,20例健康志愿者未发现有SOCS1基因甲基化;MPNs患者中SOCS1基因甲基化组与正常对照组相比,其SOCS1基因的表达量明显减少(P<0.05),表明SOCS1基因甲基化可导致SOCS1基因基因表达降低;SOCS1甲基化患者的白细胞计数高于非甲基化患者(P<0.05),SOCS1甲基化的MPNs患者较非甲基化患者更易进展为典型MPNs,无甲基化患者未见外周血计数、年龄的相关性;SOCS1基因全序列测序未发现突变。结论 MPNs患者中存在SOCS1基因甲基化,且甲基化导致其基因表达降低,提示SOCS1基因甲基化对疾病发展有提示作用;SOCS1基因甲基化与MPNs患者年龄、外周血细胞计数相关;SOCS1超甲基化可激活JAK-STAT信号通路或伴JAK2突变,这些改变可能代表了一种潜在的治疗方向。; 秦伟陆惠娜黄滨滨修冰薄兰君傅建非; 关键词：骨髓增殖性疾病 RT-PCR 甲基化 PCR

秦伟

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