刘洪斌
- 作品数：12 被引量：111H指数：6
- 供职机构：中国中医科学院中医药信息研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 白细胞介素1β刺激对脑微血管内皮细胞COX活性、mRNA表达和PGE_2释放的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨白细胞介素1β(IL-1β)刺激不同时间对大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)的环氧合酶(COX)活性及其mRNA表达和PGE2释放的影响。方法:建立rCMEC培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。细胞长至融合状态后加入IL-1β(30μg/L),分别刺激0.5、1、2、4、8、12、24 h,ELISA测定细胞内COX-1、COX-2的活性及细胞外液PGE2含量,荧光实时定量PCR检测COX-1、COX-2的mRNA表达量,扩增产物进行熔解曲线图及琼脂糖电泳分析,并与未刺激的rCMEC作比较。结果:①Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见90%以上的培养细胞呈阳性,确认为rCMEC。②IL-1β刺激4 h时细胞培养液PGE2含量已明显高于未刺激组(P<0.05);12 h时PGE2含量达到最大值(P<0.01);24 h时PGE2含量有所回降,但与未刺激组比较仍有显著差异(P<0.05)。③IL-1β刺激不同时间rCMEC内COX-1活性与未刺激组相比无统计学差异(P>0.05);COX-2活性在第8 h时已明显高于未刺激组(P<0.05),12 h活性达峰值(P<0.01),24 h活性有所回降,但仍具显著差异(P<0.05)。④IL-1β刺激不同时间COX-1 mRNA表达与未刺激组比较无明显差异(P>0.05);未刺激组在本实验条件下未检测到COX-2 mRNA表达,IL-1β刺激1h时可见COX-2 mRNA表达,4 h时COX-2 mRNA表达至峰值,而后开始回降,第12 h时已未见表达。熔解曲线图显示无非特异性扩增;琼脂糖电泳可见扩增基因与目的基因长度相符,结果与荧光定量PCR一致。结论:IL-1β作用下,rCMEC释放的PGE2持续增加并于12h达峰值,这一过程主要与COX-2 mRNA表达激活及COX-2活性增加有关。
- 郭建友霍海如赵保胜刘洪斌李兰芳郭淑英姜廷良
- 关键词：白细胞介素1内皮细胞前列腺素E类环氧合酶-2
- 邻甲氧基桂皮醛对IL-1刺激脑微血管内皮细胞COX活性及PGE_2释放的影响被引量：3
- 2006年
- 目的:观察桂枝汤有效部位A分离的邻甲氧基桂皮醛对发热相关的环氧酶(COX)和前列腺素E2(PGE2)的影响。方法:建立大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞生长至融合状态后加入不同含量的邻甲氧基桂皮醛(12.5,25,50,100,200μg.mL-1)孵育3 h,之后以30 ng.mL-1的IL-1刺激12 h。ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1和COX-2的活性。结果:Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见90%以上的培养细胞呈阳性,确认为rCMEC。暴露于30 ng.mL-1IL-1后,rCMEC内COX-2活性及释放的PGE2量显著增加,COX-1活性变化无统计学差异。加入不同含量的邻甲氧基桂皮醛后,随含量增加可下调COX-1,COX-2活性及PGE2量,且呈剂量依赖关系;至含量为200μg.mL-1时,COX-2活性及释放的PGE2与IL-1单独作用组相比均有显著性差异,COX-1活性虽有所降低,但无统计学上的显著差异。结论:邻甲氧基桂皮醛能下调IL-1刺激rCMEC释放升高的PGE2,作用机制可能与抑制COX-2活性有关。
- 郭建友杨元宵赵保胜刘洪斌李兰芳马悦颖郭淑英霍海如姜廷良
- 关键词：脑微血管内皮细胞白介素1环氧酶前列腺素E2
- 桑菊饮含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体表达的影响被引量：12
- 2010年
- 目的：研究桑菊饮对小鼠肺巨噬细胞株RAW264.7表达Toll样受体（TLR）的影响。方法：用桑菊饮含药血清作用于正常RAW264.7细胞,24 h后以荧光定量PCR方法测定TLR-1-TLR-9 mRNA的表达,探讨桑菊饮对Toll样受体表达的影响。结果：桑菊饮含药血清在一定剂量（7.7 g.kg-1.U-1）时,可以促进TLR-4和TLR-7的表达,而对TLR-1,TLR-2,TLR-3,TLR-5,TLR-6,TLR-8和TLR-9的表达没有明显影响。结论：桑菊饮的药效学作用可能与促进Toll样受体某些亚型表达有关。
- 杜新亮隋峰张畅斌赵保胜刘洪斌闫美娟李兰芳郭淑英霍海如姜廷良
- 关键词：桑菊饮含药血清肺巨噬细胞TOLL样受体7
- 桂皮醛对IL-1刺激下脑微血管内皮细胞COX-1、COX-2活性及释放PGE2的影响
- 本研究通过体外培养大鼠脑微血管内皮细胞(rCMECs),观察了IL-1作用下,桂皮醛对发热信号传导通路上关键酶COX-1、COX-2及PGE2的影响,探讨了其对机体体温的影响及其作用环节。
- 郭建友霍海如刘洪斌赵保胜李兰芳郭淑英姜廷良
- 关键词：体温调节血管细胞
- 文献传递
- 桂皮醇对IL-1刺激脑微血管内皮细胞COX活性及PGE_2释放的影响被引量：14
- 2006年
- 目的观察桂枝汤中分离获得的单体成分桂皮醇对发热相关的环氧酶(COX)和前列腺素E2(PGE2)的影响。方法建立大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞生长至融合状态后加入不同终浓度的桂皮醇(0.093,0.186,0.372,0.744,1.488 mmol.L-1)孵育3 h,之后以30μg.L-1的IL-1刺激12 h。ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1,COX-2的活性。结果Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见95%的培养细胞呈阳性,确认为rCMEC。暴露于质量浓度为30μg.L-1IL-1后,rCMEC内COX-2活性及释放的PGE2量显著增加(P<0.01),COX-1活性变化无统计学差异(P>0.05)。加入不同浓度的桂皮醇后,随浓度增加可下调COX-1、COX-2活性及PGE2量,且呈浓度依赖关系;至浓度为0.744mmol.L-1时,COX-2活性及释放的PGE2与IL-1单独作用组相比均有显著性差异(P<0.05),COX-1活性虽有所降低,但无统计学上的显著差异(P>0.05)。结论桂皮醇能下调IL-1刺激rCMEC释放升高的PGE2,作用机制可能与抑制COX-2活性有关。
- 郭建友杨元霄赵保胜刘洪斌李兰芳郭淑英霍海如姜廷良
- 关键词：脑微血管内皮细胞白介素1环氧酶前列腺素E2
- 白细胞介素1β刺激脑微血管内皮细胞内15-羟基前列腺素脱氢酶的经时变化被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨白细胞介素1β(IL1β)刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)15羟基前列腺素脱氢酶(15PGDH)活性的经时变化。方法:建立rCMEC培养方法,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞长至融合状态后,以30ng/ml浓度的IL1β分别刺激0.5、1、2、4、8、12、24h,以放射免疫法测定各刺激时间点15PGDH活性。结果:90%以上的培养细胞呈阳性,确定为rCMEC。加入IL1β刺激后2h,细胞内15PGDH活性与未刺激组比较有显著性差异(P<0.05);12h时达到最大值;24h时有所降低,但与未刺激组比较仍具显著性差异(P<0.01)。结论:rCMEC经IL1β刺激后,细胞内15PGDH活性经历一个逐渐升高,到达峰值后缓慢下降的过程,IL1β刺激12h内皮细胞15PGDH活性达峰值。
- 郭建友马悦颖杨元宵赵保胜刘洪斌李兰芳郭淑英霍海如姜廷良
- 关键词：白细胞介素1Β脑微血管内皮细胞15-羟基前列腺素脱氢酶
- 黄连解毒汤含药血清对Toll样受体34、型及其下游信号转导通路的影响被引量：24
- 2007年
- 目的:研究黄连解毒汤含药血清对细菌脂多糖和双链RNA病毒核酸类似物聚肌胞刺激的小鼠巨噬细胞株RAW264.7 Toll样受体(TLR)及其下游主要信号转导通路的影响。方法:用脂多糖、聚肌胞分别刺激RAW264.7细胞,同时给予黄连解毒汤含药血清进行干预,24 h后,取细胞培养上清液,ELISA法测定炎症因子TNF-α和IFN-β的含量,荧光定量PCR方法测定TLR3、TLR4和下游信号转导通路髓样分化因子88(MyD88),肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6),TOLL样受体相关分子(TRAM)和TOLL样受体相关的干扰素活化子(TRIF)mRNA的表达,Western blotting法分析TLR3、TLR4蛋白的表达,同时用细胞免疫荧光法分析MyD88,TRAF-6蛋白表达的强弱,在mRNA水平和蛋白水平探讨黄连解毒汤对Toll样受体的作用机理。结果:黄连解毒汤含药血清显著降低LPS诱导的TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM和TRlF的高表达(与单纯LPS刺激组比较,P<0.05或P<0.01);Poly(I:C)刺激后,黄连解毒汤含药血清仅对TRAM利TRIF的表达有明显的降低作用(P<0.01)。结论:黄连解毒汤能阻断TLR4高表达,阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖和非依赖两条途径(以阻断非依赖途径为主),抑制相关基因表达产物TNF-α、IFN-β过度分泌,具有TLR4拮抗剂样作用。黄连解毒汤也可直接作用于接头蛋白TRAM和TRIF,影响TLR3信号转录的MyD88非依赖性途径,抑制IFN-β的过度分泌。
- 赵保胜刘洪斌马悦颖隋峰李兰芳郭淑英何希荣霍海如姜廷良
- 关键词：黄连解毒汤含药血清肺巨噬细胞
- 桂皮醛对IL-1刺激下脑微血管内皮细胞COX-1、COX-2活性及释放PGE_2的影响被引量：18
- 2005年
- 目的观察从桂枝汤中分离出的单体桂皮醛对白细胞介素1(IL-1)刺激大鼠脑微血管内皮细胞(rCMECs)与发热有关的信号转导通路上关键信号元件环氧酶(COX)和前列腺素E2(PGE2)的影响。方法建立rCMECs培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞生长至融合状态后加入不同浓度的桂皮醛(12.5、25、50、100及200mg/L)孵育3h,随后以30ng/ml的IL-1刺激12h。ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1、COX-2的活性。结果Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见95%以上为阳性细胞,证实为rCMECs。暴露于浓度为30ng/ml IL-1后,rCMECs内COX-2活性及释放的PGE2量显著增加(P<0.01),COX-1活性无明显变化(P>0.05)。加入不同浓度的桂皮醛后,随浓度增加而下调IL-1升高的COX-1、COX-2活性及PGE2量,且呈一定的浓度依赖关系;至浓度为100mg/L时,COX-2活性及释放的PGE2与IL-1单独作用组比较差异均有显著性差异(P<0.05),COX-1活性无明显变化(P>0.05)。结论桂皮醛能下调IL-1刺激下rCMECs释放的PGE2,作用机制可能与抑制COX-2活性有关。
- 郭建友霍海如刘洪斌赵保胜李兰芳郭淑英姜廷良
- 关键词：桂皮醛脑微血管内皮细胞白介素1环氧酶
- 清胰汤对急性出血坏死性胰腺炎肺损伤的治疗机理研究
- 目的:探讨清胰汤对急性出血坏死性胰腺炎肺损伤的治疗机理。方法:健康Wistar大鼠,随机分为4组:假手术组、模型组、清胰汤组、善宁组。经胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠(1ml／kg, 0．1ml／min)诱发急性出血坏死性...
- 刘洪斌崔乃强李东华王倩薛小平张艳萍
- 文献传递
- 白细胞介素1β刺激脑微血管内皮细胞释放前列腺素E_2的经时变化被引量：5
- 2005年
- 目的:探讨白细胞介素1β(IL1β)刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞释放前列腺素E2(PGE2)的经时变化。方法:30ng/ml浓度的IL1β刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞,分别于刺激后0.5、1、2、4、8、12和24h收集细胞外液,用酶联免疫法(ELISA)测定各时间点细胞外液PGE2含量,并对各相应时间点的内皮细胞进行细胞计数。结果:①空白组内皮细胞计数值随时间延长而持续性增加,12h趋于稳定;IL1β刺激组细胞计数值随时间延长也相应增加,12h基本趋于稳定,虽各时间点细胞数绝对值略少于空白组,但两者无统计学差异(P>0.05)。②由于细胞的不断生长,空白组PGE2含量也在不断地增加,12h为(10.80±1.46)pg/ml,达最大值,24h为(9.72±2.78)pg/ml,有所下降。加入IL1β刺激后8h,细胞外液PGE2含量已开始明显增加,12h为(16.93±2.98)pg/ml,达最大值,与空白组比较,有显著性差异(P<0.01);24h为(16.82±1.54)pg/ml,虽有所降低,但与空白组比较,仍具显著性差异(P<0.01)。结论:大鼠脑微血管内皮细胞经IL1β刺激后,细胞释放的PGE2在12h达峰值,以后缓慢下降。
- 郭建友霍海如赵保胜刘洪斌李兰芳郭淑英姜廷良
- 关键词：白细胞介素1Β脑微血管内皮细胞前列腺素E2
