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牛血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定: 2007年; 用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A5、3A3、3G6、4A8。鉴定结果显示,2A5细胞分泌IgG2a/κ,其余3株细胞分泌IgG1/κ;纯化后4株腹水单抗的纯度达90%以上,对BSA的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;4株单抗均不与人以及马、猪、羊、兔、豚鼠等血清发生交叉反应;W estern B lotting试验证明4株单抗均识别分子量为68000的BSA;用间接ELISA法测定4株单抗相对亲和力及相对敏感度大小依次为3A3>2A5>3G6>4A8;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存半年后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。; 余健周志军彭祥兵朱华松施金荣余模松; 关键词：牛血清白蛋白单克隆抗体酶联免疫吸附试验

丙型肝炎病毒C区和NS3区嵌合基因的克隆及表达: 2006年; 目的获得丙型肝炎病毒(HCV)C-NS3嵌合抗原,以提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量。方法应用SOE-PCR(拼接重叠延伸PCR)的方法,构建了HCV的C区和NS3区的嵌合基因,克隆于表达载体pGEX-4T3,并转化于大肠杆菌BL21,经筛选,IPTG诱导HCV的C-NS3嵌合抗原的表达。经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测抗原特异性。结果SOE-PCR构建的HCV C区和NS3区嵌合基因在BL21中获得表达。经鉴定,其相对分子质量约为75000,并具有高度特异性。结论已获得HCV C-NS3嵌合抗原,为提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量奠定了基础。; 彭祥兵余健黄仕和周志军李健朱华松张爱华闭兰赵亚杰余模松; 关键词：嵌合基因丙型肝炎病毒

人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白双抗体夹心ELISA检测法的建立及验证: 2016年; 目的建立人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白（anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,ALG）双抗体夹心ELISA检测法,并进行验证。方法以兔抗猪Ig G包被酶标板,HRP酶标记的鼠抗猪Ig G为二抗,建立人血清中ALG含量的双抗体夹心ELISA检测法,并对方法中包被浓度及二抗浓度进行优化,同时验证该方法的重复性、敏感性、准确性、特异性及稳定性。采用优化后的方法对14位严重型再生障碍性贫血（severe aplastic anemia,SAA）患者进行ALG的血药浓度监测（therapeutic drug monitoring,TDM）。结果最佳包被浓度为1∶2 000,最佳二抗稀释度为1∶8 000。参考品浓度在4.9-5 000μg/ml范围内标准曲线的四参数Logistic曲线拟合较好,R2值为0.991 1,在4.9-156μg/ml范围内的线性拟合也较好,R^2值为0.991 5,批内重复性CV值均〈10%;其检测底限为0.39μg/ml;浓度为500、50及5μg/ml参考品的回收率为91.2%-107.0%;该方法可特异性检测出注射ALG患者血清中ALG含量;包被好的ELISA板及二抗、底物于4及37℃条件下分别保存1-3周及1-3 d后检测结果均较稳定。经DAS 3.1.4软件分析,14名经ALG治疗的SAA患者血清中ALG的曲线下面积（AOC）为（7.3±5.1）mg/（L·d）（95%CI）,半衰期（t1/2）为（20.65±38.67）d（95%CI）。结论该方法具有良好的重复性、准确度及稳定性,可用于ALG的TDM。; 刘雄余健姚晶黄梦; 关键词：酶联免疫吸附试验

抗人淋巴细胞免疫球蛋白的制备方法: 本发明提供了一种抗人淋巴细胞免疫球蛋白的制备方法，其步骤是：用人外周血T淋巴细胞或人胸腺细胞免疫健康猪，采集、分离出猪血浆，经20％乙醇制作后，用低温高转速离心机或压滤机分离出组分I+II+III沉淀，经14％乙醇制作后...; 余健吴笛宰家敏张伟华徐江峰; 文献传递

HCV的Core-NS3嵌合抗原在大肠杆菌中的表达、纯化及初步应用: 2006年; 用已经构建的含有HCV的Core-NS3(C33 c)嵌合基因的表达质粒pGEX TL1-2在大肠杆菌中进行了高效表达,表达产物纯化后通过SDS-PAGE、W estern-b lot、ELISA等一系列鉴定试验进行了分析,结果表明,该嵌合抗原具有高度特异性和良好的抗原活性,为研制诊断用HCV抗原奠定基础。; 彭祥兵周志军桑爱军余健黄仕和余模松; 关键词：HCV

抗人淋巴细胞免疫球蛋白的制备方法: 本发明提供了一种抗人淋巴细胞免疫球蛋白的制备方法，其步骤是：用人外周血T淋巴细胞或人胸腺细胞免疫健康猪，采集、分离出猪血浆，经20％乙醇制作后，用低温高转速离心机或压滤机分离出组分I+II+III沉淀，经14％乙醇制作后...; 余健吴笛宰家敏张伟华徐江峰; 文献传递

低温乙醇法纯化抗人T细胞猪免疫球蛋白的研究被引量：9: 2008年; 用健康人T淋巴细胞免疫猪,检测指标合格后采集猪血浆,经热吸收去除相应的杂抗体后,用改进的低温乙醇法分离纯化得到抗人T细胞猪免疫球蛋白。试生产5批,其主要质量指标均符合《中国药典》的要求,表明改良的低温乙醇法可用于纯化抗人T细胞猪免疫球蛋白。; 余健吴笛宰家敏徐江峰; 关键词：质量指标

一种辅助SNT测定人特异性免疫球蛋白抗体效价的ELISA方法的建立被引量：5: 2007年; 利用已建立的抗破伤风类毒素和抗狂犬病病毒的抗体半定量检测ELISA试剂,建立检测人特异性免疫球蛋白半成品和成品效价的可靠方法,依靠统计分析技术,推算出抗体ELISA效价,发现其与小鼠血清中和试验(SNT)检测的抗体效价的相关性和一致性极好,可用于ELISA对SNT的稀释范围的确定,提高其准确性,还可部分替代SNT对生产过程进行监控,缩短生产时间。; 余健吴笛周志军王平陈雪婷张智; 关键词：ELISA

人抗乙脑病毒IgG抗体检测试剂盒的研制和应用被引量：4: 2006年; 乙脑病毒SA14-14-2株疫苗原液经β丙内酯灭活Sepharose 4FF纯化后作为包被抗原，制备阳性替代品，应用间接ELISA法检测人血清中乙脑病毒抗体。建立内部质量控制血清标准，比较蚀斑减少中和试验（PRNT）与ELISA的相关性。检测46份乙脑相关血清的结果与国内同类试剂进行比较，阳性符合率为93．1％，阴性符合率为89．5％。在成安地区3万多名2—14岁人群中进行乙脑病毒IgG抗体水平普查，阳性率22．5％，与国内同类试剂的符合率为95．7％，使用效果很好。; 周志军余健朱华松吕文莉阳万高孙文程均福闽宏亮; 关键词：间接ELISA

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余健

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