董智雄
- 作品数：16 被引量：11H指数：3
- 供职机构：天津师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 核糖体蛋白RPL15多克隆抗体的制备与细胞内定位
- 2016年
- 为了解核糖体大亚基蛋白RPL15在细胞中的定位和功能,设计并合成了RPL15蛋白的多肽,作用于抗原免疫兔子,使其产生特异性多克隆抗体,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光方法检测RPL15抗体的特异性.结果证实本研究成功制备并纯化了RPL15的多克隆抗体,且该抗体可以特异性识别RPL15蛋白.免疫荧光实验表明RPL15定位于细胞质和细胞核中,主要定位于核仁并呈点状分布,且与UBF、FBL和C23存在部分共定位.
- 梁爽爽冀美超胡晓晴付成华朱长军董智雄
- 关键词：核糖体多克隆抗体免疫荧光细胞内定位
- NEDD9作为一个上皮间质转化的调控因子促进三阴性乳腺癌的迁移和侵袭
- 上皮间质转化(EMT)在胚胎发育、癌症侵袭、转移等许多生物进程中发挥着重要的作用.最近的研究表明,三阴性乳腺癌(TNBC)与EMT存在一定的相关性,具体机制尚不明确.NEDD9/HEF l/Cas-L是Cas蛋白家族的成...
- 孔晨飞杜娟孙晓倩董智雄朱珊陆军黄百渠
- 关键词：三阴性乳腺癌上皮间质转化迁移
- 核仁蛋白RRP15在细胞有丝分裂期的表达与定位
- 2018年
- 为了明确核糖体RNA加工蛋白15(RRP15)在细胞周期不同时期的表达情况与亚细胞定位,以稳定表达GFP-RRP15的He La细胞为实验材料,利用细胞同步化以及蛋白免疫印迹方法研究RRP15在细胞周期不同时期的表达情况,利用细胞免疫荧光染色以及活细胞成像检测RRP15在有丝分裂期的亚细胞定位,利用染色体提取探究RRP15与有丝分裂期细胞染色体的关系.结果发现,RRP15在整个细胞周期中均有稳定表达,且在G1期表达微量上调;在有丝分裂期,RRP15定位于染色体外周和中小体,始终伴随染色体,且染色体外周定位不依赖于DNA.
- 陈超敏杨佳董智雄朱长军
- 关键词：细胞周期有丝分裂染色体
- RNaseⅢ制备的小分子干扰RNA（esiRNA）文库构建及优势分析被引量：4
- 2013年
- 目的建立KIF4A核糖核酸内切酶Ⅲ酶切制备的小分子干扰RNA（esiRNA）文库，并探讨这种新型siRNA制备方法的优势。方法制备502bp的KIF4A基因组序列作为转录模板；体外转录获得双链RNA；用核糖核酸内切酶ⅢGST融合蛋白（GST-RNaseⅢ）酶切双链RNA，制备KIF4AesiRNA文库；应用KIF4AesiRNA和化学合成的KIF4AsiRNA转染胃癌细胞株SGC-7901，应用Q-RTPCR和WesternBlot分别检测KIF4A的mRNA和蛋白水平。结果利用GST-RNaseⅢ成功制备了KIF4AesiRNA文库，该文库可有效抑制SGC．7901细胞内的KIF4A表达，且抑制效果明显优于化学合成的KIF4AsiRNA。结论用生物学方法制备的KIF4AesiRNA文库可有效抑制KIF4A在细胞内的表达，且抑制效果优于化学合成的siRNA。
- 李陪董智雄朱长军刘海燕
- 关键词：RNA干扰
- 染色体驱动蛋白KIF4A参与调控肺癌细胞顺铂耐药
- 2015年
- 目的研究染色体驱动蛋白KIF4A参与肺癌细胞顺铂耐药过程。方法采用逆转录PCR（RT．PCR）及Western Blot实验检测并比较肺癌细胞株A549及其顺铂耐药衍生细胞株A549／DDP中染色体驱动蛋白KIF4A的表达。先用细胞转染技术在A549细胞中过表达外源性KIF4A，或用RNA干扰（RNAi）技术敲降A549／DDP细胞中内源性KIF4A的表达，再用顺铂处理上述细胞，最后通过噻唑蓝（MTY）比色法检测细胞的增殖能力。结果染色体驱动蛋白KIF4A在A549／DDP细胞中mRNA和蛋白质的表达均高于A549细胞。在A549细胞中过表达外源性KIF4A，导致细胞耐受顺铂药物，且细胞增殖能力不受顺铂药物处理的影响。相反，在A549／DDP细胞中敲降KIF4A的表达，导致A549／DDP细胞对顺铂药物敏感，细胞增殖能力下降。结论驱动蛋白分子KIF4A参与调控肺癌细胞A549的顺铂耐药过程，故KIF4A可作为潜在的有效治疗肺癌顺铂耐药的新型生物靶标。
- 付成华胡晓晴梁爽爽冀美超董智雄朱长军
- 关键词：肺癌顺铂耐药
- 一种连续蔗糖密度梯度离心分离哺乳动物细胞核糖体前体和核糖体的技术优化
- 2015年
- 目的利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体。方法采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度，分别用梯度为10％～30％和10％-45％的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体；然后将哺乳动物细胞裂解液加入到已建立好的连续蔗糖密度梯度上进行超速离心；再将不同沉降系数的核糖体前体和核糖体收集到不同的1．5ml离心管中，测量每一个样品的吸光度值A。并提取其中的蛋白质，利用WesternBlot检测核糖体大亚基蛋白RPL15的定位。结果核糖体大亚基蛋白RPL15位于核糖体前体的60S上和成熟核糖体的60S、80S和多聚核糖体上。结论利用水平转头建立的连续蔗糖密度梯度可快捷分离哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体。该法分离效果好，操作简单，为快速和大量制备、分离多种核糖体提供了一种良好的方法。
- 梁爽爽冀美超胡晓晴付成华朱长军董智雄
- 关键词：核糖体
- 驱动蛋白KIF4A抑制胃癌细胞的侵袭作用
- 2016年
- 目的应用胃癌细胞SGC-7901以及稳定低表达驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞SGC-shKIF4A，研究KIF4A对胃癌细胞侵袭能力的作用。方法使用蛋白免疫印迹法鉴定对照胃癌细胞SGC-shNC以技SGC-shKIF4A细胞内KIF4A蛋白的表达水平．并通过细胞侵袭实验计数这两种细胞的侵袭能力。通过细胞免疫荧光染色法观察在SGC-7901、SGC-shNC、SGC-shKIF4A细胞中皮层肌动蛋白（cortactin）的数量变化情况。结果 与对照细胞SGC-shNC相比，SGC-shKIF4A细胞侵袭能力明显增强；与其他细胞相比，SGC-shKIF4A细胞的cortactin数量明显增多（P〈0．01），表明该细胞内侵袭性伪足增多.结论 驱动蛋白KIF4A具有抑制胃癌细胞的侵袭作用，这为KIF4A作为靶点应用胃癌的预后预测以及有效治疗奠定理论基础。
- 冀美超姜虹羽董智雄朱长军
- 关键词：皮层肌动蛋白细胞侵袭胃癌细胞
- RRP15过表达对核糖体生物发生和细胞增殖的影响被引量：1
- 2019年
- 为了明确核糖体RNA加工蛋白15(RRP15)在肿瘤发生发展中的作用,通过构建稳定过表达RRP15的HeLa细胞株HeLa-Flag RRP15及其对照细胞株HeLa-Flag,利用细胞免疫荧光、蛋白免疫印迹等方法研究了RRP15过表达对核仁结构的影响,利用蔗糖密度梯度离心法提取核糖体大小亚基前体,探究了RRP15过表达对核糖体生物发生的影响,利用MTT实验和蛋白免疫印迹检测了RRP15过表达对细胞生长增殖的影响.结果发现,RRP15过表达使细胞核仁数量增多,核仁蛋白表达量上调,核糖体大小亚基前体生物发生水平均有提高,细胞生长增殖速率加快,细胞周期相关蛋白的表达增加.由此认为,RRP15可能通过增加核仁数量和提高核糖体生物发生水平增强细胞的增殖能力,进而促进肿瘤的发生与发展.
- 印熙娣陈瑾陈瑾董智雄董智雄
- 关键词：核仁细胞增殖
- A549-KIF4A过表达细胞株的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 非小细胞肺癌A549细胞中驱动蛋白KIF4A的表达量极低.为研究KIF4A在肺癌发生和发展过程中的作用,利用脂质体转染的方法,将p EGFP-KIF4A质粒和p EGFP-C1质粒分别转入A549细胞中,用G418筛选得到单克隆,并扩增得到稳定表达GFP-KIF4A和GFP的细胞株.利用Western Blot以及免疫荧光染色法对得到的细胞株进行鉴定.结果表明:A549-GFP-KIF4A细胞中GFP-KIF4A蛋白的表达水平较高,A549-GFP-C1中仅表达GFP蛋白.免疫荧光检测表明:A549-GFP-KIF4A过表达细胞中GFP-KIF4A荧光融合蛋白的定位与内源KIF4A的定位相同.
- 宋翔付成华朱长军董智雄
- 关键词：驱动蛋白脂质体转染免疫荧光检测细胞株
- 染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA（shRNA）表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株（SGC-shKIF4A）和稳定表达无意义shRNA的对照细胞（SGC-shNC）;同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.
- 钟铠泽赵健李陪陈蔚文朱长军董智雄
- 关键词：有丝分裂小分子干扰RNA胃癌细胞
