陈思佳
- 作品数：16 被引量：17H指数：2
- 供职机构：哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划黑龙江省教育厅资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- AGO在非编码RNA功能中的作用
- 2019年
- AGO(argonaute)蛋白家族存在于几乎所有的物种中,是一种高度保守的碱性蛋白。AGO蛋白在细胞整个生命进程中发挥重要角色,参与m RNA降解、基因沉默、蛋白翻译等多种细胞进程。AGO蛋白也可与不同的非编码RNA结合发挥重要的作用。研究非编码RNA基因的作用机制,有助于发现新的与器官形成、胚胎发育和生长相关的调控因子,进一步探究人类疾病发病机制,为开发新的治疗各种疾病的手段提供理论基础。该文主要对AGO在非编码RNA中的生物学作用加以综述。
- 张美玲陈思佳钟照华
- 关键词：AGO非编码RNA基因沉默转录翻译
- 悬浮培养昆虫细胞表达重组HPV16 L1蛋白
- 2007年
- 目的用悬浮培养昆虫细胞方式表达人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，为获得病毒样颗粒（VLPs）及进一步深入研究疫苗和诊断试剂盒打基础。方法优化昆虫细胞Si9的悬浮培养条件；优化扩增病毒和蛋白的条件；空斑试验测定病毒滴度；SDS—PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达情况；透射电镜观察细胞内HPV16 L1蛋白形成的VLPs。结果优化后，悬浮培养昆虫细胞初始接种密度为5×10^5 cell／ml，以MOI（Multiplicity of Infection）=10接种重组病毒rBacV／HPVl6L1，72～84h收获细胞沉淀为最佳。经透射电镜观察，在重组病毒感染的昆虫细胞内，存在HPV16L1蛋白形成的VLPs。结论优化了细胞悬浮培养、病毒扩增和蛋白表达的条件；电镜观察在重组病毒rBacV／HPV16L1感染的昆虫细胞中，HPV16L1蛋白可形成VLPs。
- 韩聪王燕商庆龙魏兰兰陈思佳
- 关键词：乳头状瘤病毒细胞病毒样颗粒
- 采用正交设计优化HPV16L1重组蛋白表达的实验研究被引量：1
- 2009年
- 通过正交试验对构建的人乳头瘤病毒(HPV)16型L1蛋白的重组表达菌株pQE31-HPV16L1/M15(pREP4)进行表达条件的优化,以增加目的蛋白的表达量。实验选取影响蛋白表达的4个主要因素,分别为诱导时间、诱导剂浓度、细菌密度和诱导温度,采用四因素两水平正交试验,通过SDS-PAGE及Western blot测定重组表达蛋白,以Tanon凝胶成像系统分析目的蛋白含量作为检测条件优化效果的指标,所得数据采用SAS软件进行统计分析。实验结果表明在37℃、IPTG0.5mmol/L,菌密度OD600为1.0的条件下诱导4h所得蛋白量最大;经统计正交分析的最佳诱导条件为37℃、0.5mmol/LIPTG和菌密度OD600为1.0的条件下诱导7h。经实验验证,应用正交分析的最佳条件诱导所得目的蛋白量最大,但实际中通常采用诱导4h条件。实验证明正交试验可以用于基因工程菌株蛋白表达条件优化过程,提高工作效率。
- 陈思佳商庆龙王燕李晓波刘希君谷鸿喜
- 关键词：人乳头瘤病毒16型L1蛋白正交试验
- 人乳头瘤病毒16型E7蛋白的表达、纯化及抗血清制备
- 2018年
- 目的建立人乳头瘤病毒(human papillomavims,HPV)16型E7蛋白的原核表达系统,表达HPv16E7蛋白,制备小鼠抗HPV16E7血清。方法采用PCR方法扩增HPV16E7基因,构建人pET21b质粒,重组表达载体经鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3)。诱导表达后经十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate,SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)和westemblot鉴定表达产物。提取包涵体进行变性复性处理后纯化,纯化后的可溶性蛋白免疫Balb/C小鼠,检测小鼠体内γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平、CD4/CD8比值和抗血清滴度变化。结果PcR扩增片段为0.3Kb,酶切和序列测定证实重组质粒构建正确。SDS—PAGE在11KD处出现蛋白条带。蛋白表达以包涵体为主。免疫后小鼠抗体效价升高,CD4/CD8比值无升高,IFN-γ无反应。结论成功制备可溶性HPV16E7蛋白和小鼠抗HPvl6E7高效价抗血清。
- 颜学勤王莹莹嵩钰佳王鑫陈思佳魏兰兰钟照华商庆龙
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E7蛋白抗血清
- MMP-2和TIMP-2表达对人脑胶质瘤的影响
- 2007年
- 目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和组织金属蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)在人脑胶质瘤组织中的表达及其与胶质瘤的侵袭发展、分级之间的关系。方法采用RT-PCR方法对20例脑胶质瘤标本及10例正常脑组织进行了MMP-2、TIMP-2表达情况的检测。结果在高、低度恶性组中,MMP-2及TIMP-2的含量较正常对照组均有明显升高并有显著性差异(P<0.05),且高、低两组之间也有显著性差异(P<0.05)。另外,MMP-2/TIMP-2的比值在各组之间也有显著性差异(P<0.05)。结论MMP-2及TIMP-2对胶质瘤恶性程度的评估有重要意义。随着肿瘤细胞恶性程度的增高,MMP-2及TIMP-2的含量也相应增高,但TIMP-2不及MMP-2增高的明显。
- 陶海泉郭丽刘希君陈思佳
- 关键词：基质金属蛋白酶-2组织金属蛋白酶抑制剂-2胶质瘤
- HPV16地方分离株E6基因的克隆与原核表达研究
- 2007年
- 目的克隆人乳头瘤病毒（HPV16E6）基因并在大肠埃希菌中表达，对表达产物进行鉴定。方法用PCR方法从克隆质粒pUC19-HPV16E6E7中扩增HPV16E6基因，采用定向克隆构建pQE30-HPV16E6原核表达质粒．利用酶切和序列测定鉴定重组质粒。将pQE30-HPV16E6转化大肠埃希菌BL21（DE3），建立重组工程菌pQE30-HPV16E6／BL21（DE3）。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，SDS—PAGE分析蛋白表达情况，利用Western blot鉴定抗原特异性。结果PCR产物470bp，重组质粒经酶切和序列测定证实构建正确。SDS—PAGE分析在18×10^3处有蛋白条带出现，与预期一致。Western blot分析证实目的条带与HPV16E6抗体有特异性反应。结论成功构建了HPV16E6基因的基因工程菌株，能高效表达E6蛋白，表达蛋白具有良好的免疫反应性。
- 商庆龙刘雪梅王燕李承刚邵迪陈思佳韩聪谷鸿喜
- 关键词：大肠杆菌
- 粗提和纯化的HPV16L1重组蛋白为抗原的ELISA比较
- 2008年
- 为评价真核及原核细胞表达的HPV16L1粗提蛋白代替纯化的16L1蛋白作为ELISA检测抗原的可行性。实验分别用大肠埃希菌表达的HPV16L1纯化蛋白,表达16L1的大肠埃希菌破碎物及表达16L1的昆虫细胞破碎物作为抗原。在ELISA试验中与抗HPV16L1的单克隆抗体进行反应。结果证实3种包被抗原可以得出非常相近的OD值变化趋势。表明用表达16L1的大肠埃希菌破碎物和表达16L1的昆虫细胞破碎物可以代替纯化的HPV16L1蛋白作为抗原进行ELISA试验。
- 李茉王燕陈思佳魏兰兰谷鸿喜
- 关键词：重组蛋白ELISA
- 中国北方地区隐源性肝炎及乙型肝炎表面抗原阴性肝癌患者中隐匿性HBV感染流行状况分析被引量：7
- 2013年
- 目的调查中国北方地区隐源性肝炎及乙肝表面抗原（HBsAg）阴性肝癌患者中隐匿性乙型肝炎病毒（HBV）感染的流行状况。方法收集393个受试者的血清，其中包括隐源性慢性肝炎患者215名、HBsAg阴性肝癌患者178名。使用巢式PCR的方法检测血清中的HBV-DNA，同时使用实时定量PCR的方法检测HBV—DNA的载量。结果在隐源性慢性肝炎患者、HBsAg阴性肝癌患者中隐匿性HBV感染流行率分别为23．7％（51／215）和68．5％（122／178）。在IgGanti—HBc阳性者中，隐匿性HBV感染率较高。所有隐匿性感染者的病毒载量均较低（〈10^5拷贝／ml）。结论在中国北方隐源性肝炎及肝癌患者中，隐匿性HBV感染率较高。因此，对隐匿性HBV感染应给及足够的重视，避免因输血及器官移植造成HBV的传播。
- 房勇梁爽陈思佳徐维祯赵颖新谷鸿喜
- 关键词：隐匿性感染流行率
- 重组人乳头瘤病毒16型E6蛋白的表达、纯化和动物免疫效果分析被引量：2
- 2008年
- 目的诱导表达人乳头瘤病毒16型（HPVl6）E6蛋白，制备可溶性蛋白，并通过动物免疫进行免疫效果评估。方法采用IPTG诱导pQE30-HPVl6E6／BL21（DE3）重组菌株，表达产物经SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定。提取包涵体进行变性处理，变性蛋白经Ni^2＋金属螯合层析纯化，将纯化产物用复性透析方法处理以获取可溶性蛋白。免疫BalB／c小鼠，检测血清抗体、CD4^＋／CD8^＋和IFN-γ。结果诱导后重组菌有相对分子量18000蛋白质表达，以不溶性包涵体为主要表达方式。目的蛋白可与HPV16E6多克隆抗体识别，纯化和透析处理后得到可溶性的蛋白。小鼠免疫后血清抗体滴度升高，淋巴细胞CD4^＋／CD8^＋升高，IFN-γ未见升高。结论成功表达了HPV16E6蛋白，同时处理包涵体并制备了可溶性目的蛋白。目的蛋白可刺激小鼠体内产生有效的免疫反应，该蛋白的成功制备为患者血清抗体的检测和肿瘤细胞杀伤的免疫研究奠定了坚实基础。
- 商庆龙王燕陈思佳李承刚韩聪邵迪李茉谷鸿喜
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E6蛋白纯化免疫
- 5’-RACE法扩增抗人乳头瘤病毒16型L1蛋白单克隆抗体轻链可变区基因及序列分析
- 2008年
- 目的获得抗人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白单克隆抗体的轻链可变区（VL）基因并分析序列。方法从分泌抗HPVl6L1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，逆转录形成CD-NA，用5’-RACE策略扩增抗体轻链可变区基因，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，并测序及进行序列分析。结果VL基因全长336bp，编码112个氨基酸，基因测序结果符合小鼠抗体轻链可变区特征。结论5’-RACE法成功获得了抗HPV16L1蛋白的单克隆抗体轻链可变区基因的真实序列，为基因工程抗体研究奠定了良好基础。
- 王燕商庆龙陈思佳邵迪韩聪李茉谷鸿喜
- 关键词：人乳头瘤病毒16型轻链可变区单克隆抗体
