刘兆良
- 作品数：20 被引量：150H指数：8
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- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
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- 猪肥胖基因在大肠杆菌中的高效融合表达被引量：2
- 2001年
- 采用PCR方法扩增猪肥胖基因编码的成熟蛋白cDNA序列 ,并在 5′端加上BamHⅠ位点 ,3′端加上EcoRⅠ位点 ,将 5′端密码子CCC转变为大肠杆菌常见密码子CCG ,扩增得到 4 5 9bp的片段 ,克隆于融合表达载体pGEX 2TBamHⅠ和EcoRⅠ位点 ,酶切、测序正确 ,经 0 1mmol/LIPTG诱导表达出一条约 4 2kD的融合蛋白 ,其中 2 6kD为 pGEX 2T中带有的谷胱苷肽转移酶 ,16kD是猪肥胖基因表达产物瘦蛋白。利用非融合表达产品制备抗血清 ,检测融合表达的重组蛋白 ,Western blot为阳性。
- 昔奋攻李宁戴茹娟刘兆良吴常信
- 关键词：肥胖基因大肠杆菌
- 猪腮腺分泌蛋白基因序列和蛋白结构比较分析及组织表达谱鉴定被引量：5
- 2003年
- 腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)是唾液中特异性高表达的一种蛋白,其功能与抗菌有关。根据人、牛和鼠的PSP基因cDNA序列设计简并引物,通过3’和5’RACE获得猪PSP基因全长cDNA序列。同源性分析表明,在核苷酸和氨基酸水平上,猪、人和牛PSP基因同源性较高。在蛋白二级和三级结构上,猪与人PSP的结构也非常相像,与抗菌蛋白BPI结构类似。蛋白功能分析发现,猪PSP基因氨基末端含有一个特殊结构Leu-X(6)-Leu-X(6)-Leu-X(7)-Leu-X(6)-Leu-X(7)-Leu-X(6)-Leu-X(6)-Leu,可能对其功能有一定的意义。通过RT-PCR,斑点杂交和Northern杂交,证明猪PSP基因是组织特异性表达,只在腮腺和下颌下腺表达。
- 尹海芳樊宝良赵志辉刘兆良费菁李宁
- 关键词：基因序列组织表达谱唾液
- 高效表达人乳铁蛋白等药用保健蛋白的奶牛乳腺生物反应器
- 李宁戴蕴平汤波龚国春张磊连正兴王莉莉王海萍刘颖孙秀柱樊宝良赵志辉郑敏李荣谢媛王美丽刘兆良赵春江于政权于舒洋许宏涛杨鹏华王建武赵永辉丁方荣李燕李京胡晓湘孟庆勇费菁朱化彬雷臣
- 动物乳腺生物反应器是一种利用动物转基因技术在乳腺细胞中特异高效表达多肽药物、疫苗、抗体和营养等蛋白的技术，具有效率高，成本低，表达的重组蛋白具有天然生物活性等特点，已经成为目前研究和应用最为广泛的一类生物反应器。人乳铁蛋...
- 关键词：
- 关键词：人乳铁蛋白
- 人乳铁蛋白基因调控区的序列分析
- 刘兆良
- 关键词：乳铁蛋白基因调控区
- 鸡下丘脑cDNA文库的构建及部分克隆ESTs序列初步分析被引量：17
- 2001年
- 以鸡下丘脑为实验材料，以λｇｔ１０为载体，构建了鸡下丘脑ｃＤＮＡ文库。结果表明，文库的滴度为３．８×１０６，重组率为８０％，插入片段大小集中在１．０～３．０ｋｂ之间。从ｃＤＮＡ文库中随机挑取１０个克隆，并对其ＥＳＴｓ进行了测定和初步分析。经ＢＬＡＳＴｎ和ＦＡＳＴＡ３分析后发现，４个ＥＳＴｓ在鸡中已有同源序列，４个在人或其他物种中也可以找到同源序列，有两个为未知功能基因。所测１０个ＥＳＴｓ序列均已录入ＧｅｎＢａｎｋ。
- 赵志辉李宁刘兆良张玉静吴常信
- 关键词：下丘脑CDNA文库表达序列标签功能基因
- 鸡类胰岛素生长因子-Ⅱ基因单核苷酸多态与生长、屠体性状相关性的研究被引量：45
- 2002年
- 以鸡类胰岛素生长因子 -Ⅱ (IGF -Ⅱ )基因作为控制鸡生长、屠体性状主基因的候选基因 ,以明星肉鸡和丝毛乌骨鸡杂交产生的F2 代鸡群为实验材料。通过PCR -RFLP方法对IGF -Ⅱ基因进行多态性检测。在该基因外显子 2中发现一处碱基突变 ,可由内切酶Aci-Ⅰ酶切证实 ,但未导致氨基酸改变。对F2 鸡群个体进行了基因型鉴定 ,结果经方差分析显示 :该基因对一些生长、屠体性状有显著性影响 (如胸角宽、腺胃重、半净膛重等 )。表明该基因可能调控鸡生长、屠体性状的表达 ,或与控制生长、屠体性状的主基因连锁。
- 颜炳学李宁邓学梅胡晓湘刘兆良赵兴波连正兴吴常信
- 关键词：单核苷酸多态屠体性状生长性状
- 猪肝脏组织表达序列标签(ESTs)的初步分析被引量：10
- 2002年
- 构建了猪肝脏组织cDNA文库 ,并对文库中随机挑选的 4 38个克隆的表达序列标签 (ESTs)进行了研究。结果表明 ,在所研究的 4 38个ESTs中 ,186个在猪种中已有匹配序列 ,37个在人类及其它物种中可以找到同源序列 ,2 15个为未知功能基因。试验还测定了文库中 4 5个cDNA克隆的全长插入序列 ,结果表明 ,19个为已知功能基因 ,11个没有发现开放阅读框 ,其它 15个具有开放阅读框 ,但基因的功能未知。这些结果初步代表了肝脏组织的功能基因表达谱。
- 李宁赵志辉刘兆良赵兴波连正兴吴常信
- 关键词：肝脏组织表达序列标签ESTSCDNA文库功能基因组
- 利用体细胞克隆技术进行大家畜转基因的研究进展
- 体细胞克隆技术与体细胞基因转移技术相结合形成的转基因克隆技术为生产转基因动物和对大动物进行基因组定点修饰开辟了一条有效的崭新途径。近年来,随着绵羊、牛、山羊、猪、马等大家畜被逐一成功克隆,该技术在制备转基因大家畜的巨大应...
- 龚国春戴蕴平朱化彬连正兴赵志辉樊宝良刘兆良李宁
- 关键词：体细胞克隆动物转基因细胞转染基因打靶
- 文献传递
- 水牛DGAT1基因克隆及SNP分析
- DGAT1基因编码脂酰辅酶A:甘油二脂酰基转移酶,是乳胀率的一个功能候选基因。本实验完成了广西水牛DGAT1基因的测序,并用单核苷酸构象多态（SSCP）方法研究序列的变异。在28个水牛个体中分析了共覆盖1.3Kb的八个扩...
- 周军刘兆良胡晓湘李宁
- 关键词：水牛DGAT1SSCPSNP
- 文献传递
- 鸡脂肪酸结合蛋白基因的克隆和测序分析被引量：24
- 2002年
- 根据哺乳动物脂肪酸结合蛋白基因序列设计一对引物对鸡基因组进行PCR扩增 ,将 16 3bp扩增片段进行克隆和测序 ,并与猪的脂肪酸结合蛋白 (fattyacidbindingprotein ,FABP)基因序列进行同源性比较 ,该基因片段与猪的心脏脂肪酸结合蛋白 (heartfattyacidbindingprotein ,H FABP)基因有 6 8%的同源性 ,与猪的脂肪型脂肪酸结合蛋白(adipocytefattyacidbindingprotein ,A FABP)基因有 75 %的同源性 ,演绎成氨基酸之后与猪的脂肪型脂肪酸结合蛋白相应的氨基酸有 75 %的同源性。
- 王启贵李宁邓学梅顾志良刘兆良李辉陈志强连正兴吴常信
- 关键词：单链构象多态性克隆测序
