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应用PCR技术检测沙门氏菌被引量：43: 1999年; 参照文献报道的根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因片段所设计的引物序列，合成了１对长２５ｂｐ的引物。对沙门氏菌属Ａ～Ｆ各群中共１６株沙门氏标准菌株和其他１２株非沙门氏菌标准菌株进行ＤＮＡ抽提扩增，结果沙门氏菌ＰＣＲ产物都出现４９５ｂｐ的特异性ＤＮＡ扩增带，而非沙门氏菌均未出现扩增条带，证明这对引物具有沙门氏菌属特异性。选用ＨｉｎｄⅢ内切酶对ＰＣＲ产物直接进行酶切，紫外灯下可见２条电泳带，其长度（大片段长度为３１４ｂｐ，小片段为１８０ｂｐ）与目的基因序列相符合。用低融点琼脂糖对ＰＣＲ产物电泳回收、纯化，采用随机引物法以α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记探针，分别与沙门氏菌和非沙门氏菌靶ＤＮＡ进行Ｄｏｔｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，杂交后用普通Ｘ光胶片自显影，结果探针只与沙门氏菌ＤＮＡ杂交，并出现很强的杂交信号，而与非沙门氏菌不杂交，证实扩增产物是目的基因片段。以稀释的核酸分子量标准λＤＮＡ／ＨｉｎｄⅢ酶切片段作对照，将抽提的沙门氏菌ＤＮＡ作系列稀释，测定该ＰＣＲ体系的敏感度，结果表明，此ＰＣＲ体系能检出３０ｐｇ以上的细菌ＤＮＡ。采用上述ＰＣＲ技术，对沙门氏菌人工感染发病、自然发病小鼠、雏鸡的血液、脏器、粪便进行检测，?; 章新生臧富妍; 关键词：沙门氏菌 PCR DNA探针

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章新生

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