陈默
- 作品数：21 被引量：23H指数：3
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划重庆市科学技术委员会院士基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 电离辐射对小鼠肠道隐窝素4表达的影响及意义被引量：3
- 2015年
- 目的检测小鼠受电离辐射后隐窝素4(cryptdin 4,Crp4)的表达变化,探讨其在电离辐射肠损伤中的生物学意义。方法 8周龄BALB/c小鼠采用随机数字表法分为两组,未辐照组(n=5)和辐照组(n=15),辐照组给予8 Gy X射线全身一次性照射,分别于照后9、24、72 h取小鼠小肠组织和眼球血。免疫组织化学染色和Western blot分析小鼠小肠Paneth细胞隐窝素Crp4的表达变化,鲎试剂法检测小鼠血清LPS水平。化学合成Crp4多肽,采用涂布克隆计数法分析Crp4对肠道条件致病菌(大肠杆菌、粪肠球菌)和益生菌(乳酸杆菌、双歧杆菌)的抗菌活性;同时,观察Crp4对LPS诱导促炎因子IL-1β生成的影响。结果与对照组相比,小鼠电离辐射后小肠Crp4表达水平升高,72 h升高尤为显著(P<0.01);辐照小鼠血清LPS含量在9 h后显著增加(P<0.05),72 h后升高最为明显(P<0.01);Crp4对条件致病菌(大肠杆菌、粪肠球菌)的抗菌活性显著强于益生菌(乳酸杆菌、双歧杆菌),并能抑制LPS诱导单核巨噬细胞IL-1β的生成(P<0.01)。结论电离辐射可以诱导小鼠肠道隐窝素Crp4的表达上调,Crp4表达上调可发挥调节肠道菌群、减轻机体炎症反应的作用。
- 曹乐王成申明强王艾平陈芳耿放陈默张乃心粟永萍程天民王军平
- 关键词：电离辐射抗菌LPSIL-1Β
- 急性放射损伤后骨髓巨核细胞生成调控新措施研究
- 放射损伤后骨髓巨核细胞数量和外周血血小板水平降低显著，促进放射损伤后骨髓造血功能恢复尤其是有效提升巨核细胞和血小板水平，是辐射损伤救治的一个关键环节。本文对急性放射损伤后骨髓巨核细胞生成调控新措施进行研究，论述了TMP2...
- 王军平申明强许杨王菘陈芳陈默王艾平程天民粟永萍
- 关键词：急性放射损伤骨髓巨核细胞造血功能
- 单宁酸对电离辐射所致巨核细胞损伤的保护作用被引量：2
- 2015年
- 目的研究单宁酸(tannic acid,TA)对电离辐射所致巨核细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法体外培养巨核细胞株M07e,经0、0.5、1、2.5、5、10μg/m L单宁酸预处理后给予10 Gy60Coγ射线照射,继续培养不同时间,采用MTT法、荧光酶标仪检测法和流式细胞术检测技术分别检测细胞存活率、活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和凋亡率变化。给予BALB/c小鼠5 Gy60Coγ射线全身一次性照射,复制急性放射损伤实验动物模型,设置生理盐水对照组和TA灌胃预处理组,通过尾静脉外周血常规检测和骨髓病理切片观察,分析血小板水平和骨髓巨核细胞数目变化情况。结果 TA能够剂量依赖性地提高受照巨核细胞的存活率;与单纯辐照组相比,TA预处理可以显著降低细胞内总ROS水平(P<0.01)、提高细胞线粒体膜电位(P<0.05)和降低细胞凋亡率(P<0.05)。动物实验结果显示,TA预处理能够显著抑制辐射损伤引起的骨髓巨核细胞数量减少,照后第7、12、15、19天时TA处理组血小板水平显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论 TA对电离辐射所致巨核细胞损伤具有显著保护作用,其作用机制可能与其突出的抗氧化应激活性有关。
- 吴苏南许杨陈石磊申明强陈芳陈默张舟王崧粟永萍程天民王军平
- 关键词：单宁酸巨核细胞血小板
- 人α防御素5活性肽的基因工程制备方法
- 本发明涉及一种人α防御素5活性肽的基因工程制备方法。本发明公开了含人α－防御素5活性肽基因的表达载体构建及其转化酵母克隆株的筛选、高密度发酵的方法和从发酵上清中分离纯化活性多肽的方法。本发明还公开了由上述方法获得的人α防...
- 王艾平王军平粟永萍程天民王崧申明强陈默
- 文献传递
- 不同药用辅料对人α防御素5抗菌活性影响的单因素实验研究
- 2013年
- 目的探索单种药用辅料不同浓度条件下对人α防御素5(HD5)抗菌活性的影响,为后期新药制剂配方的研制提供实验依据。方法采用抗菌实验平板计数法,分析不同浓度HD5的抗菌活性,然后选择不同浓度甘油、蔗糖、NaCl、吐温80、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)、尼泊金甲酯钠作为候选辅料,以含有各浓度不同辅料添加HD5多肽作为实验组,以各浓度辅料的未添加HD5作为对照组,其中将未添加HD5和辅料的对照组称为空白对照组。计数平板菌落数,以抑菌率作为响应值,从而选择适宜的辅料种类和浓度范围。结果与单纯HD5多肽相比,分别单独加入浓度大于0.29%的NaCl和10%以上的(HP-β-CD),HD5的抑菌率明显下降(P<0.05),而单独加入设定浓度的甘油、蔗糖、吐温80、HP-β-CD和尼泊金甲酯钠均不会显著影响HD5的抑菌率,但是由于较高浓度的甘油、吐温80和尼泊金甲酯钠本身具有显著抑菌活性,所以在较高浓度时无法判断它们是否影响了HD5的抗菌活性,因此在选取浓度时要注意区分抑菌活性的主次关系。分别单独加入浓度低于10%的甘油、12%的蔗糖、0.5%的吐温80、5%的HP-β-CD和0.5%的尼泊金甲酯钠均不会显著影响HD5的抗菌活性。结论在一定浓度范围内,甘油、蔗糖、吐温80、HP-β-CD和尼泊金甲酯钠不会影响HD5的抗菌活性,可作为HD5的备选辅料。
- 周小林王成申明强陈默贺赐安王军平
- 关键词：辅料抗菌活性单因素实验
- 重组融合蛋白rTMP-GH对体外培养巨核细胞增殖的影响被引量：7
- 2008年
- 目的探讨TPO模拟肽(thrombopoietin mimetic peptide,TMP)与人生长激素(growth hormone,GH)的重组融合蛋白rTMP-GH对体外培养巨核系细胞增殖的影响,以及对血小板生成有显著调控作用的球蛋白转录调节因子(globin transcription factor-1,GATA-1)表达的调控作用。方法体外培养Dami细胞,100ng/ml的重组融合蛋白rTMP-GH作用7d后,观察巨核细胞集落形成能力,分析rTMP-GH对Dami细胞增殖的影响。同时,采用Western blot和RT-PCR方法分别检测Dami细胞中GATA-1的蛋白水平和mRNA表达变化,探讨rTMP-GH对巨核细胞生成血小板的调节作用。结果rTMP-GH处理后Dami细胞的集落形成能力显著增强,转录因子GATA-1的mRNA和蛋白表达水平显著上调,其调节作用明显强于空白对照组和GH组。结论rTMP-GH能够刺激巨核细胞增殖分化和上调GATA-1的表达,具有促进血小板生成的作用。
- 许杨王军平赵景宏粟永萍陈芳申明强陈默王崧开丽
- 关键词：增殖GATA-1
- TMP线性二联体多肽的筛选及其对辐射损伤小鼠血小板减少症的救治作用
- 2013年
- 目的筛选具有显著促进巨核细胞增殖、分化和血小板生成活性的血小板生成素模拟肽(TMP)二联体线性多肽,并观察其对血小板减少症的救治作用。方法设计合成系列TMP二联体线性多肽,其中两个头尾串联的TMP之间设置不同长度的连接肽,CCK-8法检测并筛选促巨核细胞增殖活性最强的TMP二联体多肽,Western blot分析TMP二联体多肽激活STAT5和ERK1/2磷酸化情况,流式细胞术分析小鼠骨髓来源Sca+-Ⅰ细胞经TMP二联体多肽处理后巨核细胞标志分子CD41、CD61的表达变化。BALB/c小鼠用5 Gyγ射线全身一次性照射后皮下注射TMP二联体多肽,每天1次,连续用药7 d,分析外周血血小板水平变化和骨髓造血组织病理改变。结果连接肽长度和氨基酸组成可显著影响TMP二联体多肽的促巨核细胞增殖活性,其中由1个脯氨酸(P)和8个甘氨酸(G8)连接的TMP二联体活性较为突出。TMP-PG8-TMP多肽处理能够显著促进巨核细胞中STAT5和ERK1/2的磷酸化,该多肽连续作用14 d能够较IL-3对照组显著上调Sca+-Ⅰ细胞CD41、CD61的双阳性表达率[(83.26±5.38)%vs(15.70±2.12)%,P<0.01]。此外,体内应用该多肽能够较辐照对照显著提高急性辐射损伤小鼠外周血血小板最低值水平(164.8×109/L vs 53.0×109/L),并使血小板水平提前4 d恢复。结论通过筛选连接肽最终获得具有显著促巨核细胞增殖和血小板生成活性的TMP二联体线性多肽。
- 张舟陈芳曾东风许杨王崧申明强陈默陈石磊粟永萍王军平
- 关键词：多肽巨核细胞血小板
- 辣椒素对造血干细胞稳态的影响
- 2018年
- 目的 观察辣椒素对造血干细胞稳态的影响,并初步探讨其相关机制。方法 采用8～10周龄C57BL/6J小鼠,按随机数字表法分成实验组和对照组,分别给予0. 4 mg/d辣椒素溶液和单纯溶剂灌胃建立动物模型。采用流式细胞术检测造血干细胞稳态变化。利用流式分选得到原代造血干细胞进行q-PCR,分析周期相关蛋白激酶CDK2、CDK6 mRNA表达水平。利用CD45. 1小鼠作为受体进行造血移植实验。结果 流式细胞术分析结果显示,实验组造血干/祖细胞（LSK）比例较对照组明显升高[（0. 299±0. 041）%vs（0. 177±0. 052）%,P 〈0. 01]。亚群分析显示,与对照组比较,实验组短期造血干细胞（ST-HSC）比例上升[（47. 48±3. 22）%vs（37. 63±1. 85）%,P 〈0. 01],造血祖细胞（MPP）比例下降[（40. 59±3. 04）%vs（50. 12±1. 95）%,P 〈0. 01]。周期分析结果显示,与对照组比较,实验组造血干/祖细胞增殖,G0期细胞数目下降。q-PCR结果也证实实验组CDK2、CDK6 mRNA表达增强。凋亡和竞争性骨髓移植结果两组差异无统计学意义（P〉 0. 05）。结论 辣椒素促进造血干细胞增殖,灌胃辣椒素能致短期造血功能增强。
- 曾浩胡梦佳汤勇芦玉凯陈默王军平
- 关键词：辣椒素造血干细胞增殖
- 人α防御素-5多肽体外抗单纯疱疹Ⅱ型病毒作用的研究被引量：4
- 2010年
- 目的探讨人α防御素-5（humanα-defensin-5,HD-5）多肽体外抗单纯疱疹Ⅱ型病毒（herpes simplex virustype2,HSV-2）的作用及其机制。方法以绿猴肾细胞（Vero）为宿主细胞,采用CCK-8法首先分析10-200μg/ml浓度范围内HD-5多肽的细胞毒性,再以HSV-2感染Vero细胞,分别于感染前后和感染的同时加入100μg/ml的HD-5多肽,72h后测定细胞保护率,结合细胞病变效应观察,分析HD-5抗HSV-2的作用效果和起效环节,并通过改变培养基中血清的浓度,观察血清对HD-5抗病毒作用的影响。结果在100μg/ml浓度以内,HD-5多肽几乎无细胞毒性,提前或同时加入HD-5多肽可以显著抑制HSV-2病毒引起的细胞病变反应、提高细胞保护率（P〈0.01）,而在HSV-2感染2h后加入HD-5多肽对Vero细胞的保护作用不明显（P〉0.05）;血清浓度会显著影响HD-5多肽的抗HSV-2活性,血清浓度越高,HD-5多肽对细胞的保护率越低。结论HD-5多肽在体外具有显著的抗HSV-2感染活性,其作用机制主要是通过干扰病毒对细胞的粘附、侵入而发挥作用。
- 陈芳王艾平申明强陈默许杨王崧粟永萍程天民王军平
- 关键词：VERO细胞体外研究
- ^(125)I标记重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内分布的实验研究
- 2014年
- 目的研究重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内的分布情况,明确其是否具有靶向分布特点。方法实验室制备dTMP-GH重组融合蛋白;用放射性125I标记融合蛋白dTMP-GH后,按100μg/kg的标准小鼠尾静脉注射125I-dTMP-GH,分别于给药后5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取心、肝、脾、肾、股骨、甲状腺等进行放射性计数。结果制备得到纯度大于98%的重组融合蛋白dTMP-GH;125I标记率为71.53%,放化纯度为96.53%,比活度为0.22 MBq/μl;尾静脉注射125I标记的dTMPGH后30 min股骨的放射性计数占到注射总量的10%,并随时间推移经肝脏和肾脏代谢。结论融合蛋白dTMP-GH经尾静脉注射后在小鼠体内主要分布于骨髓,具有骨髓组织偏向分布特点。
- 申明强陈默王崧粟永萍王军平
- 关键词：血小板小鼠
