董毳
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：大连医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 阻断核心岩藻糖基化修饰抑制肾小管上皮细胞的间充质转化被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨阻抑核心岩藻糖基化修饰对肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)过程的影响。方法:利用转化生长因子β1(TGF-β1)建立肾小管上皮HK-2细胞EMT的模型,应用RNAi技术沉默HK-2细胞的α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因表达,光镜下观察FUT8基因沉默后细胞形态变化,免疫印迹及免疫细胞化学方法测定细胞表型标记物蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)的表达变化,流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:TGF-β1孵育48 h后,HK-2细胞失去原有的上皮细胞形态,呈现纤维细胞形态,纤维细胞表型标记蛋白α-SMA、FSP-1及N-cad-herin表达明显升高,而上皮细胞表型标记蛋白E-cadherin表达明显下降,同时伴有FUT8基因表达上调,细胞凋亡增加,而提前转染FUT8 siRNA能明显减弱上述这些反应。结论:FUT8催化的核心岩藻糖基化修饰参与HK-2细胞的EMT过程;阻断核心岩藻糖基化修饰,能有效阻断肾小管上皮细胞的EMT过程。
- 王大鹏林洪丽沈楠董毳孙艳玲谢华于长青王楠单路娟
- 关键词：HK-2细胞
- 阻断核心岩藻糖基化下调TGF-β受体功能、减轻肾小管上皮细胞间充质转分化
- 林洪丽王大鹏董毳沈楠孙艳玲谢华王楠单路娟
- 核心岩藻糖基转移酶siRNA抑制肾小管上皮细胞转化生长因子β-Smad2／3通路活化
- 2011年
- 目的探讨α-1，6核心岩藻糖基转移酶（FUT8）小分子干扰RNA（siRNA）对肾小管上皮细胞转化生长因子（TGF）β．Smad2／3信号通路的影响。方法HK．2细胞共分为6组：正常组、阴性对照组、TGF-β1组、TGF-β1加FUT8干扰组、TGF-β1加阴性对照组、FUT8干扰组。利用外源性TGF-β1激活HK-2细胞TGF-β—Smad2／3信号通路。应用siRNA技术沉默FUT8。用免疫荧光方法测定细胞表面核心岩藻糖链表达；用免疫沉淀、凝集素免疫印迹以及免疫双染的方法测定FUT8基因沉默后TGF-αⅡ型受体（TGF-βRⅡ）、TGFα-Ⅰ型受体（ALK-5）的核心岩藻糖基化变化，并检测Smad2／3蛋白表达和磷酸化（P）．Smad2／3蛋白表达及其核转位的变化。结果与正常组及阴性对照组相比，加入5p^g／L的TGF-β1孵育HK-2细胞48h，能显著上调TGF-βRⅡ和ALK-5蛋白表达水平（P〈0．05），导致p-Smad2／3表达水平明显升高（P〈0．05），并促使其发生核转位。HK-2细胞表面存在核心岩藻糖链表达。与正常组及阴性对照组相比，TGF-β1孵育后，TGF-βRⅡ与ALK-5两种受体的核心岩藻糖链均显著升高（P〈0．05），FUT8siRNA能显著抑制TGF-βRII与ALK-5核心岩藻糖链表达（P〈0．05），从而抑制P—Smad2／3表达升高（P〈0．05）及其核转位，但不影响TGF-βRⅡ和ALK-5的蛋白表达（P〉0．05）。结论在肾小管上皮细胞中，TGF-βRⅡ和ALK-5蛋白翻译后的核心岩藻糖基化修饰是它们发挥生物学功能所需要的，阻止TGF-βRⅡ和ALK-5的核心岩藻糖基化，能抑制TGF-β—Smad2／3信号转导通路的活化。
- 王大鹏林洪丽董毳沈楠孙艳玲谢华于长青王楠单路娟
- 关键词：转化生长因子Β小分子干扰SMAD蛋白质类肾小管上皮细胞
