冯英才
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白及其制备方法
- 一种杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白的制备和鉴定方法。利用简并寡核苷酸PCR法以及cDNA末端快速扩增法（RACE），能够获得新的杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白的cDNA序列。该蛋白可在大肠杆菌和/或哺乳动物细胞中表达，它定位...
- 薛乐勋王天云潘卫东王亚峰姬翔冯英才王鹏举柴玉荣侯桂琴
- 文献传递
- 杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白。方法:根据GenBank上杜氏盐藻MAR结合蛋白的cDNA全长序列设计出含有特定酶切位点的引物,PCR法获得MAR结合蛋白基因序列全长,将其克隆至载体pMD18-T中。酶切连接到pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-MBP,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,Western blotting检验其表达结果。结果:重组质粒经酶切、PCR、测序鉴定,成功构建了原核表达载体pET-MBP,对表达的融合蛋白的Western blotting分析结果表明表达的蛋白质为目的蛋白。Ni2+亲和层析法纯化蛋白质,纯化后目的蛋白在总蛋白中的含量约为70%。结论:成功地克隆杜氏盐藻MAR结合蛋白基因的全长并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,且纯化了MAR结合蛋白的融合蛋白。
- 冯英才王天云王鹏举刘红涛刘兰琦薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻核基质附着区原核表达
- 杜氏盐藻核基质结合区结合蛋白的细胞定位被引量：2
- 2009年
- 为研究核基质结合区结合蛋白的功能及调控机制,PCR扩增杜氏盐藻MBP的cDNA全长序列及N端和C端序列,与绿色荧光蛋白基因融合构建真核表达载体,脂质体转染CHO细胞,Western blotting和荧光显微镜检测基因表达情况和细胞定位。结果显示:MBP及N端和C端融合蛋白成功在CHO细胞表达,MBP和C端部分定位于细胞核且聚集于核仁,N端部分分布整个细胞,说明MBP定位于细胞核且细胞定位信号位于C端,MBP可能与rRNA前体结合发挥作用。
- 王鹏举王天云冯英才刘红涛薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻核基质附着区真核表达载体细胞定位
- 杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列驱动bar基因的表达
- 2008年
- 目的:探讨杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列(Pnr)是否可以驱动外源基因在杜氏盐藻中的表达。方法:利用改进的重叠区扩增基因拼接法(SOEing),将杜氏盐藻NR基因5′上游序列(Pnr)与除草剂抗性基因bar融合。同时将NR基因3′端序列(Tnr)与克隆载体pEGM-7zf连接,构成中间载体pEGM-7zf-Tnr。最后将融合片段Pnr-Tnr与中间载体连接,构建含Pnr-bar-Tnr表达盒的盐藻真核表达载体p7NBT。电击法转化杜氏盐藻,通过草丁膦培养筛选转化藻株后对其进行分析。结果:转化藻株总RNA的RT-PCR结果扩增出与bar基因序列完全一致的目的片段。结论:杜氏盐藻NR基因Pnr能够驱动外源基因bar的转录。
- 闫红霞李杰王莉莉冯英才曲东京薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻硝酸还原酶BAR基因
- 杜氏盐藻MAR序列结合蛋白的原核表达及功能初步分析
- 核基质附着区/(matrix attachment regions，MARs/)又被称作核骨架附着区/(scaffold attachment regions，SARs/)，是染色质被限制性酶消化后仍然结合在核基质上的D...
- 冯英才
- 关键词：杜氏盐藻核基质附着区原核表达
- 文献传递
