仝佳
- 作品数：47 被引量：108H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学语言文字文化科学更多>>
- 肠道病毒71型VP1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达被引量：1
- 2015年
- 目的利用昆虫杆状病毒表达系统表达肠道病毒71型VP1蛋白并对其进行纯化。方法首先通过化学合成法合成EV71 VP1基因,然后将EV71 VP1基因插入到供体质粒pFast Bac1中,构成重组质粒pFast Bac1-VP1,再转入JM190感受态细菌扩增,然后提取重组质粒pFast Bac1-VP1转入DH10BacTM感受态细胞,通过转座从而获得重组质粒bacmid-VP1,采用脂质体Cellfectin Reagent将重组质粒bacmid-VP1转染Sf9细胞。通过SDS-PAGE、Western blot法检测目的蛋白的水平,经镍离子亲和层析,纯化VP1蛋白。结果 SDS-PAGE及Western blot法检测获得蛋白的相对分子质量与预期结果一致。Bradford分析纯化后蛋白的浓度为70μg/m L,纯化度达90%。结论利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达EV71 VP1蛋白。
- 赵培培孔枕枕刘海冰茅凌翔苏兆亮仝佳王胜军陈建国
- 关键词：EV71VP1蛋白
- hGITRL_(aa52-177)蛋白在杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的利用杆状病毒系统表达hGITRLaa52-177蛋白。方法PCR扩增获得hGITRL胞外段(hGITRLaa52-177)基因,克隆入pFastBacHTa转移载体,在E.coliDH10Bac内通过转座子Tn7的介导,得到重组杆粒,转染Tn细胞表达目的蛋白。通过SDS-PAGE电泳及Westernblotting鉴定目的蛋白的表达。结果重组载体pFastBacHTa-hGITRLaa52-177以及重组杆粒Bacmid-hGITR-Laa52-177构建正确,在Tn细胞内成功表达6×His-hGITRLaa52-177重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Westernblotting显示重组hGITRLaa52-177蛋白相对分子质量约为Mr18000。结论杆状病毒-昆虫表达系统获得hGITRLaa52-177蛋白,为进一步从蛋白质水平研究hGITR/hGITRL对机体免疫调节的影响奠定了基础。
- 唐莉王胜军毛朝明陈君胡正军鲍俊峰仝佳邵启祥许化溪
- 关键词：杆状病毒真核表达
- T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究
- 2011年
- 目的:探讨T-bet质粒局部应用对小鼠肺癌细胞皮下移植瘤的干预作用。方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右肩部皮下,制备荷瘤小鼠模型;瘤内分别注射PIRES-eGFP/mT-bet(m指小鼠)、PIRES-eGFP质粒和PBS,观察各组小鼠存活时间,肿瘤体积的变化;HE染色观察肿瘤组织的病理变化;Western blot检测肿瘤组织T-bet的表达,QRT-PCR检测肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平。结果:瘤内注射T-bet质粒载体后Western blot检测发现,肿瘤组织T-bet蛋白表达显著高于对照组;QRT-PCR结果显示,肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平呈上升趋势,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。T-bet质粒干预组小鼠肿瘤生长明显缓慢,存活期延长。HE染色组织病理观察可见mT-bet干预组小鼠局部组织淋巴细胞大量浸润。结论:T-bet基因局部注射可延缓小鼠肺癌Lewis皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答能力,增强对已发肿瘤的生长限制作用,为T-bet应用于肿瘤治疗积累试验数据。
- 赵银霞王楷文杨恒郑东苏兆亮仝佳王胜军许化溪
- 关键词：肺癌细胞系质粒小鼠
- 小鼠GITRL基因的克隆和序列分析被引量：5
- 2004年
- 目的 :克隆小鼠GITRL基因全长编码区的cDNA ,同时对其序列分析。方法 :采用RT PCR方法 ,从小鼠树突状细胞获得GITRL基因的cDNA ,克隆至pMD18 T载体 ,选择阳性克隆并进行序列测定。结果 :扩增得到的GITRL基因编码区cDNA的全长 5 19bp ,编码 173个氨基酸残基 ,与GeneBank中发表的序列完全一致。结论 :获得小鼠GITRL基因的克隆 ,为进一步研究其生物学功能提供基础。
- 王胜军马斌仝佳许化溪杨胜利
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR调节性T细胞小鼠
- Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型IL-25表达水平的变化及意义被引量：9
- 2010年
- 目的以Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎模型为研究对象,动态观察其IL-25的表达水平,探讨IL-25与关节炎发生发展的关系及其可能的机制,为寻找新的类风湿性关节炎免疫干预新途径积累实验数据。方法采用RT-PCR法扩增目的基因,构建mIL-25标准质粒,QRT-PCR检测模型鼠脾脏及其关节病变局部IL-25的表达水平;应用ELISA技术检测模型鼠血清和脾细胞培养上清IL-25蛋白的含量。结果在Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎的发病过程中,模型鼠脾细胞和关节滑膜组织IL-25的mRNA表达水平、均呈持续上升趋势,与对照小鼠相比差异显著(P<0.05)。这种IL-25蛋白和转录水平的表达,随着关节炎症程度的增加而升高。此外,模型鼠脾细胞对ConA的刺激表现出强IL-25表达性应答。结论 IL-25的表达水平与Ⅱ型胶原诱导的关节炎的发生发展密切相关。
- 王楷文周成林王胜军赵银霞杨恒郑东薛渊Sandoghchian Siamak仝佳苏兆亮邵启祥许化溪
- 关键词：IL-25自身免疫性疾病
- 抗环瓜氨酸肽抗体、类风湿因子和白介素-17对类风湿关节炎的诊断意义被引量：4
- 2010年
- 目的:研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)和白介素-17(interleukin-17,IL-17)水平变化及临床应用价值。方法:收集80例RA患者血清,以80例健康体检者血清作对照。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清抗CCP抗体,IL-17含量,特种蛋白仪检测RF含量,并进行统计分析。结果:RA患者活动期上述指标的含量均显著高于稳定期和健康对照组(P<0.01)。RA患者组三项指标的阳性率明显高于正常对照组(P<0.01)。RF诊断RA的敏感性高于抗CCP抗体及IL-17,而抗CCP抗体对RA的特异性显著高于RF及IL-17。两两联合检测及三者联合检测敏感性较单独检测都有所减低,而特异性增高明显,三者联合检测,特异性达到100%。结论:动态监测抗CCP抗体、RF和IL-17有助于观察RA病情变化,提高RA诊断率。
- 张慧毛朝明蒋茜仝佳王胜军邵启祥许化溪焦志军
- 关键词：类风湿关节炎抗环瓜氨酸肽抗体类风湿因子白细胞介素-17
- 三种外周血扩增CIK细胞方法的比较研究被引量：5
- 2003年
- 目的 :比较三种方法扩增的外周血细胞因子诱导的杀伤细胞 (CIK细胞 )在增殖能力、细胞表型和细胞毒作用三方面的差异。方法 :用三种不同因子组合扩增CIK细胞 ,即IL 2组 :CD3单抗、IFN γ和IL 2 ;IL 1加IL 2组 :CD3单抗、IFN γ、IL 1和IL 2 ;IL 12组 :CD3单抗、IFN γ和IL 12。MTT法测定细胞增殖力 ,流式细胞术分析细胞表型 ,LDH释放法测定细胞毒作用。结果 :三种方法均可使细胞增殖能力显著增加 ,其中IL 12组促增殖能力及CD3+ 细胞所占比例低于另外两组 ,而CD5 6 + 细胞则多于另两组。IL 1和IL 2联合作用组CD4 + 细胞百分率高于其他两组 (P <0 .0 5 )。三种方法扩增的CIK细胞细胞毒性作用无明显差异。结论 :三种方法扩增的CIK细胞均可用于过继免疫治疗的研究。
- 王文红焦志军仝佳
- 关键词：白介素-1白介素-2白介素-12
- 小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2005年
- 目的:克隆小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的全长编码区cDNA。方法:利用RT-PCR方法,从Balb/c小鼠脾细胞的mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA,并将其连接到pGEM-T载体上,进行测序和核酸分析。结果:扩增得到的小鼠T-bet基因cDNA全长1 592 bp,编码530个氨基酸,包含一个189个氨基酸残基组成的能与T盒DNA结合的结构域;b last结果分析表明,该cDNA与Genbank中发表的序列具有99.8%的同源性。结论:获得小鼠T-bet基因的克隆,为进一步研究转基因免疫干预奠定了基础。
- 王锁英许化溪王胜军黄新祥仝佳王文兵陈巧林马斌眭建姜旭淦胡嘉波
- 关键词：T-BET基因克隆RT-PCR
- 人AITRL基因克隆和序列分析被引量：1
- 2006年
- 目的:克隆人AITRL基因cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从人脐静脉内皮细胞株中获得AITRL基因的cDNA,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和序列测定。结果:扩增得到的AITRL基因cDNA为534 bp,编码177个氨基酸残基,与GenBank中公布的序列完全一致。结论:获得人AITRL基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了良好基础。
- 毛朝明王胜军蒋茜马洁杨敏仝佳许小朋邱谷风唐莉邵启祥许化溪
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR人脐静脉内皮细胞
- 在翼状胬肉手术中应用自体角膜缘干细胞移植联合丝裂霉素C的疗效观察被引量：1
- 2005年
- 目的:评价自体角膜缘干细胞移植联合丝裂霉素C在翼状胬肉治疗中的临床疗效.方法:A组37例(48只眼)翼状胬肉(其中11例为复发性翼状胬肉)在手术显微镜下实施翼状胬肉常规切除联合丝裂霉素C(MMC)的治疗,然后行自体角膜缘干细胞移植.并与对照组B组35例(43只眼)行胬肉切除联合球结膜移植的病例比较.结果:随访4～26个月,门诊复诊A组未发现复发者,B组发现4例复发者.结论:自体角膜缘干细胞移植联合丝裂霉素C治疗翼状胬肉具有手术操作简单易行、安全可靠、术后复发率低等优点,是一种较为可行的临床治疗方法.
- 杨云良仝佳
- 关键词：翼状胬肉手术角膜缘干细胞丝裂霉素
