陈之光
- 作品数：18 被引量：53H指数：4
- 供职机构：中国医科大学附属盛京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“盛京自由研究者”基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人Plk3基因真核表达载体的构建及蛋白表达和定位被引量：1
- 2017年
- 目的构建hPlk3真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞Hela的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPlk3基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。然后将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测其表达。最后利用激光共聚焦扫描显微镜观察pEGFP-hPlk3在COS-7细胞内的定位。结果hPlk3基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1941bp,并测序成功。Westernblot检测到了GFP-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为98kDa。pEGFP-hPlk3在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。结论成功构建了hPlk3基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-hPlk3蛋白在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。
- 沈涛李妍杨蕾郭然陈之光郭洲洋巴根付勤
- 关键词：WESTERNBLOT绿色荧光蛋白质粒构建COS-7细胞
- 椎间孔镜经不同入路治疗腰椎间盘突出症的临床进展被引量：31
- 2012年
- 与传统开放性手术相比,应用经皮椎间孔镜技术(percutaneous transforaminal endoscopic discectomy,PT-ED)治疗腰椎间盘突出症具有手术创伤小、对脊柱稳定性影响小、恢复较快等特点。但是由于突出物位置的不同、病变节段高低或髂嵴阻挡等原因,PTED经椎间孔入路的适应证相对狭窄,尚不能取代开放性手术。新入路的开发及器械的改良已成为PTED目前研究的热点及未来发展方向。近年来,经椎板间隙入路和经髂骨入路的出现使得PTED的适应证得到了极大扩展。然而,操作不规范、对适应证或手术入路选择失当仍然是导致PTED手术失败的主要原因,因此本文就PTED的适应证、3种不同入路的手术方法、临床疗效和并发症进行综述。
- 陈之光付勤
- 关键词：腰椎椎间盘移位
- 老年男性骨质疏松症患者外周血瘦素及骨代谢指标表达分析被引量：5
- 2011年
- 目的分析老年男性骨质疏松症(OP)患者外周血瘦素(LEP)及骨代谢指标表达。方法连续选择25例老年男性OP患者,入选对象接受了外周血LEP以及骨代谢指标骨钙素(BGP)和碱性磷酸酶(AKP)等测定,并与22例相同年龄和性别、正常骨密度健康人(对照组)相同检查结果比较。结果老年男性OP组的外周血LEP浓度明显低于对照组,而外周血BGP和AKP浓度则明显高于后者(P<0.01)。结论老年男性OP患者存在明确外周血LEP低水平表达,伴随其他骨代谢指标浓度升高。
- 巴根陈之光
- 关键词：骨质疏松症血清瘦素浓度骨密度
- GST-hSesn2融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
- 2017年
- 目的构建GST-h Sesn 2融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hSesn2基因全长,通过BamHI和SalI酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hSesn2,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDSPAGE电泳和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-h Sesn2,并用Western blot方法证实了GST-h Sesn2融合蛋白在原核细胞大肠埃希菌中阳性表达。结论 GST-h Sesn2原核表达载体成功构建为进一步纯化Sesn2及研究其结构与功能提供了前提基础。
- 沈涛杨蕾李妍巴根郭然郭洲洋陈之光付勤
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 骨肉瘤细胞中Polo样激酶3的表达和定位
- 2017年
- 目的:构建新型人源真核表达载体3*Flag-hPlk3并同时检测其在骨肉瘤细胞U2OS中的表达及定位。方法:以GST-hPlk3作为模板,利用聚合酶链反应扩增人源Plk3目的基因c DNA全长,并将其克隆到含有3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序分析鉴定,并转染至U2OS骨肉瘤细胞系中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。同时利用荧光共聚焦激光扫描显微镜观察3*FlaghPlk3在U2OS细胞系中的定位,进一步利用免疫沉淀方法纯化人源Plk3蛋白。结果:hPlk3基因c DNA全长成功构建于含有3*Flag标签的真核表达载体中,Western blot检测3*Flag-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为74k Da。3*Flag-hPlk3在骨肉瘤细胞系U2OS中主要定位于细胞质及核周,并成功纯化了hPlk3蛋白。结论:成功的构建了含有3*Flag标签的人源Plk3真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-hPlk3融合蛋白的表达,最终成功纯化hPlk3蛋白。3*Flag-hPlk3蛋白主要定位在细胞质和核周。
- 沈涛陈之光李妍巴根郭然杨蕾郭洲洋付勤
- 关键词：WESTERNBLOT免疫沉淀
- 经椎间孔椎体间融合与后路椎体间融合治疗腰椎退行性疾病的疗效比较被引量：4
- 2012年
- 本文回顾性分析了我院2010年7月至2011年5月行后路椎体间融合术（PLIF）或经椎间孔椎体间融合术（TLIF）治疗腰椎退变性疾病（DLD）112例，并对2种术式的疗效进行比较研究，现报告如下。
- 陈之光付勤
- 关键词：后路椎体间融合术腰椎退行性疾病椎间孔腰椎退变性疾病
- 干扰素-γ在骨免疫系统中作用的研究进展被引量：3
- 2015年
- 目的随着骨免疫学概念的提出和研究的深入,骨骼系统和免疫系统之间相互作用的复杂性已得到广泛认可,特别是免疫系统直接或间接介导骨骼疾病发生和发展更是成为这一领域的研究热点。干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)作为宿主免疫防御的重要环节,不仅具有免疫相关活性,而且能够作用于多种参与骨更新和重建的细胞系,影响其形成和分化。本文将IFN-γ对骨骼细胞形成和分化的影响进行综述。对其作用机制的深入研究有助于加深对骨免疫学这一系统的理解,并为未来骨骼疾病的治疗提供新思路和新策略。
- 陈之光薛今琦付勤
- 关键词：干扰素-Γ成骨细胞破骨细胞脂肪细胞
- 蓝萼甲素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对克雷伯菌肺炎大鼠炎性损伤的影响被引量：1
- 2022年
- 目的研究蓝萼甲素(GLA)对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子(NF-κB)信号通路的调节作用,探讨其减轻克雷伯菌肺炎大鼠炎性损伤的作用机制。方法将SD大鼠分为正常对照组(NC组)、模型组(M组)、GLA低剂量组(10 mg/kg组)、GLA中剂量组(20 mg/kg组)、GLA高剂量组(40 mg/kg组)和左氧氟沙星组(10 mg/kg),每组10只。通过将克雷伯菌注入气管建立大鼠肺炎模型。造模成功第2 d开始给药,连续7 d。将小鼠处死,取左肺组织称重,计算干重/湿重;HE、TUNEL染色观察肺组织病理变化及细胞凋亡情况;ELISA检测血清中白介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western blot检测肺组织HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白表达。结果与NC组相比,M组小鼠肺组织出现肺泡塌陷、肺泡壁厚度增加等病理现象,W/D值、肺细胞凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白水平、IL-6、TNF-α、IL-1β含量及HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白水平均显著上升(均P<0.05);与M组相比,GLA低、中、高剂量组和左氧氟沙星组肺组织损伤减轻,W/D值、肺细胞凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白水平,IL-6、TNF-α、IL-1β含量及HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白水平均显著下降(均P<0.05)。结论GLA可减轻机体炎性损伤,改善克雷伯菌感染引发的肺炎病情,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。
- 李柏新冷晓雪陈之光
- 关键词：蓝萼甲素克雷伯菌肺炎炎性损伤
- 骨肉瘤细胞中Plk1的表达和定位被引量：1
- 2017年
- 目的构建真核表达载体GFP-hPlk1并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法以pcDNA3.1-hPlk1为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk1基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。同时利用激光共聚焦扫描显微镜观察GFP-hPlk1在U2OS细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hPlk1蛋白。结果 hPlk1基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hPlk1融合蛋白表达,分子质量Mr约为93 000Da。GFP-hPlk1在骨肉瘤细胞U2OS中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hPlk1蛋白。结论成功地构建了GFP-hPlk1真核表达质粒,并在骨肉瘤细胞U2OS中表达。
- 沈涛巴根李妍郭然陈之光杨蕾郭洲洋付勤
- hSesn3基因真核表达载体的构建及在骨肉瘤细胞中的蛋白表达和定位
- 2017年
- 目的:通过构建人Sesn3真核表达载体同时证实融合蛋白在细胞中的表达及定位。方法:提取Hela工具细胞的mRNA,反转录至c DNA。进一步通过PCR来扩增人Sesn3基因的c DNA全长片段,并将其亚克隆于p EGFP-C1真核表达载体中,进而将构建的重组质粒进行酶切及测序鉴定,转染到MG-63骨肉瘤细胞中,获取细胞总蛋白,通过Western blot方法检测表达。进一步利用激光共聚焦扫描显微镜方法观察MG-63细胞内p EGFP-h Sesn3的定位,最后利用免疫沉淀方法纯化人源h Sesn3蛋白。结果:h Sesn3基因c DNA全长片段克隆于真核表达载体p EGFP-C1中,酶切鉴定片段为1 410 bp,并成功测序。Western blot检测到了GFP-h Sesn3融合蛋白表达,分子量约为79 k Da。在MG-63细胞中p EGFP-h Sesn3主要定位于细胞质,进一步成功纯化了h Sesn3蛋白。结论:成功构建了h Sesn3基因c DNA全长的真核表达载体,在MG-63细胞中p EGFP-h Sesn3蛋白主要定位于细胞质,最终成功纯化了h Sesn3蛋白。
- 沈涛郭洲洋李妍巴根陈之光郭然杨蕾付勤
- 关键词：WESTERNBLOT绿色荧光蛋白质粒构建
