陈广南
- 作品数：9 被引量：11H指数：2
- 供职机构：广州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 含巨细胞病毒早期启动子的EPO逆转录病毒表达载体的构建被引量：4
- 1997年
- 本文构建了含巨细胞病毒（CMV）早期启动子的红细胞生成素（EPO）逆转录病毒表达我体。困逆转录病毒表达我体pN2A需用外源启动子才能表达国的基因，故把CMV早期启动手及包括除信号肽中第2、3和4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列的EPO次全基因片段一起克隆到pN2A载体neo基因下游的多聚接头上的单一酶切位点BglⅡ上，构建成重组质粒pN2ACMVEPO。
- 陈广南梁希若吴淑华
- 关键词：逆转录病毒载体基因重组
- 含SV_(40)串联启动子红细胞生成素逆转录病毒表达载体的构建
- 1998年
- 本文构建了含SV40串联启动子的红细胞生成素（EPO）逆转录病毒表达载体。因逆转录病毒载体pN2A需用外源启动子才能表达目的的基因，故把SV40串联启动子及包括除信号肽中第2、3、4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列的EPO基因片段一起克隆到pN2A载体neo基因下游的多聚接头上的单一酶切位点BglⅡ上，构建成重组质粒pN2ASV40EPO。
- 陈广南吴淑华梁希若
- 关键词：逆转录病毒载体
- 中国人促红细胞生成素基因组的克隆及其在COS-7细胞中的表达被引量：3
- 1994年
- 本文利用PCR技术,从正常人胎肝染色体DNA库中分离克隆了长度分别为506bp,465bp的中国人促红细胞生成素(EPO)基因组片段。506bp基因片段包括外显子2(信号肽),内含子2和外显子3;465bp片段包括外显子4,内含子4和外显子5。通过在引物中设置的酶切位点将两个克隆片段进行了正确的拼接,从而得到了约1.0kb的EPO次全基因组片段,它包括除信号肽中第2,3,4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列。 所克隆的次全EPO基因组插入表达载体pSV2-dhfr中的不同克隆位点,构建了3种不同的转移载体质粒,分别转染导入COS-7细胞后,3种转移载体质粒转染的细胞上清液都有明显的EPO活性。本工作证明仅含有内含子2,4序列,去除负调控区和氧敏感区序列的人次全EPO基因组可以在COS-7细胞中获得表达。
- 黄利文韩峰郑秋君马学军陈广南李玉英蒋盘宏吴淑华侯云德
- 关键词：聚合酶链反应EPO
- 谷胱甘肽S转移酶-血管生成抑制素融合蛋白表达载体的构建
- 1999年
- 目的 构建谷胱甘肽S转移酶 -血管生成抑制素 (GST -Angiostatin)融合蛋白表达载体。方法 把血管生成抑制素 (Angiostatin)基因插入融合基因表达载体pGEX - 2T的多克隆位点上 ,转化大肠杆菌DH5α ,提取质粒DNA ,限制性内切酶消化DNA ,琼脂糖凝胶电泳。结果 经限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ、PstⅠ酶切质粒DNA ,电泳结果证明Angiostatin基因已插入到pGEX - 2T中。结论 成功构建GST -Angiostatin融合蛋白表达载体 ,为获得较大量的基因工程Angiostatin产品 ,为肿瘤治疗研究作必要准备。
- 陈广南罗进贤梁希若
- 关键词：血管生成抑制素融合基因基因重组肿瘤
- 人纤溶酶原kringle5功能区基因在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 1999年
- 将人纤溶酶原kringle5功能区基因插入融合基因表达载体pET17bBamHⅠ位点,构建成重组质粒pETK23,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下,纤溶酶原kringle5功能区基因在重组转化菌株BL21(DE3,pETK23)中获得高效表达,表达产物以可溶性蛋白形式存在,表达量占菌体总蛋白的528%.
- 陈广南罗进贤卢文菊张添元
- 关键词：人纤溶酶原基因表达大肠杆菌
- 改革考试命题形式,加强素质教育被引量：1
- 1999年
- 改革考试命题模式是加强素质教育的一个重要环节。本文在论述应试教育带来的负面影响的基础上，提出要转变观念，强化素质教育意识；改革试题的命题形式，充分体现理论联系实际。
- 马桂璋汤郡李剑蔡征涛陈广南李叔田郑小燕方强杨英李群英
- 关键词：素质教育考试命题模式
- 中国人胚胎肝组织来源纤溶酶原kringle5基因的克隆与序列分析
- 2007年
- 目的:分离、克隆和测定中国人纤溶酶原Kringle5功能区基因,为进一步研究其功能奠定基础。方法:实验于2002-06/2003-05在广州医学院金域医学检验中心完成。①实验材料:国人胚肝组织取自广州医学院第一附属医院的流产胚胎(取得家属同意,并经广州医学院第一附属医院伦理委员会批准)。pET21a(+)载体购自Novagen公司,大肠杆菌BL21(DE3)为医学检验中心保存。引物均由上海生工合成。②实验方法:从国人胚肝组织中提取mRNA,用反转录-聚合酶链反应方法将人纤溶酶原Kringle5的cDNA扩增出来,克隆到pET21a(+)载体中测序。③实验评估:采用紫外分光光度仪和琼脂糖凝胶电泳分析胚肝组织总RNA的抽提结果;经琼脂糖凝胶电泳鉴定Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果;pET-Kringle5重组质粒的酶切鉴定;序列测定。结果:①胚肝组织提取总RNA结果:提取的总RNA经紫外分光光度仪测得A260nm/A280nm>1.8,A260nm/A270nm>1.2,表明无蛋白残留;电泳结果显示提取的总RNA有明显的28S、18S两条带,说明RNA基本完整。②Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果:人Kringle5cDNA片段长为240bp,加上引物设计的2个酶切位点,总长度为258bp,聚合酶链反应产物长度与该长度一致,符合预期结果。③pET-Kringle5重组质粒的构建和酶切鉴定结果:用引物所带的限制性内切酶BamHⅠ、NdeⅠ双酶切,结果有250bp左右条带出现。④序列测定结果:证实国人纤溶酶原Kringle5功能区基因被成功克隆,序列分析证实为该基因,未发现有基因突变或多态性现象,但第153位核苷酸与文献比较存在碱基替代现象,其组成的密码子由于遗传的简并性,所编码的氨基酸相同,并未造成氨基酸组成的改变。结论:中国人纤溶酶原Kringle5功能区cDNA基因编码序列与国外文献报道的相应序列可能存在碱基替代现象。
- 甘舜进胡朝晖曾征宇燕启江陈广南
- 关键词：纤维蛋白溶酶原
- 人血管生成抑制素基因的克隆、表达及纯化被引量：1
- 2003年
- 目的 构建携带人血管生成抑制素基因的原核表达载体,诱导表达具有活性的血管生成抑制素。方法 用PCR法从人纤溶酶原cDNA中扩增出Kringle 1-3基因,克隆入pET21a(+)载体中,在大肠杆菌BL 21中表达,表达产物经亲和层析纯化。结果 所构建的原核表达载体为高效表达系统,所表达的产物经层析纯化后可获得重组人血管生成抑制素。结论 可获得大量纯化人血管生成抑制素,为进一步临床应用奠定基础。
- 胡朝晖甘舜进曾征宇陈广南燕启江
- 关键词：原核表达纯化血管生成抑制素基因克隆
- 改革硕士生分子生物学教学的若干做法
- 1999年
- 陈广南汤郡马桂璋梁希若
- 关键词：分子生物学教学分子生物学技术分子克隆医学硕士研究生SDS-PAGE改进教学方法
