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刘祥: 作品数：45 被引量：168H指数：8; 供职机构：陕西理工大学更多>>; 发文基金：陕西省教育厅科研计划项目国家大学生创新性实验计划陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>; 相关领域：生物学农业科学医药卫生自动化与计算机技术更多>>

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荧光假单胞菌SlyB的原核表达、抗原性分析及抗血浆杀菌作用被引量：3: 2022年; 采用生物信息学方法分析SlyB的理化性质,分子克隆表达纯化获得SlyB蛋白并免疫小鼠制备SlyB抗血清,Western blotting检测抗血清特异性与效价,免疫酶联法模拟SlyB抗血清对鱼类主要致病菌的体外免疫识别作用,Western blotting分析SlyB蛋白抵抗鱼血浆的杀菌作用。结果显示:SlyB蛋白在假单胞菌属和杆菌属间同源性较好;获得SlyB最佳诱导表达条件;验证SlyB抗血清特异性较好,效价达到1∶12800;ELISA显示SlyB抗血清对嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌和溶藻弧菌存在免疫识别作用,Western blotting表明SlyB蛋白对细菌抵抗鱼血浆的杀菌作用呈下调趋势。表明SlyB蛋白具有较好的抗原性,在蛋白亚单位疫苗上有应用前景。; 孙薇荣娜简思杰晁嘉刘祥丁锐陈锐; 关键词：荧光假单胞菌

罗文莎叶挥发油的化学成分及抑菌与酶抑制作用被引量：2: 2021年; 利用气相色谱—质谱(GC-MS)联用仪测定罗文莎叶挥发油的化学组成;采用纸片扩散法和微量肉汤稀释法进行体外抑菌试验,并测定罗文莎叶挥发油对胰脂肪酶和α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果。结果表明,罗文莎叶挥发油中共检出17种化学成分,占挥发油总量的98.5%,主要组分为桉叶油醇(30.89%)、樟脑(21.67%)、香树烯(12.38%)、对伞花烃(10.14%)、β-蒎烯(6.01%),挥发油对18种供试菌株的最小抑菌浓度为1.25~40.00mg/mL。当质量浓度为100mg/mL时,对胰脂肪酶和α-葡萄糖苷酶活性的抑制率分别为84.50%,93.67%,半数抑制浓度分别为37.20,6.81mg/mL。罗文莎叶挥发油的主要化学成分为萜类、醇类及芳香烃等,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均具有显著抑制效果,对胰脂肪酶活性抑制作用稍差,对α-葡萄糖苷酶抑制活性较强。; 李佳楠陈小华陈小华刘祥刘祥张小莺; 关键词：挥发油 GC-MS 抑菌活性脂肪酶 Α-葡萄糖苷酶

天麻多糖的分离纯化与抗氧化活性研究被引量：23: 2018年; 目的从天麻中分离纯化出活性多糖并考查其抗氧化活性。方法用水提醇沉法提取天麻粗多糖,Sevage法脱去其中的蛋白质,依次通过D101大孔吸附树脂、DEAE-52离子交换色谱及Sephadex G-100凝胶色谱纯化,得到2个天麻多糖(GEP):GEP1-G和GEP2-G,测定其清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基的能力,以评价其抗氧化作用。结果天麻中粗多糖提取率为5.6%,经D101大孔吸附树脂纯化后,粗多糖中多糖含量为65.7%;DEAE-52纯化后,有6个洗脱组分GEP 1~6;组分GEP1和GEP2再经Sephadex G-100纯化得到纯品多糖GEP1-G和GEP2-G,其多糖含量分别是97.3%和98.1%。在抗氧化活性实验中:当GEP1-G和GEP2-G浓度为1 mg·mL^(-1)时,两者对DPPH的清除率分别为44.50%和25.60%,对超氧阴离子抑制率分别为33.32%和21.55%,对羟自由基抑制率分别为39.50%和22.80%。结论通过大孔吸附树脂、离子交换色谱和凝胶过滤色谱得到了纯品天麻多糖,其具有一定的抗氧化作用。; 陈琛李鑫鑫徐尤美蔺蓓蓓周天华刘祥郑红星吴三桥曹军毅胡红忠; 关键词：天麻多糖纯化抗氧化活性

大肠杆菌外膜蛋白OmpC的生物信息学分析及表位多肽疫苗的重组预测被引量：5: 2017年; 为设计大肠杆菌外膜蛋白OmpC的表位多肽重组疫苗,进一步提高OmpC蛋白的免疫效果,通过生物信息学软件对OmpC蛋白的进化关系、高级结构与细胞表位进行分析。结果表明,大肠杆菌、沙门伤寒菌、肺炎克雷伯菌,这3种细菌具有较高同源性,OmpC蛋白可能对这3种菌株的感染起到交叉免疫保护作用。OmpC为亲水性蛋白,1~21位氨基酸为信号肽位置,无跨膜结构并定位于细胞膜外;OmpC二级结构中含无规则卷曲43.05%,a-螺旋16.08%,β-转角0%,β-片层40.87%。OmpC蛋白可能存在5个优势B细胞表位,1个CTL表位,1个Th细胞表位;并重组拼接获得抗原性较好的OmpC蛋白表位多肽。; 俱雄党亚锋刘祥丁锐陈琛冯自立张辰露; 关键词：表位疫苗抗原分析

重组大肠埃希菌外膜蛋白C的表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：2: 2015年; 采用分子克隆方法获得大肠埃希菌外膜蛋白Omp C表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得Omp C蛋白,免疫小鼠制备Omp C蛋白多克隆抗体。ELISA法证实Omp C抗血清滴度达1∶6 400倍,Western blotting发现Omp C抗血清具有很好的特异性。通过DNAMAN软件对Omp C序列同源性分析显示不同细菌间存在较高同源性,采用MEGA软件对Omp C的系统进化分析发现肠道致病菌亲缘关系更近。为Omp C蛋白免疫学功能研究奠定基础。; 俱雄陈春琳刘祥王成祥王令吴三桥张涛; 关键词：多克隆抗体 WESTERN BLOTTING

秦岭绿茶茶多酚抑菌活性及其机理研究被引量：20: 2019年; 【目的】明确秦岭绿茶茶多酚的抑菌活性及其机理,为其应用提供理论依据。【方法】将秦岭绿茶以3种方法提取,大孔树脂纯化得到茶多酚。超高效液相色谱(UPLC)测定茶多酚中儿茶素含量,薄层琼脂糖孔穴扩散法、肉汤稀释法测定抑菌活性。以茶多酚和细菌作用前后细菌培养液中的电导率、蛋白质浓度及碱性磷酸酶活性的变化探究茶多酚的抑菌机理。【结果】水浴、超声和微波辅助法提纯的茶多酚得率分别为11.25%、12.5%和16.5%。UPLC测定3种方法提纯的儿茶素含量分别为502.8、579.2、568.1 mg/g。茶多酚对16株菌株的抑菌圈范围为6.9~18.4 mm,最小抑菌浓度(MIC)为0.0625~2 mg/mL。茶多酚与细菌作用后细菌培养液的电导率、蛋白含量及碱性磷酸酶活性均增大,表明茶多酚作用于细菌后可破坏细胞膜的结构、使细胞膜通透性增加,导致细胞内容物外泄。【结论】微波辅助法提取率较高,秦岭绿茶茶多酚对标准株和临床致病菌均有较好的抑菌作用。; 陈琛徐尤美蔺蓓蓓景娴刘祥付静江海郑红星; 关键词：茶多酚抑菌活性抑菌机理最小抑菌浓度

一种溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核载体构建方法: 本发明公开了一种溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核载体构建方法，包括如下步骤：S1、根据NCBI公布的基因序列，设计ompK基因引物；S2、提取溶藻弧菌基因组DNA；S3、以溶藻弧菌基因组DNA为模板，进行ompK基因的PCR...; 刘祥陈春琳俱雄; 文献传递

福氏志贺菌2a型外膜蛋白A的生物信息学分析与重组表位疫苗分子的设计被引量：1: 2016年; 福氏志贺菌外膜蛋白OmpA（outer membrane protein A）具有较强的免疫原性,在疫苗上有应用前景。采用MEGA（molecular evolutionary genetics analysis）软件对OmpA的系统发生分析显示,福氏志贺菌与肠道细菌间亲缘关系较其它菌属更近。利用在线软件预测OmpA为亲水的分泌型蛋白,存在多个酶切位点;采用TMHMM（transmembrane hidden markov models）Server v.2.0程序预测OmpA无跨膜结构并定位于细胞膜外;SOPMA（self-optimized prediction method with alignment）服务器预测OmpA二级结构中含无规则卷曲41.09%,α-螺旋26.44%,β-转角10.06%,β-片层22.41%。通过Signal P 4.1软件分析显示,OmpA的1~21位氨基酸为信号肽序列。采用SwissModel程序预测的三维模型显示OmpA为桶装结构。利用ABCpred（artificial neural network based B-cell epitope prediction）和Bepi Pred（B-cell epitopes prediction）方案,预测OmpA存在3个B细胞表位。运用神经网络与量化矩阵法预测OmpA具有1个CTL表位。使用MHC-Ⅱ类分子结合肽在线程序预测显示OmpA具有1个Th表位。设计获得抗原性较好的OmpA蛋白重组表位多肽。为OmpA多表位串联疫苗的研究奠定基础。; 刘祥; 关键词：福氏志贺菌蛋白结构

奶牛乳房炎链球菌GapC蛋白的生物信息学分析与重组表位疫苗设计被引量：4: 2016年; 为设计奶牛乳房炎链球菌GapC蛋白的多表位串联疫苗,进一步提高GapC蛋白的免疫效果,采用DNAMAN、MEGA软件分析GapC的同源性与系统发生,结果显示,不同种类链球菌亲缘关系均较近,尤其是与奶牛乳房炎有关的链球菌亲缘关系更近。利用在线软件预测GapC为亲水性蛋白,存在多个酶切位点;采用Signal P 4.1与TMHMM Server v.2.0软件预测GapC无信号肽和跨膜结构,定位于细胞表面;SOPMA服务器预测GapC二级结构中含无规则卷曲30.36%,α-螺旋33.93%,β-转角12.50%,β-片层23.21%。采用Swiss-Model预测的GapC三级结构与二级结构相符。利用ABCpred和Bepi Pred方案,预测GapC存在5个B细胞表位。运用神经网络与量化矩阵法预测GapC具有1个CTL表位。使用MHC-Ⅱ类分子结合肽在线程序预测显示GapC具有1个Th表位。采用DNASTAR Protean软件重组GapC抗原表位,设计获得抗原性较好的GapC重组表位多肽。; 孔智翔刘祥殴莎莎刘成艳同韩虎陈春琳陈琛吴三桥; 关键词：奶牛乳房炎链球菌蛋白结构

小鼠骨桥蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：5: 2015年; 为探索骨桥蛋白(OPN)调控骨代谢及与肿瘤的关系,本试验利用DNAMAN与Mega 5.02软件分析OPN蛋白系统进化关系;采用RT-PCR与分子克隆方法制备OPN蛋白表达载体;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素浓度梯度复性获得OPN蛋白,免疫小鼠制备OPN蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Western blotting检测抗血清特异性。OPN序列的同源性比对分析发现,在不同进化层次动物中均存在Arg-Gly-Asp(RGD)短肽重复序列;OPN序列系统进化分析显示,OPN在动物间具有明显的进化趋势;提取小鼠肝脏RNA,OPN重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果及蛋白表达、纯化条带大小均与预测一致;ELISA法确认OPN抗血清滴度达1∶1 600;Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。结果表明本试验对OPN序列进行了遗传进化分析,成功克隆、表达、纯化及复性OPN蛋白,并制备、鉴定了小鼠多克隆抗体。; 刘祥陈春琳王杨科俱雄吴三桥张涛; 关键词：多克隆抗体 ELISA WESTERN BLOTTING

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