黄奔
- 作品数：50 被引量：29H指数：4
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备的研究被引量：6
- 2005年
- 研究主要探讨在制备小鼠胎儿成纤维饲养层中,不同处理条件对小鼠胎儿成纤维细胞分裂与存活的影响.结果表明:小鼠胎儿成纤维细胞用适当处理浓度的丝裂霉素-C或适当强度的γ-射线处理一定的时间(10 μg/mL 1～4 h,20 μg/mL 1～2.5 h或21 Gy和28 Gy各处理1 h),能有效地抑制其分裂,且不影响其活力.
- 黄奔蒙超衡石德顺黎强杨素芳
- 关键词：小鼠胚胎干细胞成纤维细胞饲养层细胞分裂细胞活力
- 一种体外高效诱导人体细胞重编程为神经元细胞的方法
- 本发明提供了一种体外高效诱导人体细胞重编程为神经元细胞的方法，通过小分子化合物、基因干扰、基因敲除抑制ALK2、ALK3位点的表达。本专利诱导小分子化合物单一和安全，诱导时间短、诱导效率高、诱导作用位点和基因明确以及分子...
- 黄奔王国栋张丹丹刘权辉吴玉莲吕丹薇胡吉刚谢小莲
- 一种山羊一胎多羔的高效繁殖方法
- 本发明提供了一种山羊一胎多羔的高效繁殖方法，包括以下步骤：(1)同期发情调控，采用CDIR+PMSG的方法(2)超数排卵调控，采用FSH递减法配合PG和促黄体素释放激素A3的方法；(3)种公羊配种；(4)营养调控，每只山...
- 黄奔陈出石德顺李梦梅唐维
- 文献传递
- 用单层分化法进行胚胎干细胞神经分化的研究
- 2004年
- 用单层分化法研究了 ES细胞从 0～ 316 h(第 14天 )的神经分化过程。无饲养层培养的 ES细胞在无血清的N2 B2 7培养基中开始神经分化。从 72 h开始 ,神经外胚层的特异性转录因子 Sox1表达 ,在克隆的边缘逐渐出现向外迁移的细胞 ,形状呈圆形或椭圆形 ,有 1～ 2个细胞突起。在 191h(第 8天 )之后 ,细胞可迁移至克隆边缘的 2 0 0 μm之外 ,这些有细长突起的细胞表达神经元特异性蛋白 Tau。以后 ,迁移细胞的突起开始交叠成网状。 316 h(第 14天 )时 ,细长的纤维可跨越在不同的克隆之间 ,长达上千微米。此时 ,免疫染色的结果表明 ,在克隆的中央有较多的圆形 Nestin阳性细胞 ,而克隆的边缘有大量的 β- tubulin 阳性细胞 ,它们交织成复杂的网状图像。阶段性表达基因的表达时序研究表明 ,ES细胞的特异性转录因子 Oct4开始减弱时 ,Sox1表达开始 ,此时细胞由全能状态进入早期神经分化状态 ;Tau的表达是 Sox1表达的下游事件。这一时序与胚胎发育中神经发生的时序相符。单层分化法能直观地展示 ES细胞的神经分化过程 ,可作为研究细胞分化。
- 蒙超衡韦精卫黄奔韦力石德顺
- 关键词：胚胎干细胞神经分化胚胎发育
- 一种完全小分子化合物诱导山羊多能干细胞的制备方法
- 本发明提供了一种完全小分子化合物诱导山羊多能干细胞的制备方法，包括以下步骤：山羊耳缘成纤维细胞及小鼠胎儿成纤维细胞的分离、饲养层的制备、细胞培养基配制、山羊诱导多能干细胞样克隆的生产、山羊诱导多能干细胞样克隆形态特征的识...
- 黄奔李兰玉石德顺张丹丹郑贝贝任颜颜叶升刘树林
- 文献传递
- 抑制miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞泌乳功能的影响被引量：1
- 2023年
- 【目的】探索miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞(chemical induced mammary epithelial cells,CiMECs)体外泌乳功能的调节作用,旨在为促进转基因乳腺生物反应器的发展以及“培养皿奶”的商业化生产奠定基础和提供新的思路。【方法】选取奶山羊耳缘成纤维细胞(GEFs)为研究材料,经单一小分子化合物TGFβR-1/ALK5的抑制剂(RepSox)诱导8 d后,分别从细胞的形态变化、特异性标记物免疫荧光染色以及油红O染色对其进行鉴定。之后运用脂质体转染技术在诱导成功的奶山羊CiMECs中分别转染miR-142-3p的抑制物(miR-142-3p inhibitor)及抑制物对照(inhibitor-NC),不转染的细胞作为空白对照(BC),转染24 h后,采用实时荧光定量PCR检测miR-142-3p的表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖率,Western blotting检测β-酪蛋白(β-casein)的表达量,甘油三酯酶法测定甘油三酯的含量。【结果】GEFs诱导8 d后形成岛屿状多核仁样的上皮样聚集;免疫荧光染色结果显示,诱导后的GEFs表达乳腺上皮细胞(MECs)的特异性标记物细胞角蛋白14(CK14)和CK18;油红O染色结果显示,诱导后的GEFs细胞质内弥散分布着大小不等被染上红色的脂滴,表明成功获得了具有泌乳功能的奶山羊CiMECs。奶山羊CiMECs转染试验结果显示,与空白对照组相比,miR-142-3p inhibitor组miR-142-3p的相对表达量显著降低(P<0.05),inhibitor-NC组miR-142-3p表达量无显著差异(P>0.05);miR-142-3p inhibitor组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均显著增加(P<0.05),inhibitor-NC组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均无显著差异(P>0.05)。【结论】GEFs经RepSox诱导8 d可成功转变为具有泌乳功能的奶山羊CiMECs,抑制miR-142-3p可显著促进奶山羊CiMECs的增殖并增加β-casein表达量及甘油三酯的分泌量,从而影响泌乳功能。
- 潘思尧张丹丹刘权辉王国栋吕丹薇黄奔
- 关键词：奶山羊
- 山羊GATA3基因克隆及其真核表达载体构建被引量：1
- 2021年
- 本研究旨在克隆山羊GATA3(GATA binding protein 3)基因,构建其真核表达载体,并对该基因进行生物信息学分析。以山羊GATA3基因编码区为种子序列(GenBank登录号:XM_018056969.1),通过SnapGene 4.1.9软件设计引物序列,应用RT-PCR方法扩增山羊GATA3基因完整编码区序列,测序鉴定后基于其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1慢病毒重组质粒。利用脂质体转染方法将慢病毒重组质粒pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1与病毒包膜质粒pCMV-VSVG、包装质粒pNRF共转染HEK-293T细胞,进行慢病毒包装后收集病毒上清液,成功感染山羊耳尖成纤维细胞。结果显示,山羊GATA3基因编码区序列全长1335 bp,编码444个氨基酸,分子质量为47.94 ku,分子式为C2093H3234N626O625S24,等电点为9.47,其中丝氨酸含量最高(13.3%),色氨酸含量最低(1.1%)。山羊GATA3基因核苷酸序列与牛、猪、驴、马、小鼠及人的相似性分别为97.7%、94.2%、92.2%、92.4%、88.0%和90.1%,不同物种间相似性较高,进化过程中具有高度保守性。系统进化树分析表明,山羊与牛、猪、驴、马及人聚为一支,亲缘关系较近,与非洲蟾蜍、斑马鱼亲缘关系较远。跨膜结构域及亲/疏水性预测结果显示,山羊GATA3蛋白不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白。信号肽预测结果表明,该蛋白定位于细胞质中。通过构建山羊GATA3基因慢病毒真核表达载体pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1,细胞水平上转染HEK-293T和山羊耳尖成纤维细胞,过表达GATA3基因,产生绿色荧光信号。本研究结果为山羊GATA3基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究GATA3基因在山羊泌乳中的作用奠定了基础。
- 吴玉莲叶升王国栋刘权辉黄奔
- 关键词：山羊克隆乳腺发育
- 一种利用转分化乳腺上皮细胞制备转基因乳腺生物反应器的方法
- 本发明提供了一种利用转分化乳腺上皮细胞制备转基因乳腺生物反应器的方法，包括如下步骤，1)制备携带外源基因的转分化乳腺上皮细胞；2)将步骤1)制备的携带外源基因的转分化乳腺上皮细胞注射到去除了乳腺芽的乳腺脂肪垫，注射细胞量...
- 黄奔张丹丹刘权辉朱少倩叶升覃梁珊李梦梅胡吉刚谢小莲
- 小分子化合物促进猪iPSCs primed向naive状态转化的研究
- 2018年
- 为了探讨在培养体系中添加小分子化合物对Dox-inducible体系诱导获得的猪i PSCs primed向m ESC-like（naive）状态转化的影响,进而筛选出能够促进猪i PSCs primed向naive状态转化的稳定培养体系,试验采用添加小分子化合物的处理组naive转化培养体系[基础培养基＋CHIR99021（3μmol/L）＋PD0325901（1μmol/L）＋LPA（10μmol/L）＋LIF（10 ng/m L）＋b FGF（4 ng/m L）＋β-巯基乙醇＋L-谷氨酰胺＋非必需氨基酸＋Dox（2μg/m L）]处理猪i PSCs,同时以DMEM/F12＋Dox作为对照,对传代培养的i PSCs进行碱性磷酸酶活性、免疫荧光、qRT-PCR检测,以此来探讨此培养体系对i PSCs向naive状态转化的影响。结果表明：与对照组（DMEM/F12＋Dox）克隆相比,处理组在形态上更为立体,边缘光滑清晰,碱性磷酸酶活性更高,免疫荧光检测显示多能性基因OCT4、表面特异性抗原SSEA-4及组蛋白H3K4me3的相对荧光强度显著高于对照组,naive相关基因ESRRB、STELLA、SOX2、OCT4的相对表达量显著提高。说明该体系对猪i PSCs primed向naive状态转化有一定的促进作用。
- 付念文高邦君郑贝贝伊善宝石德顺黄奔
- 关键词：诱导多能干细胞小分子化合物
- 水牛胚胎干细胞的制备方法
- 一种水牛胚胎干细胞的制备方法，其工艺步骤为：经体外受精获得的水牛囊胚和孵化囊胚，去掉透明带及滋养层细胞，获得内细胞团细胞；用丝裂霉素处理的水牛胎儿成纤维细胞作为饲养层细胞，DMEM添加胎牛血清、非必需氨基酸、β－巯基乙醇...
- 石德顺黄奔李童崔奎青
- 文献传递
