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hrpZ_(Psta)在转基因大豆中定量表达与疫霉根腐病和灰斑病抗性相关研究被引量：14: 2015年; 以T5转hrpZPsta基因大豆JN29-705-15和JL30-187为材料,利用实时荧光定量PCR技术(Quantitative Real Time PCR,qRT-PCR)检测了目标基因在转基因大豆不同组织中的表达量,分别利用下胚轴侵染法和叶面喷施法鉴定疫霉根腐病抗性和灰斑病抗性,并分析目的基因表达量与疫霉根腐病和灰斑病抗性的相关性。结果表明:hrpZPsta基因在大豆的叶、茎、根、籽粒中均有表达,二个株系平均相对表达量分别为8.2/6.1、0.9/0.7、6.5/4.6和0.8/0.7;T5转hrpZPsta基因大豆抗疫霉根腐病和灰斑病能力与野生型相比均有所提高,JN29-705-15对疫霉根腐病抗性从感病提高到中抗,而JL30-187从中抗提高到抗病;hrpZPsta基因在叶中的表达量也与抗灰斑病能力呈正相关,与病情级别呈极显著负相关。试验结果初步证明了外源基因hrp ZPsta在大豆植株中的表达量与受体植株对疫霉根腐病和灰斑病抗性存在一定的相关性。; 谷晓娜刘振库王丕武张卓马建曲静张君付永平卢实郑成忠刘婷婷; 关键词：大豆疫霉根腐病灰斑病抗性

大豆查尔酮还原酶基因CHR1的功能研究被引量：6: 2014年; 为了验证查尔酮还原酶基因CHR1在大豆苷元合成中的作用,文章克隆了CHR1基因并构建了RNA干扰表达载体pCPB-CHR1-RNAi,将载体转化受体大豆品种"吉农28"中,以期抑制CHR1基因的转录。通过农杆菌介导的遗传转化和PCR检测得到4株T0代阳性植株,13株T1代阳性植株。Southern blotting结果表明,功能元件以单拷贝的形式整合到大豆的基因组中。利用实时荧光定量PCR法(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)测定CHR1基因在mRNA水平上的表达量,结果表明,转基因大豆植株中CHR1的表达量与未转化的受体大豆相比降低了60%～99%;高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)检测到合成大豆苷元过程中的前体物质异甘草素的含量降低了38.7%。该RNA干扰机制在转录水平上抑制了CHR1基因的表达。; 吴楠王丕武李丹代力强郑成忠卢实才源张卓曲静夏海丰; 关键词：大豆大豆苷元 RNA干扰载体

关于转基因玉米苗期抗旱性生理生化指标及综合评价的研究: 2015年; 转基因玉米苗期抗旱性能的研究是农业科研人员工作的重点。到目前为止,工作人员已经采用了不同的研究方法,从多种角度对该项指标进行了研究。本文将重点讨论影响转基因玉米苗期抗旱性能的相关因素以及这项研究的重要意义。; 郑成忠; 关键词：转基因玉米抗旱性生理生化指标综合评价

转BADH基因大豆研究及序列分析: 2015年; 对来自吉林农业大学生物技术中心的转基因大豆(BADH)的T5代进行PCR检测和Southern Blot检测,将大豆的T5代植株用含有氯化钠的营养液浇灌,观察植株形态并用荧光定量PCR检测盐胁迫条件下植株BADH基因的表达量。结果表明,转基因植株后代在同样干旱胁迫条件下,基因表达水平有显著提高.并运用多重序列比对的方法,对已在Gen Bank和PDB数据库注册的玉米、向日葵、甜菜等植物甜菜脱氢酶(BADH)的氨基酸序列进行比对预测。; 秦迪赵翠兰郑成忠王丕武; 关键词：大豆 BADH基因耐盐性

大豆花芽差异表达基因片段GmFBDG01克隆和RNAi表达载体的构建被引量：3: 2015年; 大豆的产量构成因素中每荚粒数是提高大豆产量的育种关键因素,因此研究与荚粒数相关的基因至关重要,花芽作为植物生殖生长的第一步,对大豆植株的生长发育有着重要的影响,可能对四粒荚的产生有影响。以大豆吉农18四粒荚突变体的7叶期花芽的转录组测序结果进行分析,筛选出差异表达的片段Gm FBDG01;利用RT-PCR克隆差异表达基因的CDS核心序列,并借助中间克隆载体p Bluescript SK plus,成功构建了RNA干扰(RNAi)表达载体p CPB-Gm FBDG01-RNAi,该表达载体的构建为大豆四粒荚相关功能基因的功能验证奠定基础。; 潘丽丹姚丹王丕武刘婷婷郑成忠赵翠兰; 关键词：大豆花芽 RNA干扰表达载体构建

转BADH基因大豆耐旱性分析被引量：9: 2015年; 为分析干旱胁迫下转基因大豆和非转基因大豆抗旱能力的差异,选用8个转BADH基因大豆株系作为实验材料,在干旱胁迫处理下,研究转基因大豆叶片中BADH基因表达量变化,鉴定萌发期和苗期抗旱能力的差异。最后采用随机区组设计,对大豆的产量性状进行鉴定。结果表明,在干旱条件下,转基因大豆叶片中BADH基因表达量较高。萌发期转基因大豆发芽指数比非转基因大豆提高了2.5%-16%,活力指数提高了0.5%-6%,与非转基因大豆的差异达到了显著水平。苗期转基因大豆中的脯氨酸含量比非转基因大豆增加9.9%-16.5%,POD活性比非转基因大豆增加了1.2%-10.5%,干物质重增加14%-49%,而丙二醛含量比非转基因大豆减少0.4%-12%。产量性状鉴定表明,8份转基因大豆材料中有7份增产,增产幅度为1.23%-8.02%;1份减产,减产幅度为0.02%。干旱条件下,转BADH基因大豆具有较强的耐旱性。; 秦迪赵翠兰郑成忠王丕武; 关键词：转BADH基因抗旱能力产量性状

转BADH基因玉米自交系的抗旱耐盐性分析被引量：9: 2016年; 试验以T_4代转BADH基因玉米自交系(受体亲本为"丹988")为基础材料,逐年加代纯化,通过PCR检测、Southern blotting以及实时荧光定量PCR法(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)来验证BADH基因在T_5和T_6代株系中能否稳定的遗传及表达,同时对T_6代转化株系进行抗旱耐盐性鉴定,对T_5与T_6代转基因玉米各株系的农艺性状进行了调查分析。结果表明:外源BADH基因以单拷贝的形式整合到玉米基因组中,且BADH基因在转基因植株各组织中均有表达,其中在叶中的表达量最高,达到1.1,而在根中的表达量只有0.1;在不同株系间的表达量也不同。对T_6代阳性植株进行干旱与盐胁迫处理后,测定脯氨酸、POD活性等生理生化指标,结果表明都明显高于受体亲本;T_5与T_6代转基因株系在株高、茎粗、穗长等农艺性状上与受体亲本无差异。该试验获得了与对照受体亲本"丹988"相比抗旱耐盐性较强、且农艺性状无显著差异的转基因玉米自交系。; 郑成忠王丕武吴楠张卓赵翠兰; 关键词：玉米甜菜碱醛脱氢酶抗旱耐盐性

大豆查尔酮还原酶1基因的克隆及转化: 2015年; 【目的】克隆大豆查尔酮还原酶1(CHR1)基因,以构建的过表达载体pCAMBIA3301-CHR1转化大豆,获得含有CHR1基因的阳性植株,为研究该基因的功能奠定基础。【方法】以大豆基因组DNA为模板,通过PCR扩增克隆CHR1基因,构建植物过表达载体pCAMBIA3301-CHR1,对其进行PCR及双酶切鉴定。采用农杆菌介导法将该载体转入大豆"吉农28"中,对转基因植株进行PCR、Southern杂交检测,对CHR1基因mRNA相对表达量进行荧光定量PCR检测。【结果】克隆得到的CHR1基因大小为1 100bp。成功构建了植物过表达载体pCAMBIA3301-CHR1,将其转化大豆后,通过PCR检测获得T1代转基因大豆植株12株;Southern杂交检测结果显示,CHR1基因以单拷贝形式整合入大豆基因组中;荧光定量PCR检测结果显示,转基因植株的CHR1mRNA相对表达量高于非转基因大豆植株。【结论】成功构建了过表达载体pCAMBIA3301-CHR1,并获得了CHR1基因表达量高的转基因大豆。; 李丹吴楠郑成忠张琳马建曲静张卓付永平王丕武; 关键词：克隆表达载体构建农杆菌介导

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郑成忠

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