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兔胸腺HMGN2的分离纯化鉴定被引量：1: 2008年; 目的:分离纯化鉴定兔高迁移率非组蛋白N2(High mobility group chromosomal protein N2,HMGN2)。方法:利用液氮研磨和5%高氯酸从新鲜兔胸腺组织获得酸溶性萃取物,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离得到HMGN2,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blotting对HMGN2进行分子量测定和特异性鉴定。并利用琼脂糖弥散抑菌实验对其杀菌活性进行鉴定。结果:利用上述方法分离纯化出高纯度的兔HMGN2。对大肠埃希菌临床分离株54080、大肠埃希菌ATCC25922有明显杀菌活性。结论:建立简单分离高纯度的HMGN2的方法。; 石艳娥李恒彭媛媛邓璐霞周新娥赵媛黄宁; 关键词：HMGN2

构建人α-防御素HNP-1成熟肽酵母双杂交系统及鉴定: 【目的】构建人α-防御素HNP-1成熟肽酵母双杂交系统，以期为鉴定出α-防御素与肺上皮细胞反应的相关蛋白分子打下基础。【方法】培养HL-60细胞，提取RNA，RT-PCR扩增防御素HNP-1成熟肽的cD...; 邓璐霞; 关键词：Α-防御素成熟肽酵母双杂交; 文献传递

利用同源重组构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库被引量：2: 2008年; 背景:酵母双杂交技术是目前应用最成功的研究蛋白质相互作用的技术平台。目的:运用SMART(switching mechanism at5′end of RNA transc-ript)技术构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-07/2007-01在四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学感染免疫实验室完成。材料:人肺鳞状细胞癌旁组织由四川大学华西医学中心附属第一医院胸外科提供。方法:运用SMART技术,以纯化的Poly(A)+RNA为模板,用Powerscript逆转录酶进行转录,并在mRNA的5’末端添加一段5’-oligo作为延伸后的模板,从而富集全长cDNA。纯化的双链cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态AH109,经胞内同源重组形成环状文库质粒。应用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。主要观察指标:采用琼脂糖凝胶电泳观察人肺鳞状细胞癌旁组织的cDNA文库构建结果,并进行文库容量及多态性鉴定。结果:①总RNA和mRNA纯度较好,比较完整。②双链cDNA文库大小介于0.5～3kb之间。③共获得1.2×106转化子,重组子不同插入片断大小在0.3～2kb之间,文库具有较好的多样性。结论:在酵母菌株AH109成功构建了用于酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。; 彭媛媛邓璐霞石艳娥赵媛陈军利王薇冯云吴琦王伯瑶黄宁; 关键词：SMART技术 CDNA文库同源重组酵母双杂交

HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的作用: 2009年; 目的研究HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统作用。方法用5%高氯酸萃取兔胸腺组织,通过反相高效液相色谱进一步分离纯化蛋白,用Tricine-SDS-PAGE、AU-PAGE和Dot-blot进行鉴定。采用凝胶迁移阻滞试验(EMSA)检测HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的结合作用;平板菌落记数法检测TA系统激活或非激活条件下,菌体过表达重组HMGN2和对照组对细菌存活百分率的影响。结果HMGN2可阻滞mazEF基因的泳动速率,且随HMGN2浓度增加,阻滞作用增强。利福平激活TA系统,菌体过表达重组HMGN2后,与对照组比较细菌存活量减少约30%,有统计学差异。而头孢哌酮不能激活TA系统,过表达重组HMGN2组和空质粒组CFU%分别为70.2%、68.9%,两者无明显差异。结论HMGN2可加强mazEF系统介导的细菌程序性死亡;HMGN2对TA系统的作用也可能是其抗大肠埃希氏菌作用的机制之一。; 王薇陈军利黄宁邓璐霞陈善泽李夏吴桂霞曹玥范波赵静韩琴; 关键词：HMGN2 抗菌功能

LPS刺激对人结肠癌SW480、肺癌A549细胞HMGB1以及HBD-1表达的影响被引量：3: 2010年; 目的观察脂多糖(LPS)刺激对SW480、A549细胞HMGB1、HBD-1表达的影响。方法以浓度为5、10、50和100 ng/μl LPS刺激SW480、A549细胞24 h后,提取细胞RNA,并用RT-PCR法检测HMGB1以及HBD-1基因mRNA的表达水平。结果SW480以及A549细胞,HMGB1以及HBD-1均有较高的表达。在SW480细胞中,不同的LPS刺激浓度下,5ng/μl LPS即可上调HMGB1基因mRNA的表达,但其表达量并不随LPS浓度的增高而有所增加;而同样刺激条件下HBD-1基因mRNA表达水平未见明显变化(P>0.05)。在A549细胞中,不同的LPS刺激浓度下HMGB1以及HBD-1基因mRNA表达量未见明显变化(P>0.05)。结论HMGB1及HBD-1固有表达于肠道及呼吸道上皮细胞。LPS能上调SW480细胞HMGB1的表达,其表达量无浓度依赖性,但LPS不能上调HBD-1的表达。在A549细胞,LPS不能诱导HMGB1以及HBD-1的表达。; 陈善泽邓璐霞黄宁吴桂霞曹玥范波李夏赵静韩琴高祥; 关键词：SW480细胞 HMGB1

HMGN2对大肠埃希氏菌黏附Hela细胞的影响被引量：1: 2010年; 目的探讨HMGN2对大肠埃希氏菌黏附Hela细胞的影响。方法采用Hela细胞模型,光镜以及扫描电镜观察大肠埃希氏菌ATCC25922黏附Hela细胞模型的建立。用以下三组不同方式,观察梯度抑菌浓度下(分别为5、10、15μg/ml)HMGN2对细菌黏附的影响。黏附抑制组:HMGN2、细菌、细胞共同孵育1小时;干扰模型组:细菌、细胞孵育1小时后,PBS洗去未黏附细菌,再加入HMGN2孵育2小时;细菌预处理组:HMGN2、细菌孵育2小时,离心洗去HMGN2,收集细菌,所得细菌再与细胞孵育1小时。用平板菌落计数法观测细胞内、外活菌数,并计算黏附指数以及黏附抑制率。结果光镜及扫描电镜可见细菌黏附于细胞表面,黏附模型构建成功。三组的结果均提示:在HMGN2梯度抑菌浓度下,细菌的黏附指数随着HMGN2的浓度的升高而减小;黏附抑制率则随着其浓度的升高而逐渐增大(P<0.05)。结论抑菌浓度下的HMGN2:对大肠埃希氏菌ATCC25922黏附Hela细胞有明显的抑制作用;可减低已经黏附于细胞表面的细菌的黏附能力;可能直接作用于细菌,导致其黏附能力降低。; 李夏邓璐霞吴桂霞曹玥范波赵静韩琴陈善泽高祥黄宁; 关键词：HMGN2 细菌 HELA细胞

人血红蛋白及其片段体内外抗菌活性研究被引量：10: 2008年; 目的分离人血红蛋白及其片段,进行体外抗菌活性分析和比较,并对血红蛋白体内抗菌活性进行初步探讨。方法利用阳离子交换及分子筛分离人血红蛋白α、β链;溴化氰法裂解α/β链,反相高效液相色谱技术纯化其片段;琼脂糖弥散法抑菌实验检测抗菌活性;构建大鼠大肠埃希菌阴道感染模型,设立实验组（血红蛋白组）和对照组,观察各组大鼠阴道组织形态学变化。结果体外抑菌实验示：血红蛋白、α/β链及其片段有抑菌作用,但其主要针对的是革兰阴性菌大肠埃希菌;而且除α1~32的抑菌作用较弱外,血红蛋白、α/β链及其片段三者抑菌活性比较,其效能基本相似。大鼠体内抗菌实验示：与基质对照组（感染后不治疗）比,血红蛋白组阴道复层扁平上皮表层较平滑,固有层内炎细胞浸润明显减少,且组织内充血明显减轻。结论人血红蛋白及其片段具有体外抑菌活性,而且血红蛋白在大鼠体内能减轻大肠埃希菌阴道感染炎症程度。; 周新娥欧阳运薇潘小玲何跃东李恒邓璐霞石艳娥彭媛媛赵媛黄宁; 关键词：人血红蛋白片段抑菌

胚胎及生后不同发育时期小鼠肺β-防御素1的表达被引量：1: 2010年; 目的研究小鼠在胚胎及生后发育不同阶段肺β-防御素1(mBD-1)的表达。方法孕鼠随机分成2组:对照组和实验组。实验组于胚胎提取及出生前24h腹腔注射LPS,对照组以等剂量生理盐水代替。各组分别于14.5、17.5 dpc(days post coition,交配后天数)、生后0d、生后4d取肺组织进行石蜡包埋、连续切片,并进行mBD-1的免疫组化染色,用图像分析系统进行定量分析,并进行统计学处理。结果对照小鼠从14.5d胚胎至出生后4 d各时期肺组织中均存在mBD-1阳性表达,且呈增加趋势(P<0.05);而同一时间点实验组阳性表达略高于对照组,但与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验表明不同发育阶段小鼠肺组织均表达mBD-1,且其表达呈上升趋势,提示该分子可能是肺组织天然抵抗微生物感染的一个重要分子基础。; 赵静邓璐霞黄宁韩琴吴桂霞曹玥李夏范波陈善泽高翔; 关键词：小鼠发育

HMGN2对肺炎克雷伯氏杆菌耐药性的影响: 2009年; 目的探讨HMGN2对肺炎克雷伯氏杆菌耐药性的影响。方法分离、纯化并鉴定兔胸腺组织HMGN2。用质粒提取试剂盒提取耐药肺炎克雷伯杆菌中的质粒pMG252,PCR扩增其耐药基因qnrA;凝胶阻滞实验检测HMGN2与耐药质粒pMG252及qnrA基因结合;用不同浓度的HMGN2刺激培养肺炎克雷伯氏杆菌,然后用试管二倍稀释法测定环丙沙星对其MIC值的改变,微量法测定细菌的生长曲线,检测HMGN2对耐药菌株耐药性的逆转效果;将重组HMGN2及耐药质粒pMG252转化到大肠杆菌DH5α中,检测重组HMGN2对细菌耐药性的影响。结果HMGN2可明显阻滞pMG252质粒及qnrA基因的泳动速率,且随HMGN2浓度增加,qnrA基因的泳动速率逐渐减慢;15μg/ml HMGN2与细菌共孵育后,环丙沙星对耐药肺炎克雷伯氏杆菌的MIC值明显下降,且该耐药株的生长与对照组和低剂量组相比明显的受到抑制;pET-32a-c(+)-HMGN2重组表达质粒可时环丙沙星对大肠杆菌DH5α的MIC值明显小于其对照组,下降到其1/16。结论HMGN2能有效逆转含耐药质粒pMG252的肺炎克雷伯氏杆菌等对喹诺酮类抗生素的耐药性。; 陈军利王薇黄宁邓璐霞陈善泽李夏吴桂霞曹玥范波赵静韩琴; 关键词：HMGN2 耐药性逆转耐药性逆转

腹腔注射乳化异氟醚对大鼠气道上皮组织β防御素mRNA表达的影响: 2010年; 目的本研究旨在探讨腹腔注射乳化异氟醚对大鼠气道上皮细胞中β防御素BD-1、BD-2以及促炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA表达水平的影响。方法健康清洁级SD大鼠36只随机分成6组,分别为A^F组。A组经腹腔注射生理盐水,B组经腹腔注射30%脂肪乳,C^F组分别经腹腔注射0.25、0.5、1.0、1.5倍ED50量8%乳化异氟醚。各组均于注药后1 h处死大鼠,取其气管黏膜组织。从每个组收获的组织中检测β防御素BD-1、BD-2和促炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8的mRNA表达水平。结果在腹腔注射乳化异氟醚的大鼠气管上皮组织中除BD-1和IL-8 mRNA无变化外,BD-2和促炎症因子TNF-α,IL-1βmRNA表达水平均增加,且随乳化异氟醚用量的增加而增强。结论本实验说明腹腔注射乳化异氟醚能在转录水平上调节大鼠气道上皮组织β防御素及一些促炎症因子mRNA的表达水平,且乳化异氟醚以剂量依赖的方式显著增加大鼠气道上皮细胞的β防御素BD-2以及这些促炎症因子mRNA的表达水平。; 罗林邓璐霞黄宁朱涛; 关键词：乳化异氟醚防御素

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邓璐霞

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