于长勇
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 治疗用质粒DNA的纯化工艺被引量：6
- 2008年
- 目的探索适合大规模生产治疗用质粒DNA的纯化工艺。方法采用中空纤维柱收菌、碱裂解,再应用中空纤维柱浓缩质粒,经分子筛、亲和、离子交换等层析分离纯化质粒DNA,并应用凝胶电泳、PCR、核酸蛋白检测仪、BCA蛋白检测试剂盒和内毒素检测试剂盒对所纯化的质粒DNA进行全面检定。结果所获得的超螺旋质粒DNA达到样品总质粒的91.2%;质粒DNA总纯度为1.8;内毒素含量小于10EU/mg;几乎检测不到蛋白质残留,未检出基因组DNA残留。各项指标均符合有关质量标准。结论所采用的纯化工艺省时省力,制备的质粒DNA纯度高,适用于大规模生产治疗用质粒DNA。
- 丛艳昭鲁承金宁一申镇维梁晓枫金洪涛白靓牟伟锋于长勇常巧呈齐楷金明杰
- 关键词：质粒DNA纯化层析
- 国内不同基因型Asia1型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法的建立
- 在比较大量国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上,设计了检测FMDV Asia1型不同基因型,即新疆/03谱系和江苏/05谱系的二联PCR引物.本实验确定了单项RT-PCR反应条件范围.在此基础上建立、优化了二...
- 于长勇金宁一鲁会军胡博刘昊张丹颜雯
- 关键词：口蹄疫病毒RT-PCR
- 文献传递
- 二价重组鸡痘病毒口蹄疫疫苗的豚鼠免疫试验
- 2009年
- 目的检测携带口蹄疫病毒(FMDV)Asia-1型P1-2A-IL18基因和O型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒疫苗诱导豚鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫的能力。方法将重组鸡痘病毒vUTAL-P1-2A-IL18-P1-2A-3C、w-FPV和PBS分别经肌肉注射免疫豚鼠,检测豚鼠脾T淋巴细胞亚群数量、特异性CTL细胞杀伤活性和血清中抗FMDV特异性抗体水平。结果重组鸡痘病毒免疫豚鼠脾细胞中T淋巴细胞亚群数量和特异性CTL细胞杀伤活性均显著高于w-FPV和PBS对照组,且能产生抗O型和Asia-I型FMDV特异性抗体。结论二价重组鸡痘病毒口蹄疫疫苗能诱导豚鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。
- 谷长维金宁一李太元李昌田明尧马鸣潇霍晓伟常巧呈于长勇
- 关键词：口蹄疫病毒重组鸡痘病毒免疫应答
- 口蹄疫病毒多价DNA疫苗的构建及其免疫原性被引量：7
- 2008年
- 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)多价DNA疫苗,并检测其免疫原性。方法以复合多表位表达盒OAAT及AsiaⅠ型FMDV的P1-2A-3C基因为基础,构建FMDV多价DNA疫苗pIRES-OAAT-P1-2A-3C,并用间接免疫荧光(IFA)方法检测目的蛋白在HeLa细胞中的表达。进一步进行小鼠免疫试验,并应用ELISA法检测小鼠血清抗体,ELISPOT检测小鼠脾淋巴单细胞IFN-γ的分泌水平,流式细胞术检测脾T淋巴细胞亚群数量,淋巴细胞转化试验检测特异性淋巴细胞增殖水平。结果所构建的FMDV多价DNA疫苗在HeLa细胞中获得了正确表达。免疫小鼠后,血清特异性抗体水平、脾淋巴单细胞IFN-γ的分泌、脾T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+的数量及特异性淋巴细胞增殖水平均显著提高。结论已成功构建了FMDV多价DNA疫苗,并诱导小鼠产生了特异性的细胞免疫和体液免疫应答。
- 常巧呈霍晓伟李太元金宁一鲁会军郑敏谷长维牟伟锋胡博于长勇马鸣潇丛艳昭
- 关键词：口蹄疫病毒多价DNA疫苗体液免疫细胞免疫
- Asia-I口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠,评价其体液免疫和细胞免疫水平。方法:通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDVP1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上。将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A。将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测。再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验。结果:酶切结果与预期目的条带大小相符;荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光,说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达;小鼠免疫结果表明,免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫,并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高(P<0.05)。间接ELISA试验表明,在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高(P<0.05)。结论:成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。
- 牟伟锋金宁一鲁承霍晓伟胡博屈勇刚常巧呈于长勇颜雯丛艳昭曹世诺
- 关键词：FMDV
- 共表达口蹄疫病毒O型P1-2A-IL-18基因和Asia I型P1-2A-3C基因重组鸡痘病毒的构建被引量：1
- 2008年
- 目的构建共表达口蹄疫病毒(FWDV)O型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒。方法将酶切得到的FWDVO型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因克隆至鸡痘病毒表达载体pUTAL上,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-P1-2A-IL-18,与鸡痘病毒(FPV)282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过BrdU3次加压筛选,挑选出单克隆重组病毒株,进行RT-PCR及间接免疫荧光(IFA)鉴定。结果重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-P1-2A-IL-18经双酶切鉴定证明构建正确。经RT-PCR和IFA鉴定,证明所筛选的重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C-P1-2A-IL-18基因盒。结论已成功构建了共表达FMDVO型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒。
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- 关键词：口蹄疫病毒鸡痘病毒
- 乙型脑炎病毒XJ/08/01株的分离鉴定及PrM/E基因的遗传进化分析被引量：11
- 2009年
- 从新疆维吾尔自治区石河子地区某猪场采集了150份猪脑组织样品,利用RT-PCR方法进行流行性乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因扩增,结果有32份组织样品扩增出了430 bp的特异性目的条带。用检测的阳性样品研磨液接种乳鼠进行JEV的分离,经3次乳鼠传代后获得了1株JEV,命名为XJ/08/01。在此基础上,设计引物从接毒乳鼠脑组织样品中扩增JEV的主要抗原基因PrM/E并进行序列分析,结果表明,该分离毒株与JEV疫苗株SA14-14-2的同源性为99.6%,根据基因分型法确定该分离株属于基因Ⅲ型JEV。
- 刘昊金宁一段纲尹革芬鲁会军屈勇刚于长勇张丹李霄金扩世关莎莎
- 关键词：流行性乙型脑炎病毒核酸序列
- 国内不同基因型Asia1型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法的建立
- 在比较大量国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上,设计了检测FMDV Asial型不同基因型,即新疆/03谱系和江苏/05谱系的二联PCR引物。本实验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了二...
- 于长勇金宁一鲁会军胡博刘昊张丹颜雯
- 关键词：口蹄疫病毒ASIAI型RT-PCR检测
- 文献传递
- 国内不同基因型Asia1型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法的建立
- 2009年
- 目的建立口蹄疫病毒(FMDV)Asia1型江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法。方法在比较大量国内外FMDV流行毒株序列的基础上,设计检测不同基因型Asia1型FMDV江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联PCR引物,优化单项和二联RT-PCR反应条件,并进行特异性及相关病毒检测。结果优化的单项和二联RT-PCR特异性均良好,检测9份FMDV,病料的结果与其基因序列测定结果完全一致。结论已建立了FMDVAsia1型江苏/05谱系和新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法,为FMDV的诊断、流行病学调查及疫苗应用奠定了基础。
- 于长勇金宁一王春凤鲁会军胡博刘昊张丹牟伟锋丛艳昭谷长维常巧呈刘存霞颜雯叶明
- 关键词：口蹄疫病毒RT-PCR
